XL10化学感受态细胞 克隆与表达

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括XL10化学感受态细胞 克隆与表达在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：XL10化学感受态细胞 克隆与表达
编号：SY0013
规格：100μl×10管
英文名：XL10 Chemically Competent Cell
品牌：百奥莱博
产地：北京
本品为使用大肠杆菌XL10菌株制备的化学转化超级感受态细胞，转化效率超过108 cfu/μg，广泛适用于质粒转化、基因克隆、蓝白斑筛选等用途。

XL10感受态细胞的基因型：Δ(mcrA)183Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lacTet rHte [F′proAB lacI qZΔM15 Tn10(Tet r) Amy Camr]

产品特性

1）XL10品系，具有四环素(Tetr)和*霉素(Camr)抗性，新型克隆菌株。
2）适合PCR产物、cDNA以及其他来源的非甲基化DNA的高效转化。
3）endA1，RecA1突变，确保外源DNA在宿主菌中的稳定性，有利于高质量质粒DNA提取。
4）Hte基因型，增强大片段DNA转化效率，并使宿主菌细胞生长速度大幅度提高。
5）可用于对重组质粒进行蓝白斑筛选。
6）转化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA。
7）无外源质粒DNA残留。

储存：-80℃。
组份：
XL10化学感受态细胞 100μl×10
pUC19(0.1 ng/μl) 5μl

注意事项
1）请勿将本品置于-20℃或液氮中保存
2）感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用。
3）待转化DNA加入体积不要超过感受态细胞体积的1/10。
4）待转化DNA加入感受态细胞后，请勿用移液枪吹打，轻轻弹匀即可。
5）为确保最高效率转化，整个操作过程应尽量轻柔。
6）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
1）将感受态细胞从-80℃中取出，置于冰水浴中融化。
2）将待转化DNA加入到100 μl感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
3）将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90秒后，立刻置于冰水浴中，静置2-3分钟。
4）向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，37℃水浴锅中静置10分钟。
5）150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
6）2500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
【注】：也可直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

关于XL10化学感受态细胞 克隆与表达的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·碱性磷酸酶染色试剂盒
编号：SY0578
英文名称：Alkaline Phosphatase Stain Kit
规格：50T
碱性磷酸酶，即Alkaline Phosphatase，缩写AP，该酶在大多数细胞类型中均有表达，但是在胚胎干细胞（ES）和诱导多能干细胞（iPS）内的表达水平明显升高；经固定的ES和iPS被碱性磷酸酶试剂盒染色后，未分化的细胞可呈现蓝/紫色，分化的细胞呈现无色。百奥莱博提供的该试剂盒特异性强、灵敏度高，可对ES和iPS细胞分化状况进行较好的评估。

产品组份：
染色液A————1.25ml×2
染色液B————0.65ml
染色液C————25ml

注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）使用前请自备：PBS 缓冲液、PBST或TBST、4%多聚甲醛。
3）本试剂盒染色液A、B瓶口若出现少量液体凝固属正常现象，融化混匀后正常使用即可。

储存条件：4℃，有效期6个月。

·pUM19-T Vector TA克隆载体
编号：SY0022
英文名称：Alkaline Phosphatase Stain Kit
规格：5μg
pUM19-T载体是一种高效克隆PCR产物（TA Cloning）的专用载体。它是在线性化pUC19载体的基础上，在两侧的3’端添加碱基T而制成。特殊的纯化方式使得超过99%的pUM19载体两端都具有3’-T突出端，因此极大的降低了载体自连率。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR 产物的3’端添加一个A，可与pUM19载体3’端的T互补连接，因此可大大提高PCR 产物的连接和克隆效率。pUM19载体多克隆位点位于β-lactamase基因内，可以通过蓝白斑快速筛选含有插入片断的重组子。连接使用的PCR 片段3’端应带有A 末端；Pfu DNA Polymerase等高保真聚合酶的扩增产物不带A，应先在其末端加A后再进行TA克隆。本品随载体提供对照片段(500bp)用于阳性对照反应。

1.将载体置于冰上融化。建议第一次使用时将载体分装成小份保存，每次取一支使用。

2.按下表配置连接反应体系
ddH2O——To 10 μl
10×Ligase Buffer——1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)——1μl (约0.025 pmol)
插入片段*——0.075 pmol～0.25 pmol
T4 DNA Ligase (400 U/μl)——1 μl
注：插入片段与载体的摩尔比应在3:1～10:1之间。请根据琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测确定插入片段的浓度，并根据其大小计算摩尔量。1 pmol 1 kb双链DNA的质量约为660 ng。

3.对照反应体系（可选）：
ddH2O——6 μl
10×Ligase Buffer——1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)——1 μl (约0.025 pmol)
500 bp control insert(50 ng/μl)——1 μl (约0.15 pmol)
T4 DNA Ligase (400 U/μl)——1 μl

4.轻轻吹打混匀反应体系，室温22-26℃孵育1-2小时，或16℃过夜。
5.转化：
1) 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不要超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
2) 将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90秒后，立刻置于冰水浴中，不要晃动，静置2-3分钟。
3) 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
4) 2500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬混匀，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀，室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
注：如果使用超级感受态细胞（转化效率>108 cfu/μg），可以直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

储存条件：-20℃。

注意事项
1) 尽量避免反复冻融，可将载体和对照片段分装成小份后保存。
2) 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。


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·AhR-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号：SY0095
英文名称：AhR luciferase reporter plasmid
规格：1μg
AhR荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（AhR luciferase reporter plasimd）是用于检测AhR转录活性水平为目的的报告基因。芳香族化合物受体(Aryl
hydrocarbon receptor, AhR)是一个核受体转录因子。AhR广泛地参与多种细胞内的信号通路,包括核受体信号通路,缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)信号通路,p53信号通
路以及细胞周期信号通路等。AhR通过对细胞内不同信号通路的调节作用从而影响了细胞的生长,增殖以及分化等过程。另外,AhR与癌症的发生和发展也密切相关,在许多的肿瘤细胞中都
发现了AhR的异常表达。

AhR报告基因主要用于检测细胞中AhR的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表性分析等。

pGMAhR-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个AhR结合位点，可以高灵敏度地检测AhR的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结
合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得AhR报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
pGMAhR-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

储存条件：-20℃。


XL10化学感受态细胞 克隆与表达关键词：SY0013,XL10 Chemically Competent Cell,XL10化学感受态细胞

BTN80915B 超级杂交液(含50%甲酰胺) Super hybrid solution(with 50% formamide)
SV1566 p42 MAP 激酶（MAPK）
SV0298 CviQI限制性内切酶 CviQI Restriction Endonuclease
KFS392 活性氧(羟自由基)测试盒(比色法)
SY0759 BCIP/NBT显色试剂盒蓝紫色(IHC) BCIP/NBT Alkaline Phosphatase (AP) Substrate Kit For IHC
SY0071 Nanog-Luc荧光素酶报告基因质粒 Nanog luciferase reporter plasmid
BTN131102 生物素化兔IgG Biotin-Rabbit IgG
KFS047 kFluor350标记抗小鼠免疫荧光染色试剂盒 Immunol Fluorescence Staining Kit with kFlour350-Labeled Goat Anti-Mouse IgG
SY0274 快速核酸银染试剂盒 Rapid Silver Stain Kit for Nucleic Acid
YT359 细胞内*离子荧光探针(Fluo-3 AM) Intracellular calcium fluorescence probe
BTN90509 包涵体中量纯化试剂盒 Inclusion Body Midiprep Kit
HR0029 细胞膜蛋白提取试剂盒 Membrane protein extraction kit
YT622 彩色预染蛋白分子量标准(15-120kD) Prestained Color Protein Marker
YT006 RNase A (100mg/ml)(不含DNase) Ribonuclease A（DNase free）
BTN140234 SYBR Green Ⅱ核酸染料(10000×) SYBR Green II nucleic acid dyes

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