大肠杆菌DH5α化学感受态细胞哪里卖

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")大肠杆菌DH5α化学感受态细胞哪里卖，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：大肠杆菌DH5α化学感受态细胞哪里卖
产地：国产|进口
规格：0.1mL*10
英文名：E.coli DH5α Chemical Competent Cell
品牌：百奥莱博
 本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶*基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。使用pUC19质粒检测，转化效率不低于107，适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。
 本菌种来源于Hoffman-Berling 1100菌种。

基因型	表现型
deo R	组成型合成脱氧核糖
end A1	核酸内切酶I缺失
gyr A96	具有*啶酮酸抗性
hsd R17	限制性酶EcoK缺失
△(lac)U169	lac基因缺失
rec A1	DNA重组活性降低
Rel A1	允许在无蛋白质合成时有RNA合成
sup E44	抑制琥珀突变突变，为某些噬菌体必需
thi-1	不能自身合成硫*
φ80(lac ZΔM15)	提供α-互补所需的ω片断

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入800μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm(小于225rpm)振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

关于大肠杆菌DH5α化学感受态细胞哪里卖的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·蛋白marker(14.4～97.4kD)
编号：BTN70102B
英文名称：Protein Marker(14.4-97.4kD)
规格：20次
本产品为蛋白质电泳标准系列，为已知的标准蛋白质混合物，在SDS-PAGE时可以作为分子量标准，估计其他蛋白质的分子量大小。

产品特点：
1．简单，不需要自己单独购买各种蛋白质配置。
2．本产品有粉末型和溶液型两种，十分稳定。
3．本系列三种产品涵盖从 3.3 KD-200 KD的分子量范围。

所含成分及其分子量		A型	B型	C型
肌球蛋白重链	200.0KD			有
*调素结合蛋白	130.0KD			有
兔磷酸化酶B	97.4KD		有	有
牛血清白蛋白	66.2KD		有	有
兔肌动蛋白	43.0KD		有	有
牛碳酸酐酶	31.0KD		有
人生长激素	22.0KD
大豆胰蛋白酶抑制剂A	20.1 KD	有	有
鸡蛋清溶菌酶	14.4KD	有	有
人工合成肽1	7,823D	有
人工合成肽2	5,856D	有
人工合成肽3	3,313D	有

产品组成：

成分	A型	B型	C型
蛋白分子量标准A型(低分子量)	15T	-	-
蛋白分子量标准B型(中分子量)	-	20T	-
蛋白分子量标准C型(高分子量)	-	-	10T
1×SDS-PAGE上样液	0.5ml	0.5ml	0.5ml
说明书	1份	1份	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

使用方法：

一、干粉型的使用：
1．开封后将1×SDS-PAGE上样液加入到样品管中溶解蛋白质粉末，各分子量标准所需的1×SDS-PAGE上样液的体积如下:
低分子量标准(BTN70102A)需要150μL。
中分子量标准(BTN70102B)需要200μL。
高分子量标准(BTN70102C)需要100μL。
2．沸水浴中加热 5分钟。
3．短暂离心后将溶液按每管10μL的体积分装到多个塑料离心管中，置-20℃长期保存。
4．使用时每次取一管，室温放置直到液体融化后，沸水浴中加热3～5分钟，即可上样进行SDS-PAGE电泳。BTN70102A型推荐使用Tricine-甘油SDS-PAGE胶、BTN70102B 推荐使用12%的分离胶、BTN70102C 推荐使用8%的分离胶。
5．电泳后进行考马斯亮蓝G-250染色，染色后出现的带型见上表。

二、溶液型的使用：
1．将溶液按每管一次电泳的用量分装到塑料离心管中冻存，每次只用一管，这样避免反复冻融。
2．使用时取一管室温放置直到液体融化。
3．沸水浴中加热3～5分钟后趁热上样并进行SDS-PAGE电泳。BTN70102A型推荐使用Tricine-甘油SDS-PAGE胶、BTN70102B 推荐使用12%的分离胶、BTN70102C 推荐使用8%的分离胶。
4．电泳后进行考马斯亮蓝G-250染色，染色后出现的带型见上表。

疑难解答：
1.分子量不同，SDS-PAGE的分离胶和浓缩胶浓度不同。需要自己根据具体情况调整。
2.电泳之后可将胶进行染色观察，如果使用传统配方进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的一步式蓝色PAGE染液(BTN61204)，该产品具有染色快，无毒，灵敏性高等物点，是常规蛋白染色液的替代品。


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·大肠杆菌JM109感受态细胞
编号：BTN90207
英文名称：E.coli JM109 Chemical Competent Cell
规格：0.1mL*10
 本产品是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。

产品特点：
1. 使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，-80℃保存几个月转化效率不发生改变。
2. recA1和endA1突变阻止对克隆DNA的修饰或对宿主菌染色DNA的重组，提高纯化质粒的产量和质量。
3. JM109菌株基因型：endA1 recA1 gyrA96 thi hsdR17(rk-mk+)relA1 supE44 D(lac-proAB)[F’traD36 proAB laqlqZ Δ M15 ]
4. 本产品质量稳定，使用方便，质优价廉。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：无菌超纯水，SOB和SOC液体培养基，相关抗菌素。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。



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·柱式土壤DNA提取试剂盒
编号：BTN71205
英文名称：Soil DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒专门用于从各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的DNA的试剂。

试剂盒特点：
1. 去污染效果更好，得到的DNA可以直接作为PCR模板或酶切，不需要再进行去腐殖酸处理。
2. 操作过程更加简单快速，整个操作只需要10多分钟，扩容性好。
3.产量高，每克土壤一般可以提取到5-50μg DNA，片段长度在20-50 Kb，OD260/280一般都在1.8以上。
4.适合于各种土壤(包括河海沉积物)。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	40ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，保存期为一年。

使用方法：
1. 65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后充分混匀，取0.5mL加入到1.5mL塑料离心管中并放置于65℃待用。
2. 称取0.1-0.3 g的土壤，加入到含预热溶液A的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10分钟。如果是扩量操作，可以使用更多土壤和较大离心管。也可以将同一种土壤在较大离心管中震荡处理，然后再分到1.5mL离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的土壤震荡起来。
3. 将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
4. 12000～15000g室温离心3分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，实际颜色取决于腐殖酸的含量，上清液的体积一般为300-400μl)。
5.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
6. 将离心管冰浴至少5分钟。
7. 12000～15000g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5mL离心管中，上清液颜色将比第4步得到的上清的颜色稍淡，体积在0.7mL左右。
 注意：下面第8-第9步的*仿抽提操作可以省略，直接进入第10步，但DNA的产量会低50%左右，OD260/280在1.7-1.8。如果直接进入第10步，则转移的溶液体积不要超过0.6mL，否则没有空间加溶液C。
8. 加入0.2mL的*仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
9. 12000～15000g室温离心3分钟，小心转移上清到新离心管中。说明：离心后两相交界面将有白色膜状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。上清的颜色取决于土壤中腐殖酸的含量。将上清转移到新的1.5mL离心管时，不要超过0.6mL，否则没有空间加溶液C。如果有多余的可以弃之不用。
10. 加入1.5倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀。
11. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液)。
12. 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
13. 如果有必要，可以再加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。增加一步洗涤能使最后得到的DNA的纯度稍有提高，但产量稍微有所降低。
14. 12000～15000g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
15. 将离心吸附柱转移到一新的1.5mL塑料离心管中，加入50-100μL DNA洗脱液2.0。
16.室温放置离心吸附柱1-2分钟。
17. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。

疑难解答：
Q: 如何判断提取的DNA没有腐植酸污染？
A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。方法二是检测最大光吸收。注意：有腐植酸污Q: 如何判断提取的ＤＮＡ没有腐植酸污染？
A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。方法二是检测最大光吸收。注意：有腐植酸污染并不表示 DNA 不能使用，有的腐殖酸并不抑制 PCR扩增。
Q: 腐殖酸的最大吸收波长是多少？
A：腐植酸(humic acid)是一大类呈棕黑色或黑色的物质，其结构千差万别，土壤中腐殖酸的组成和特点随土壤不同而不同，所以其最大吸收波长也各不相同，有的土壤的腐殖酸在 260nm 有最大吸收(见 Appl.Environ. Microbiol.，63：4993，1997)，有的则在 340nm。所以用特定的波长测定 OD 值时波长的选定要根据土壤而决定。Sigma，Fluke等公司出售的腐植酸产品成分一般比较简单，其最大吸收波长不能推广到成分更为复杂的土壤腐殖酸样品。
Q:是否腐植酸都会抑制后续的DNA反应？
A：否，因为腐植酸是一大类物质的统称，他们的结构和特性各不相同，所以是否对后续反应有影响最好通过实验来验证。如果用提取的DNA溶液原液进行反应而反应没发生，而对照样品(已知的不含污染的DNA)能够发生，说明可能抑制作用。
Q：如果得到的DNA样品还是含有抑制后续反应的腐植酸，如何去除？
A：如果提取的DNA原液不能扩增，可以将样品稀释10倍和100倍再进行 PCR，抑制作用一般可以解除。如果仍然抑制，可以使用我公司的PCR Inhibitor Scavenger(BTN60804)。如果仍然不能解除，则可以通过柱式腐殖酸清除剂(BTN60801)或先电泳，再用超大片段胶回收试剂 Magic Gel DNArc(BTN60706)纯化土壤 DNA，去除残留抑制剂。其中后两方法最有效，得到的原液一般可以直接扩增。
Q：在用土壤 DNA进行细菌专一性 PCR时，为何没加 DNA 模版的阴性对照有扩增产物出现？
A：这是由于使用的Taq DNA聚合酶一般从E.coli表达菌株中提取，提取过程中污染了E.coli的基因组 DNA，而使用的广谱细菌专一性引物可以识别所有细菌DNA基因组DNA模版，所以会产生扩增。建议使用高质量的Taq DNA聚合酶。

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