SYA178型冠状病毒通用荧光PCR检测试剂盒(HCoV)说

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北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品，包括SYA178型冠状病毒通用荧光PCR检测试剂盒(HCoV)说明书在内的病毒PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品，欢迎选购。

名称：SYA178型冠状病毒通用荧光PCR检测试剂盒(HCoV)说明书
编号：SYA178
规格：48次/盒
品牌：百奥莱博
产地：北京

我公司的SYA178型冠状病毒通用荧光PCR检测试剂盒(HCoV)说明书，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
SYA258 金黄色葡萄球菌单重凝胶PCR检测试剂盒
SYA194 冠状(Hcov)/副流感(PIV)/腺(ADV)病毒三重荧光PCR检测试剂盒
SYA503 副结核(paratuberculosis)单重荧光PCR检测试剂盒
SYA042 A组链球菌单重荧光PCR检测试剂盒
SYA217 轮状病毒A/B/C分型三重荧光PCR检测试剂盒
SYA153 高致病性禽流感H5N1病毒双重荧光PCR检测试剂盒
SYA397 猪瘟野毒病毒(wCSFV)单重荧光PCR检测试剂盒
FZ037 玉米赤霉烯酮快速检测试剂盒 96T/盒
SYA176 人副流感病毒3型单重荧光PCR检测试剂盒
SYA112 产单核李斯特菌单重荧光PCR检测试剂盒
SYA294 猪源性成分单重荧光PCR检测试剂盒
FZ045 猪瘟病毒IgG抗体检测试剂盒 96T*2/盒
SYA567 猪流行性腹泻(PEDV)单重凝胶PCR检测试剂盒
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·大肠杆菌致贺毒素黏附抹平因子(Eae)/溶血素(Hly)双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA108
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·H5/H7/H9型禽流感病毒三重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA170
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·伤寒沙门菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA059
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·东部马脑炎病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA234
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·东部/西部/委内瑞拉马脑炎病毒三重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA251
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·偏肺病毒/腺病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA191
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·水稻转基因Cry1Ac单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA287
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·转基因植物35S启动子单重荧光PCR检测试剂盒 
编号：SYA265
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪囊尾蚴病(CYT)ELISA检测试剂盒
编号：SYA643
等级：科研实验专用
规格：96次/盒

·炭疽芽胞杆菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA121
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽流感病毒N1亚型(AIV-N1)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA328
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·肠产毒性大肠杆菌(ETEC)耐热肠毒素(ST-elt)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA090
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪轮状病毒A(ROV-A)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA433
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·肠出血性大肠杆菌(O157:H7)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA081
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
本试剂盒适用于增菌培养物、疑似病料及食品中大肠杆菌O157(H7)的检测，其检测结果仅供参考。

出血性大肠杆菌EHEC O157(H7)可引起人的出血性腹泻和肠炎的大肠埃希氏菌，引发人类、家畜以及野生禽兽不同形式的疾病。本方法为荧光PCR检测方法，反应在同一管内连续进行，操作简单，并有效防止了污染，能对样品中或预培养液中的大肠杆菌 O157(H7)进行快速检测，具有特异性高、敏感性强和操作简便的特点。O157(H7)的探针报告基团为FAM，淬灭基团为None。

试剂盒组成：

 

组份	数量	规格
大肠杆菌 O157(H7)荧光qPCR反应液( O157(H7)-qPCR MIX)	1管	720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
阳性对照(O157(H7-PTC)	1管	50μL/管

储存条件：-20℃以下，有效期6个月。

使用方法：

一、样品采集：
➤食品样品：样品的采集与预培养按照《食品卫生微生物学检验大肠埃希氏菌 O157：H7/NM检验 (GB/T 4789.36-2008) 要求进行。
➤粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
➤病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
 注：上述样品建议经过增菌后，收集培养物用于检测。

二、DNA提取：
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
➤液体培养物：取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中，8000rpm离心3min，尽量吸弃上清，加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
➤固体培养物：挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
➤粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
➤其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
 注：建议采用相关标准方法进行前增菌，并按照液体培养物方法进行提取。阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

三、检测步骤：
1．试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qPCR反应液( O157(H7)-qPCR MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	15µL	N×15µL

向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照( O157(H7)-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
2．qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

	1循环	50℃ for 2 min
预变性	1循环	95℃ for 10 min
PCR扩增	40循环	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃ 延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX 参比荧光。

四、结果分析：
1．结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2．试验成立判定
➤阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
➤阳性对照(O157(H7)-PTC)：均产生扩增曲线。
➤以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
3．结果判定
➤在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明 O157(H7)核酸阳性。
➤Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明 O157(H7)核酸阴性。
➤如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
➤对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行 O157(H7) qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明 O157(H7)核酸阳性；否则判为样本阴性。

五、注意事项：
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
➤PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


SYA178型冠状病毒通用荧光PCR检测试剂盒(HCoV)说明书关键词：百奥莱博,SYA178,冠状病毒通用荧光PCR检测试剂盒(HCoV)

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