一站式长效期SDS-PAGE套装A(>30KD) 蛋白质研究

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应一站式长效期SDS-PAGE套装A(>30KD) 蛋白质研究，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：一站式长效期SDS-PAGE套装A(>30KD) 蛋白质研究
品牌：百奥莱博
英文名：One-Stop Stable SDS-PAGE Pack(A)
编号：BTN100908A
规格：30次
本产品是在SDS-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)套装基础上改良而得，主要改良的地方有两处：一是配胶液的pH偏酸，二是将还原剂加入到电泳液中。

产品特点：
1．偏酸的pH使PAGE胶比常规SDS-PAGE 更加稳定，便于配预制胶，增加实验的可重复性。
2．能降低蛋白质的脱*反应和烷基化反应，也能阻止蛋白质的二硫键再生成。
3．把还原剂整合到电泳液中，避免了蛋白质在电泳过程中重新形成二硫键，蛋白条带比常规SDS-PAGE 更加锐利。
4．可把分离胶和浓缩胶配胶液整合成一个，成分更简单。
5．更换电泳液即可用于不同大小的蛋白(A型电泳液适合20 kD以上蛋白，B型适合2-50 kD蛋白)，分离多肽时不需要Tricine-SDS-PAGE。
6．即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
7．安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺。
8．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。

产品组成：

 

成分	30T(A)	30T(B)
丙*(代"烯")酰胺(干粉)	60g	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺(干粉)	3g	3g
长效期SDS-PAGE 配胶液，4×	200ml	200ml
长效期SDS-PAGE还原剂	10ml	10ml
TEMED	1.5ml	1.5ml
过硫*(代"酸")铵	1g	1g
长效SDS-PAGE上样液，5×	1ml	1ml
长效期SDS-PAGE电泳液A型	20L	-
长效期SDS-PAGE电泳液B型	-	20L
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存(SDS-PAGE上样液需-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：

一、使用本产品不需要浓缩胶，直接配制分离胶。如果使用A型电泳液(分离30 KD以上蛋白质用)，最好配制10%的PAGE胶；如果使用B型电泳液(分离2-30 KD的蛋白质用)，最好配制12%的PAGE胶。也可以选择其他胶浓度，但各成分用量需要按比例调整。
1．第一次使用本产品时需先配制30%丙*(代"烯")酰胺溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水，充分摇晃直到溶解即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2．第一次使用本产品时还需配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液(简称30% AB溶液,下同): 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙*(代"烯")酰胺。对长效期SDS-PAGE电泳，丙*(代"烯")酰胺与甲叉双丙*(代"烯")酰胺比例一般在19:1，因为此时PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。制备方法是将3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙*(代"烯")酰胺溶液中，摇晃溶解即得30%的AB溶液，该溶液最好4℃避光(可包上锡箔纸壁光)保存并在一个月内用完。30% AB溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
3．新鲜配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL 去离子水的比例将去离子水加到装有硫*(代"酸")铵干粉的1.5mL EP 管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
4．本产品不需要配制分离胶和浓缩胶两种胶，只需要配一种连续胶。配制方法如下(以下是以配制10mL的胶的用量为例，用户自己需要根据胶的大小决定所需体积)：

胶浓度	用量(mL)			总体积 (mL)
	去离子水	30% AB溶液	4×长效期SDS-PAGE配胶液
10%(对A型)	4.20	3.30	2.50	10
12%(对B型)	3.50	4.00	2.50	10

5．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和30μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。
7．在胶的液面达到顶部的时候停止灌胶并插入梳子，室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
8．拔出梳子，用水冲洗加样孔。
9．配制的PAGE胶可以在4℃长期放置数月，直到使用。注意：需要盖上1×长效期SDS-PAGE 配胶液，否则PAGE胶会变干而无法使用。
10．使用时，将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够量的1×长效期SDS-PAGE电泳液(A型或B型)。
 注意：长效期SDS-PAGE电泳液A型或B型均以干粉形式提供，足够配20 L 1×电泳液。配制时需将全部干粉(含多种没有充分混合的成分，必须一次性全部使用)溶解在去离子水中，并定容到1 L，得到20×长效期SDS-PAGE电泳液，使用时再用去离子水稀释成1×电泳液。20×长效期SDS-PAGE电泳液不需要调pH，可以室温放置。
11．在上槽中加入适量的1×长效期SDS-PAGE电泳液和1/200 体积(以电泳液体积为基数)的长效期SDS-PAGE还原剂并用玻璃棒搅拌混合均匀。
12．在蛋白质样品中加入5×长效期SDS-PAGE上样液(8μL样品加2μL上样液)，72℃加热10分钟。注意：上样液中的一些成分在低温保存时会沉淀，所以用前需要65℃保温10分钟左右使沉淀溶解，混匀后才能使用。上样液中的2-巯基乙*(代"醇")容易挥发，使用多次后用户可以在10μl样品(蛋白质样品+上样液的混合液)中补加0.5μl自备的2-巯基乙*(代"醇")原液，以便使蛋白质充分变性。如果样品是蛋白质沉淀(如TCA沉淀得到的蛋白质)，则需要用Tris缓冲液将其pH调到中性(可用pH试纸检测)，否则残留溶剂可能会改变上样液的pH，严重影响电泳效果。
13．短暂离心，取上清液上样。上样的蛋白总量跟检测方法相关，如果用银染，可以只上样ng级别(对每条带的蛋白量而言)，如果用考染，需要上样μg级别(对每条带的蛋白量而言)。
14．用150V恒压电压进行电泳，直到染料进入胶底部(在B型电泳液中，*酚蓝的速度相当于3-5 KD的蛋白质)。注意：在长效期SDS-PAGE中的电泳速度要快于普通SDS-PAGE。在B型电泳液中的速度又快于A型电泳液。过程中，电流会降低，属于正常现象。
15．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或转膜)。注意：Western转膜需要专门的转膜液(百奥莱博可以提供)。

二、如果需要更高分辨率，也可把上法配制的胶当成分离胶，并在其上再叠加4%的浓缩胶，操作如下：
16．按上面方法配制分离胶，只是倒胶后在胶面距离顶部1.5cm的时候，或者距梳子齿0.5cm时，停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm 厚的水，使胶顶部液面平整。室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)后，用1×长效期SDS-PAGE 配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。
17．配制4%浓缩胶(参考上节第4-6 步)。倒胶后在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
18．拔出梳子，用1×电泳液(A型或B型)冲洗加样孔，后续处理接第7步。

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·ROX内参染料(25μM)
编号：BTN100931
英文名称：ROX Reference Dye，25μM
规格：200μl

·SP6 RNA聚合酶
编号：BTN120307
英文名称：SP6 RNA Polymerase
规格：1000U
本酶是鼠伤寒沙门氏菌的噬菌体SP6 DNA编码的酶，对SP6启动子序列具有高度特异性，不能识别其它生物来源的启动子。本酶是依赖于DNA的RNA聚合酶，具有 5´→3´的RNA聚合酶活性，以含有SP6启动子序列的双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与启动子下游的单链DNA互补的RNA。

产品用途：
1．为Northern杂交以及Southern杂交制作高标记探针。
2．制作RNA剪接反应的前体。
3．以帽类似物为引物，制作Capped mRNA。

产品组成：

成份	规格
SP6 RNA聚合酶	50μL(20U/μL)
5×转录缓冲液	0.25mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1个活性单位是指在37℃、60分钟内将1nmol的AMP合成掺入到寡聚核苷酸片段(DE-81光吸收形式)所需的酶量。


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PY01-139  胎牛血清  200克  
NF-204 羊抗人Alb血清
1132-61-2 MOPS   3-(N-吗*(代"啡")啉)丙磺酸
9000-70-8 明胶 Gelatin
F030639 FITC标记山羊抗人IgG Fab抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG Fab*FITC
ARB12645 大鼠游离脂肪酸(FFA)检测服务 Rat free fatty acids,ffa ELISA KIT
碳酸铈 HEPPSO sodiu*(代"m") salt 54451-25-1
BTN90207 JM109感受态细胞 JM109 Competent Cell
健那绿 D-Glucuronic acid 2869-83-2
Tris-HCl缓冲液(pH7.4,无菌)  0.05mol/L 500ml
SJ0199 Malt Extract  麦芽提取物
酒石酸铜 Potassium tartrate hemihydrate 815-82-7或17263-56-8
9001-75-6 Pepsin1:3000 胃蛋白酶 1:3000
PY02-301  双歧杆菌生化用基础培养基  250克  
BTN70907 去离子甲酰胺 Deionized Formamide
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·丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")干粉(19:1)
编号：BTN130967
英文名称：Premixed Acr-Bis Powder
规格：100g
本产品为即用型丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺预混干粉(19:1)，用户可直接加入去离子水溶解即可得到丙*(代"烯")酰胺溶液，用于配制各种PAGE胶，如SDS-PAGE，Tricine-SDS-PAGE等。使用方便，避免了用户直接接触有毒的丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺。

储存条件：常温运输及避光干燥保存，有效期一年。

·生物素化的辣根过氧化物酶
编号：BTN131095
英文名称：Biotin-HRP
规格：5mg
本产品为生物素标记的辣根过氧化物酶，其灵敏性高，推荐用于利用亲和素、链亲和素或中性亲和素蛋白的三明治技术。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性单位定义：一个单位定义为在20℃，20秒内从联*(代"*")三酚中产生1μmol焦酚所需的生物素化辣根过氧化物酶的量。

·dITP溶液(100mM)
编号：BTN130920
英文名称：dITP Solution(100mM)
规格：0.25mL
本产品纯度在98%以上(HPLC检测)，可以直接用于PCR、RT-PCR、cDNA合成、DNA测序、DNA探针标记等反应。dITP不适合具有校正功能的聚合酶或含有校正酶的Mix催化的PCR扩增。

dITP(脱氧三磷酸次黄嘌呤核苷)，分子式为C10H12N4O13P3Na3，分子量是558.1，消光系数为12.2×103 M-1×cm-1(pH7.0)，λmax为249nm。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·热稳定无机焦磷酸酶(PPase)
编号：BTN130657
英文名称：Inorganic Pyrophosphatase，Thermostable
规格：250U
无机焦磷酸酶催化无机焦磷酸盐水解生成正磷*(代"酸")盐，其反应示意图如下：


产品特点：
1．增强DNA复制。
2．100℃加热4小时，该酶仍具有100%活性。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指标准反应条件下[0.5mL反应体系，50mM Tricine(pH8.5)，1mM MgCl2和0.32mM PPi，75℃反应,10分钟]，每分钟催化无机焦磷酸盐生成1μmol磷酸盐的酶量。

来源：重组E.coli菌株，携带从极度耐热的Thermococus litoralis中克隆的无机焦磷酸酶基因。

我公司正在优惠促销蛋白质研究等系列产品，期待您的咨询选购一站式长效期SDS-PAGE套装A(>30KD) 蛋白质研究。