人基因组DNA(男性)促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")人基因组DNA(男性)促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：人基因组DNA(男性)促销
编号：BTN131031
规格：100μg
英文名：Human Genomic DNA(Male)
品牌：百奥莱博
产地：北京
本产品为人基因组DNA，来源于多位匿名的捐献者，其中BTN131031为男性基因组DNA；BTN131032为女性基因组DNA。利用脉冲电场凝胶电泳测量，90%以上的DNA的大小大于50kb。该DNA适用于Southern blot杂交,基因组分析(包括PCR)及基因组文库构建等实验。。

储存条件：低温运输、4℃保存、有效期一年。

人基因组DNA(男性)促销极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·柱式革兰氏阳性菌RNA提取试剂盒
编号：BTN130970
英文名称：Gram positive bacteria RNA Column extraction kit
规格：50次

·酸洗玻璃珠(1500～2000μm)
编号：BTN100307E
英文名称：Acid-Washed Glassbeads(1500～2000μm)
规格：10g

·25mM*化*溶液(PCR级MgCl2溶液)
编号：BTN90302
英文名称：MgCl2，PCR Grade
规格：5mL
本产品为专门用于PCR的MgCl2，其浓度为25mM，可以用于调节MgCl2的最佳浓度。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

·零诱导培养基
编号：BTN120517
英文名称：Zero-induction Medium
规格：250mL
本产品用于零诱导培养E.coli，它不含任何潜在诱导物，不会出现常规培养基常见的背景诱导(如LB培养基中残留乳糖对lac启动子的背景诱导)，将残留诱导对保种和质粒制备的负面影响降低到了最低，尤其用于制备含强诱导型启动子的质粒，也可用于。含这些质粒细菌的保种。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

·包涵体中量纯化试剂盒
编号：BTN90509
英文名称：Inclusion Body Midiprep Kit
规格：5次
本产品是我们公司包涵体微量纯化试剂盒(BTN90508)的中量提取升级产品，用于中量，快速的提取高质量的包涵体。

产品特点：
1．中量提取，一次可以处理30-50mL的菌液，一次中量提取相当于10-20次微量提取。
2．操作简单快速，整个过程只要四十分钟左右。
3．大规模提取，可以在15-50mL离心管中完成。
4．能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份，使重组蛋白所占比重达到60%以上。
5．细胞裂解通过非离子洗涤剂的化学裂解法，裂解更加温和。
6．得到的包涵体可以用于重折叠。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	250ml
包涵体溶解液	25mL
溶菌酶	3g
Benzonase(1U/μL)	125μl
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，但溶菌酶和Benzonase需要低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

准备工作：
将3g溶菌酶全部加入到25mL溶液A中溶解，然后根据每次的需要量(一次大量提取需要5mL)分成1mL/只放-20℃待用。每次只取用一管含溶菌酶的溶液A。
包涵体中的重组蛋白一般比溶解状态中的蛋白质更能够抵抗微量内源性蛋白水解酶的降解，如果实验发现得到的重组蛋白确有降解，则需要在溶液A中新鲜加入自备的蛋白酶抑制剂混合物(BTN80808)。

一、细胞裂解和包涵体的纯化：
1．在蛋白诱导期结束时，转移30mL菌液到一个干净的塑料离心管中。
2．5000-7,000rpm室温离心3分钟，小心弃上清。
3．加入5mL含溶菌酶的溶液A重悬细胞。
4．室温放置10-20分钟裂解细菌，其间可以用手轻弹离心管混匀。
5．-20℃冷冻至凝固。凝固有利于裂解细菌，所以一定要凝固到细菌溶液变成固体。
6．室温水浴解冻。如果裂解充分，细菌释放出的DNA将使裂解物十分粘稠。如果不粘稠，说明裂解不充分，需要重复3-6步，否则完整细菌将和包涵体一起沉淀，影响包涵体的纯度。如有条件最好在显微镜下检查细菌是否充分裂解。
7．加入25μL的Benzonase(1U/μL)，脱色摇床上摇晃直到裂解液不再粘稠，一般需要30分钟左右(检查方式是将裂解物倾倒转移到另一离心管中，在转移过程中看其是否粘稠)。
8．5000-7,000rpm 4℃离心5分钟，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重组蛋白，可以保留作为SDS-PAGE对照样品。
9．将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在25mL的溶液B中，轻柔混匀后室温放置5分钟。
10．5000-7,000rpm 4℃离心10分钟，小心收集上清,可以作为包涵体第一次洗涤的对照样品。
11．将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在25mL的溶液B中，轻柔混匀后室温放置5分钟。
12．5000-7,000rpm 4℃离心10分钟，小心收集上清作为包涵体第二次洗涤的对照样品。一般洗涤两次就能够得到足够纯净的包涵体，如果需要更多洗涤，需要用户单独购买包涵体洗涤液(溶液B)。
13．得到的沉淀即为包涵体，可以长期放置在冰箱待用或直接进入包涵体的溶解步骤。

二、包涵体的溶解：
1．在包涵体沉淀中加入5mL包涵体溶解液，用枪头充分吹打后漩涡震荡。如果低温放置，包涵体溶解液会产生沉淀，必须45-65℃溶化并混匀后才能使用。
2．室温放置1小时使蛋白质充分溶解。
3．20000g 4℃离心20分钟，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：检查离心管能否承受此离心力。SDS-PAGE检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有，说明包涵体没有完全溶解，需要用适当增加包涵体溶解液的用量。
4．得到的蛋白质溶液可以用于复性等试验。由于不同的蛋白质有不同的最佳复性条件，所以本公司不能提供统一的复性溶液，需要用户自己摸索。
 注意：包涵体纯化过程中引入了溶菌酶、DNase和RNase等外源蛋白质，在SDS-PAGE分析时可能有额外条带出现。


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·AP标记亲和素
编号：BTN131087
英文名称：AP-Avidin
规格：100mg
本产品为碱性磷酸酶标记的亲和素，SDS-PAGE检测均一性。每mol亲和素含有大约1mol碱性磷酸酶。

产品应用：
1．在内源过氧化物酶会对实验造成影响的免疫组化中使用；
2．免疫印记；
3．酶联免疫吸附试验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性单位定义：1单位表示在37℃，pH9.5情况下，每分钟从对硝基酚磷酸盐释放1.0μmol对硝基酚。

·基因转染增强剂
编号：BTN140621
英文名称：Hexadimethrine bromide
规格：0.5mL
聚凝胺Polybrene又名为*化己二甲铵、海美*铵，CAS号：28728-55-4。聚凝胺是一种多聚阳离子聚合物，常用于哺乳动物细胞的DNA转染实验以增强转染效率。Polybrene 增强转染效率原理图如下：


产品特点：
1．Polybrene广泛应用于脂质体转染、逆转录病毒介导的基因转染及慢病毒介导的基因转染等实验，可以显著提高各种逆转录病毒、慢病毒及脂质体的转染效率。
2．Polybrene对某些细胞(如末端分化的神经元，DC细胞)毒性较大，初次应用建议先做毒性测试。
3．Polybrene还是一种有效的抗肝素剂(肝素拮抗剂)，常用来生产非特异性凝集的红细胞；还可用于蛋白测序，小剂量的Polybrene在自动测序分析可明显改善多肽的降解现象；PVDF 膜上加入Polybrene能提高膜的亲和性。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

慢病毒感染举例：
1．第一天按实验需要将细胞铺板(比如24孔板)。细胞数以第2 天密度约50%为宜。37℃培养过夜。
2．第二天感染前，从-80℃冰箱取出病毒，冰浴融化，参考相关文献或者根据预实验得到的MOI 值用新鲜完全培养基将病毒稀释成所需浓度。
 注意：轻轻混匀，不要使用振荡器。
3．吸去细胞原有培养基，将按照MOI 稀释好的病毒液+培养基+ Polybrene(对于293细胞，终浓度6μg/mL)加入细胞中，轻轻摇匀。37℃培养过夜。
 注：病毒液-培养基-Polybrene 混合液，按如下操作制备混合液：
①添加完全培养基(60mm培养皿2mL，100mm培养皿3mL)，37℃预热；
②加入病毒轻轻混匀；
③加入Polybrene 至终浓度为2μg-12μg/mL。
轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。当MOI高于20时，建议客户添加Polybrene(终浓度2～12μg/mL，浓度因不同的细胞而异，具体的请参考相关文献)来提高病毒的感染效率。如果感染目的细胞是Jurkat，kasumi，NB4，H929，GBC-SD，MCF-7等，建议不要添加Polybrene；大部分原代细胞感染也不需要添加Polybrene，以上仅供参考。
4．感染48小时后，吸除含慢病毒的培养基，换为新鲜的培养基。
5．继续培养24～48小时后，根据需要收集细胞检测目的蛋白的表达。

质粒转染：
1．第一天按实验需要将细胞铺板(比如24孔板)。细胞数以第2 天密度约50%为宜。37℃培养过夜。
2．准备 DNA-培养基-Polybrene混合液。按如下操作制备混合液：
①添加完全培养基(60mm培养皿2mL，100mm培养皿3mL)，37℃预热；
②添加10ng～10μg质粒轻轻混匀；
③加入Polybrene 至终浓度为5μg-10μg/mL。
 轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。
3．去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液，在37℃孵育细胞6-20h。细胞培养的前6h内约每1.5h 轻柔混匀。
4．去除 DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution(15%DMSO in 1×HBSS)轻轻盖住细胞(60mm培养皿3mL，100mm培养皿4mL)。每次加入溶液时用手轻晃培养盘10s，使得液体均匀分布。然后37℃孵育细胞4min。
5．立即去除DMSO shock solution，用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60mm培养皿每次用5mL培养液清洗，100mm培养皿每次用10mL培养液清洗。
6．加入完全培养基到细胞中，根据需要进行后续实验。
 稳定转化：去除生长培养基，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。
 瞬时表达：去除生长培养基，加入新鲜的生长培养基。24-72h后收获细胞。

备注：Polybrene的使用浓度依据细胞种类，转染方法等影响，以下使用浓度仅作参考。
1．为提高腺病毒转染效率和LacZ转基因表达，使用6μg/mL Polybrene处理病毒载体后转入BHK-21细胞(MOI为100)，转染率提高到95%，没有用Polybrene处理的只有2.3%转染率。
2．在KSHV(Kaposi"s sarcoma-associated herpesvirus)纯化和转染实验中，浓缩的病毒与8μg/mL Polybrene加到BCBL-1细胞中37℃下孵育2h。
3．在逆转录病毒构建研究中，用v-rasHa 逆转录病毒转染角质细胞(Keratinocytes)后在含有4μg/mL Polybrene培养基中培养3天，病毒滴度为1×107 virus/mL，MOI 为1。
4．在shRNA编码的慢病毒载体的转染研究中，病毒上清中加入8μg/mL Polybrene，转染到HEK293细胞中。
5．在慢病毒shRNA转染研究中，将含有6μg/mL Polybrene的新鲜培养基加入到培养24h的RCC10细胞中，用慢病毒颗粒转染细胞。


人基因组DNA(男性)促销关键词：Human Genomic DNA(Male),BTN131031,人基因组DNA(男性)


·一站式长效期SDS-PAGE套装A(>30KD)
编号：BTN100908A
英文名称：One-Stop Stable SDS-PAGE Pack(A)
规格：30次
本产品是在SDS-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)套装基础上改良而得，主要改良的地方有两处：一是配胶液的pH偏酸，二是将还原剂加入到电泳液中。

产品特点：
1．偏酸的pH使PAGE胶比常规SDS-PAGE 更加稳定，便于配预制胶，增加实验的可重复性。
2．能降低蛋白质的脱*反应和烷基化反应，也能阻止蛋白质的二硫键再生成。
3．把还原剂整合到电泳液中，避免了蛋白质在电泳过程中重新形成二硫键，蛋白条带比常规SDS-PAGE 更加锐利。
4．可把分离胶和浓缩胶配胶液整合成一个，成分更简单。
5．更换电泳液即可用于不同大小的蛋白(A型电泳液适合20 kD以上蛋白，B型适合2-50 kD蛋白)，分离多肽时不需要Tricine-SDS-PAGE。
6．即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
7．安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺。
8．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。

产品组成：

成分	30T(A)	30T(B)
丙*(代"烯")酰胺(干粉)	60g	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺(干粉)	3g	3g
长效期SDS-PAGE 配胶液，4×	200ml	200ml
长效期SDS-PAGE还原剂	10ml	10ml
TEMED	1.5ml	1.5ml
过硫*(代"酸")铵	1g	1g
长效SDS-PAGE上样液，5×	1ml	1ml
长效期SDS-PAGE电泳液A型	20L	-
长效期SDS-PAGE电泳液B型	-	20L
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存(SDS-PAGE上样液需-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：

一、使用本产品不需要浓缩胶，直接配制分离胶。如果使用A型电泳液(分离30 KD以上蛋白质用)，最好配制10%的PAGE胶；如果使用B型电泳液(分离2-30 KD的蛋白质用)，最好配制12%的PAGE胶。也可以选择其他胶浓度，但各成分用量需要按比例调整。
1．第一次使用本产品时需先配制30%丙*(代"烯")酰胺溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水，充分摇晃直到溶解即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2．第一次使用本产品时还需配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液(简称30% AB溶液,下同): 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙*(代"烯")酰胺。对长效期SDS-PAGE电泳，丙*(代"烯")酰胺与甲叉双丙*(代"烯")酰胺比例一般在19:1，因为此时PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。制备方法是将3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙*(代"烯")酰胺溶液中，摇晃溶解即得30%的AB溶液，该溶液最好4℃避光(可包上锡箔纸壁光)保存并在一个月内用完。30% AB溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
3．新鲜配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL 去离子水的比例将去离子水加到装有硫*(代"酸")铵干粉的1.5mL EP 管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
4．本产品不需要配制分离胶和浓缩胶两种胶，只需要配一种连续胶。配制方法如下(以下是以配制10mL的胶的用量为例，用户自己需要根据胶的大小决定所需体积)：

胶浓度	用量(mL)			总体积 (mL)
	去离子水	30% AB溶液	4×长效期SDS-PAGE配胶液
10%(对A型)	4.20	3.30	2.50	10
12%(对B型)	3.50	4.00	2.50	10

5．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和30μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。
7．在胶的液面达到顶部的时候停止灌胶并插入梳子，室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
8．拔出梳子，用水冲洗加样孔。
9．配制的PAGE胶可以在4℃长期放置数月，直到使用。注意：需要盖上1×长效期SDS-PAGE 配胶液，否则PAGE胶会变干而无法使用。
10．使用时，将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够量的1×长效期SDS-PAGE电泳液(A型或B型)。
 注意：长效期SDS-PAGE电泳液A型或B型均以干粉形式提供，足够配20 L 1×电泳液。配制时需将全部干粉(含多种没有充分混合的成分，必须一次性全部使用)溶解在去离子水中，并定容到1 L，得到20×长效期SDS-PAGE电泳液，使用时再用去离子水稀释成1×电泳液。20×长效期SDS-PAGE电泳液不需要调pH，可以室温放置。
11．在上槽中加入适量的1×长效期SDS-PAGE电泳液和1/200 体积(以电泳液体积为基数)的长效期SDS-PAGE还原剂并用玻璃棒搅拌混合均匀。
12．在蛋白质样品中加入5×长效期SDS-PAGE上样液(8μL样品加2μL上样液)，72℃加热10分钟。注意：上样液中的一些成分在低温保存时会沉淀，所以用前需要65℃保温10分钟左右使沉淀溶解，混匀后才能使用。上样液中的2-巯基乙*(代"醇")容易挥发，使用多次后用户可以在10μl样品(蛋白质样品+上样液的混合液)中补加0.5μl自备的2-巯基乙*(代"醇")原液，以便使蛋白质充分变性。如果样品是蛋白质沉淀(如TCA沉淀得到的蛋白质)，则需要用Tris缓冲液将其pH调到中性(可用pH试纸检测)，否则残留溶剂可能会改变上样液的pH，严重影响电泳效果。
13．短暂离心，取上清液上样。上样的蛋白总量跟检测方法相关，如果用银染，可以只上样ng级别(对每条带的蛋白量而言)，如果用考染，需要上样μg级别(对每条带的蛋白量而言)。
14．用150V恒压电压进行电泳，直到染料进入胶底部(在B型电泳液中，*酚蓝的速度相当于3-5 KD的蛋白质)。注意：在长效期SDS-PAGE中的电泳速度要快于普通SDS-PAGE。在B型电泳液中的速度又快于A型电泳液。过程中，电流会降低，属于正常现象。
15．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或转膜)。注意：Western转膜需要专门的转膜液(百奥莱博可以提供)。

二、如果需要更高分辨率，也可把上法配制的胶当成分离胶，并在其上再叠加4%的浓缩胶，操作如下：
16．按上面方法配制分离胶，只是倒胶后在胶面距离顶部1.5cm的时候，或者距梳子齿0.5cm时，停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm 厚的水，使胶顶部液面平整。室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)后，用1×长效期SDS-PAGE 配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。
17．配制4%浓缩胶(参考上节第4-6 步)。倒胶后在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
18．拔出梳子，用1×电泳液(A型或B型)冲洗加样孔，后续处理接第7步。

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