北京现货SDS-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒批发

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖北京现货SDS-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒批发在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：SDS-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒
编号：RFT076
规格：50次
英文名：SDS-PAGE gel preparation and electrophoresis Kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
本公司提供的SDS-PAGE蛋白电泳试剂盒包含凝胶制备以及蛋白电泳所需的全部试剂。本试剂盒可配制至少50块常规大小的PAGE胶。

试剂盒组成：

 

组份	规格	保存条件
40%PAA(29:1)	100 ml	4℃
4×Tris/SDS分离胶缓冲液 pH8.8	100 ml	4℃
4×Tris/SDS浓缩胶缓冲液 pH6.8	50 ml	4℃
APS(干粉)	0.5 g	RT
TEMED	0.5ml	4℃，避光
4×蛋白电泳上样缓冲液(含还原剂)	1 ml	-20℃
5×Tris-甘*酸电泳缓冲液(干粉)	1 L	RT

使用方法：
一、配制分离胶(各试剂使用量请参考表二)
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度(表一)，再按照下面的分离胶配方表(表二)配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)。

表一：不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：

SDS-PAGE分离胶浓度	最佳分离范围
6%	50-150kD
8%	30-90kD
10%	20-80kD
12%	12-60kD
15%	10-40kD

配制分离胶前，根据以下配方准备10% APS：
10% APS配制-5 ml：将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10%APS。

制备分离胶步骤：
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2、按照表二将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可)，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合

表二：SDS-PAGE分离胶配方表

组份	不同凝胶体积对应各组份的取样量(ml)
	5ml	10ml	15ml	20ml
8％胶
H2O	2.7	5.4	8.1	10.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8	1.25	2.5	3.75	5
40％ PAA(29:1)	1	2	3	4
TEMED	0.005	0.01	0.015	0.02
10％ APS	0.05	0.1	0.15	0.2
10％胶
H2O	2.45	4.9	7.35	9.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8	1.25	2.5	3.75	5
40％ PAA(29:1)	1.25	2.5	3.75	5
TEMED	0.005	0.01	0.015	0.02
10％ APS	0.05	0.1	0.15	0.2
12％胶
H2O	2.2	4.4	6.6	8.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8	1.25	2.5	3.75	5
40％ PAA(29:1)	1.5	3	4.5	6
TEMED	0.005	0.01	0.015	0.02
10％ APS	0.05	0.1	0.15	0.2
15％胶
H2O	1.825	3.65	5.475	7.3
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8	1.25	2.5	3.75	5
40％ PAA(29:1)	1.875	3.75	5.625	7.5
TEMED	0.005	0.01	0.015	0.02
10％ APS	0.05	0.1	0.15	0.2

二、浓缩胶制备：
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、按照表三将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合；加入10%过硫*(代"酸")铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
4、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
5、静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。

表三：SDS-PAGE浓缩胶(4%)配方表

组份	不同凝胶体积对应各组份的取样量(ml)
	2 ml	4 ml	5 ml	10 ml
H2O	1.17	2.34	2.925	5.85
4×Tris/SDS浓缩胶buffer pH6.8	0.63	1.26	1.575	3.15
40％ PAA(29:1)	0.2	0.4	0.5	1
TEMED	0.002	0.004	0.005	0.01
10％ APS	0.02	0.04	0.05	0.1

三、电泳：

凝胶凝固好后，根据以下配方准备电泳缓冲液。
5×Tris-甘*酸电泳缓冲液的配制-1 L：将一包5×Tris-甘*酸电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘*酸电泳缓冲液(此溶液不用调节pH值)。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘*酸电泳缓冲液。在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘*酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘*酸电泳缓冲液。上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等指示前沿*酚兰电泳到分离胶下缘后，结束电泳，染色或者进行下一步实验。
关键词：SDS-PAGE gel preparation and electrophoresis Kit,SDS-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒,RFT076


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编号	名称
RFT169	c-Myc标签抗体
RFT194	蛋白酶抑制剂混合物(100×)
RFT151	高分子量非变性电泳蛋白质Marker(66～669 kD)
RFT108	2×ligation solution MasterMix
RFT041	66KD蛋白Marker
RFT178	庆大霉素溶液(50mg/ml)
RFT170	Flag标签抗体
RFT027	λDNA/HindIII+EcoRI(564～21226bp)
RFT035	动物组织细胞DNA提取试剂盒
RFT192	磷酸酶抑制剂混合物(100×)
RFT054	考马斯亮蓝快速染色液
RFT191	50×TAE
RFT024	DNA Marker VII(300～2500bp)
RFT118	λ噬菌体DNA
RFT048	低分子量蛋白Marker II(14.4～116KD)
RFT053	QuickLan蛋白染色液
RFT157	Western及IP细胞裂解液
RFT080	Western湿转转膜液
RFT162	10mM dNTP溶液
RFT156	RIPA裂解液(强)
RFT117	pUC18载体
RFT004	1kb plus DNA ladder(300～10000bp)
RFT037	细菌基因组DNA提取试剂盒
RFT033	RNA样品高效保存液
RFT113	JM109化学感受态细胞
RFT070	5×双色蛋白上样缓冲液(还原)
RFT163	2.5mM dNTP溶液
RFT087	Western封闭液II
RFT017	DNA Marker I plus(100～700bp)
RFT107	RNase抑制剂
RFT103	高效高保真DNA聚合酶
RFT105	Oligo(dT)18 Primer
RFT174	*苄青霉素溶液(100mg/ml)
RFT193	即用型PMSF溶液(100mM)
RFT154	2×Tricine上样缓冲液(还原，2×)