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为叙述方便,本书SOP中所用到的溶液在文中用黑体标注,其配方紧跟其后括号内详注。因此,在进行实验前应该先通读整个SOP,并预先配制/准备SOP中每一个溶液和材料,才能保证实验顺利进行。SOP中用特殊标记凸显的文字注释,一定要注意阅读,这些注意事项都是至关重要的。部分SOP后面附加了实验中可能遇到的问题及解决方案,这些都是科研工作者遇到最多的问题,所以特别列出来。如果在进行实验中还有文中没有列出的或者其他SOP进行中遇到的问题都可以联系我们福因德技术团队(tech@friendbio.com )。
如果想要快速进入实验,请从每章内容里面的SOP开始,以节约您的时间。
本书只是介绍抗体制备最基本的方法流程,要想成为抗体的专业技术人才,非要经过长期孜孜不倦地积累,以及完整的分子生物学和免疫学知识体系作为支撑。
抗体制备绝非简单的一个动物免疫,还牵涉后期纯化和修饰,抗体纯化和修饰的成本要远远高于前期抗血清的制备,抗体制备其实是一个技术和艺术活,无论多么精雕细琢都不为过。
全书主要包括以下SOP
SOP01 动物组织及细胞mRNA的提取制备
SOP02 mRNA反转录/cDNA的合成
SOP03 酶切连接法构建载体
SOP04 Simpleclone重组酶法构建载体
SOP05 Ni-NTA层析柱亲和纯化6His标签融合蛋白
SOP06 谷胱甘肽亲和柱纯化谷胱甘肽还原酶(GST)标签融合蛋白
SOP07 GST融合蛋白标签柱上酶切
SOP08 包涵体蛋白纯化
SOP09 Ni-NTA Beads亲和层析纯化6His融合标签包涵体蛋白
SOP10 –SH介导多肽与载体偶联
SOP11 EDC或EDC/NHS介导多肽与载体偶联
SOP12 GA(Glutaraldehyde,戊二醛)介导多肽与载体偶联
SOP13 兔耳静脉取血方法
SOP14 大小鼠眼眶取血方法
SOP15 弗氏佐剂乳化免疫抗原
SOP16 兔注射免疫
SOP17 鸡的选择和免疫
SOP18 间接ELISA法检测抗血清效价
SOP19 兔颈动脉放血与血清分离
SOP20 琼脂扩散实验检测抗血清效价
SOP21 饲养细胞的制备
SOP22 单克隆抗体杂交瘤细胞融合
SOP23 杂交瘤融合细胞铺板培养
SOP24 杂交瘤细胞的亚克隆
SOP25 单克隆杂交瘤细胞株冻存
SOP25 单克隆杂交瘤细胞株细胞复苏
SOP27 小鼠腹水生产
SOP28 (NH4)2SO4沉淀法纯化抗体
SOP29 辛酸-硫酸铵法纯化腹水中的抗体
SOP30 Protein A /Protein G/ Protein L亲和纯化抗体
SOP31 含氨基配体特异性亲和柱的制备
SOP32 含巯基抗原/多肽特异性亲和柱的制备
SOP33 水稀释法提纯IgY抗体
SOP34 抗体/蛋白的HRP标记(NaIO4氧化法)
SOP35 抗体/蛋白的FITC标记
SOP36 抗体/蛋白的生物素(Biotin)标记
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文献和实验可能很多小伙伴们会遇到类似的问题,在查某个实验时,如 PCR 实验,发现该实验相关的内容很零散,想集中看完整个实验流程中的各个细节,却总是东找找西找找,很心累。于是,学霸君特意推出实验专题精选内容,每周会不断更新,将每个实验专题进行系统化梳理,可节省大家宝贵的时间,让大家专注于做实验研究。查看方式第一步:打开生物学霸,点击科研宝典,会出现实验专题。第二步:点击实验专题,出现如下各个专题内容。第三步:可点击各个专题。如对 PCR 感兴趣,点击「PCR 实验结果分析」,出现以下内容。其他专题均可用
于《科学报告》发表的一篇抗体测试的文章表明,针对同一靶点的很多抗体并不符合验证标准[1]。而上述杂带干扰、胶片空白等 WB 失败案例中,基本都是因为抗体选择引起的。因此抗体质量和匹配度在 WB 实验中就显得尤为重要。高特异性、品质稳定的抗体在 WB 实验中起到重要作用。随着抗体制备技术的发展,重组单克隆抗体因其高亲和性、高特异性和可重现性的特点,代表了抗体制备技术的发展趋势。 使用 SARS-CoV-1/2 NP 抗体对感染 SARS-Cov-2 的 Vero E6 细胞进行IF分析 图片
Nature 子刊:中国团队在扇贝足丝蛋白仿生材料研究领域取得重要研究进展
5 月 18 日,中国海洋大学海洋生命学院海洋生物遗传与育种教育部重点实验室方宗熙萨斯研究中心刘伟治团队、中国科学院深圳先进技术研究院钟超团队以及刘志远团队在 Nature Communications 上在线发表 Extensible and self-recoverable proteinaceous materials derived from Scallop Byssal Thread 的论文。研究团队经过多年潜心研究,在扇贝足丝蛋白仿生材料研究领域取得重要研究进展。 生物仿生材料一直
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