预染蛋白marker(15-150KD) 250ul*20

蛋白质印迹（Western blotting）方法原理和优化

或重组的纯化蛋白混合物组成。在凝胶或膜上显示其位置需要染色步骤。预染标准允许在电泳过程中监测蛋白分离，也可以在随后的印迹步骤中指示转移效率。然而，它们比较昂贵且加入染料会影响蛋白迁移率。预染标准在确定分子量时可能 不够精确，并且蛋白质上附加的染料在转移时会影响它们吸附到膜上的能力。 聚丙烯酰胺浓度 凝胶中聚丙烯酰胺浓度可以是均一浓度或是梯度浓度。最常见的聚丙烯酰胺浓度为10%，最适合分离10-150KD范围内的蛋白质。若要分析未知蛋白或许要更宽的分离范围，推荐使用梯度

【求助】关于一种蛋白western的问题

分子量这么小，用的SDS-PAGE胶浓度大一点，15%，跑胶时间不用太长，看见溴酚蓝跑的分离胶的中或中下部就停了，marker应该有专门小分子量预染marker，你找试剂公司的人跟他们讲一下你的要求，一般他们会有合适推荐给你的。转膜条件得摸，可以先按照实验室经常用的转膜条件试一下，如果是实验室转膜的目的蛋白分子量比如40kd用2h，你可以用1个小时试一下，转完以后的SDS-PAGE胶可以放到考马斯亮蓝染液染一下，看看小分子量蛋白转的情况，一抗先按照说明书建议的最高浓度做，二抗按照你所在实验

Western Blot(免疫印迹法)步骤

,500- 1000μl/瓶) ，刮落细胞，转移到Ep管。注意：冰上操作。 4.超声 10~15秒剪切DNA以减低样品粘性。 5.煮沸样品5 minutes。 6.离心12000g，5 min，取上清。 7.电泳分离：上样15μl~20μl 至 SDS-PAGE 胶 (10 cm x 10 cm)电泳。 如要定量检测某蛋白的表达水平， 应用RIPA裂解液(1 ml per 107 cells/100 mm dish/150cm2 flask)裂解