末端脱氧核苷转移酶(TdT酶)怎么卖

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名称：末端脱氧核苷转移酶(TdT酶)怎么卖
编号：BTN120312
规格：500U
英文名：Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
品牌：百奥莱博
产地：北京
末端脱氧核苷转移酶 TdT是一种模板非依赖型DNA聚合酶，催化在寡核苷酸、单链和双链DNA的3´-OH重复添加脱氧核糖核苷酸。TdT反应需要含有至少3个碱基的短序列作为引物。以RNA为模板时，TdT性能严格依赖于受体RNA 3´-末端的三级结构和核苷酸的种类。总的来说，TdT对RNA模板的作用效率比DNA模板低。

产品特点：
1．通过Okayama-Berg法给载体或cDNA加上互补同聚尾。
2．线性双链DNA的各类3´-OH末端同聚物加尾。
3．本寡聚脱氧核苷酸和DNA标记。
4．5´-RACE(快速扩增cDNA末端)。
5．凋亡反应的原位定位。

产品组成：

 

成份	规格
末端脱氧核苷转移酶	25μL(20U/μL)
5×反应 Buffer	0.4mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1个活性单位是指在37℃、60分钟内将1nmol脱氧核糖核苷酸掺入多聚核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量。

使用方法：
1．建议按照下表添加如下反应成分
DNA 3´端加尾反应(20μL体系)：

5×反应Buffer	4μL
DNA片段	1pmol of 3´-ends
dATP or dTTP或dGTP or dCTP	130pmol或60pmol
末端脱氧核苷转移酶	1.5μl(30U)
补超纯水到	20μL

DNA 3´端加尾标记反应(50μL体系)：

5×反应Buffer	10μL
线性DNA	10pmol
标记的核苷酸(约10TBq/mmol)	1.85MBq
末端脱氧核苷转移酶	2μl(40U)
补超纯水到	50μL

2．37℃反应15 min。
3．70℃加热10分钟或添加2μL的0.5M EDTA溶液灭活酶，终止反应。

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·即用型易错PCR试剂盒
编号：BTN101005
英文名称：Instant Error-Prone PCR Kit
规格：100次
本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错PCR而开发。易错PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3´→5´校对功能的特性，在一定条件下(如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。

产品特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单，但如果在PCR引物中设计位点，则可使产物克隆到表达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4.可用于连续易错PCR，只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增1kb以下的产物，对于1kb以上的产物，建议分段扩增。

试剂盒组成：

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易错PCR Mix，10×	300μl
易错PCR专用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为一年。

使用方法：
1.以30μL的标准PCR反应体系为例，如果反应体系不是30μL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的PCR管中，加入下列成分：

易错PCR Mix,10×	3μl
易错PCR 专用dNTP，10×	3μl
MnCl2，5mM	3μl
自备DNA模板(10ng/μL)	1μl
PCR引物(自备，10μm each)	10pmol each
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	1-5U
补水到	30μl

2. 按已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR(循环数与突变率的关系见下表)，然后取5μL电泳检查。如果没有优化的PCR条件，一般可以先尝试下面的PCR条件：

PCR前变性	94℃ 3分钟
易错PCR	94℃ 1分钟	循环30次(见注)
	45℃ 1分钟
	72℃ 1分钟

注：易错PCR一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理。

循环次数与突变几率的关系
易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率，进而决定每个PCR产物可能得突变位点数，所以所需循环数由客户根据需要改动。

PCR循环数	每个碱基突变几率	PCR终产物中的突变位点数
		100bp	200bp	400bp	800bp	1600bp
5	0.0033	0.00	0.66	1.3	2.6	5.3
10	0.0066	0.66	1.3	2.6	5.3	11
20	0.013	1.3	2.6	5.3	11	21
30	0.020	2.0	4.0	7.9	16	32
50	0.033	3.3	6.6	13	26	53

3.电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。

疑难解答：
Q：易错PCR与定点突变PCR有什么区别？
A：定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组，也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化)，包括碱基的添加、删除、点突变等。它需要预先知道靶基因的序列。易错PCR是一种随机突变，它不需要预先知道靶基因的序列(引物结合部分除外)，但需要后续的筛选方法筛选自己所需要的突变。
Q：易错PCR的错误率是多少？
A：易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，对500bp的PCR产物，相当于有4%的PCR片段为野生型，12%的含一个突变，20%的含两个突变，22%的含三个突变，18%的含四个突变，12%的含五个突变，12%的含六个或更多突变。
Q：如果需要每个核苷酸有高于0.66%的突变率，如何办？
A：可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但最好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮PCR。此外不能用少于千分之一的第一次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCR最好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成(可以分成很多100μL体系进行)。


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ALH072 组织细胞miRNA提取试剂盒 Tissue Cell microRNA Extraction Kit
YT402 核酸酶/RNA/DNA清除剂(喷雾清除剂) RNase, DNase, RNA and DNA Away
WE0185 血块基因组DNA提取试剂盒 BloodClot Blood DNA Extraction Kit
BTN90802 柱式DNA污染清除剂(大处理量) Maxi Column DNA Scavenger
SV1021 9°N DNA 连接酶
RFT002 100bp plus DNA ladder(100～5000bp)
KFS130 溶酶体绿色荧光探针 LysoGreen
SY0359 SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 SDS-PAGE Gel Preparation Kit
SV0145 BmtI-HF限制性内切酶 BmtI-HF Restriction Endonuclease
BTN100908B 一站式长效期SDS-PAGE套装B(2-30KD) One-Stop Stable SDS-PAGE Pack(B)
HR0199 血浆蛋白提取试剂盒(2D电泳用) Plasma protein extraction kit (2D electrophoresis)
SY0008 线性化丙*(代"烯")酰胺溶液(5mg/ml) Linear Acrylamide Solution (5mg/ml)
BTN3160 RNase A溶液(10mg/mL) RNase A Solution(10mg/mL)
BTN90603A 随机引物法DNA探针标记试剂盒 Random Primer DNA Labeling Kit
SV1539 α-N-乙酰半乳糖胺酶
YT295 GSSG和GSH检测试剂盒 GSH and GSSG Assay Kit
KFS374 NAD+/NADH荧光检测试剂盒
SY0622 激动素 Kinetin
SV0821 凝胶上样染料，橙色 （6X）
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SY0255 3:1琼脂糖 NuSieve3:1Agarose
RFT164 通用型PCR试剂盒(含模版和引物)
KFS228 P53蛋白检测试剂盒 P53 Detection Assay(Western Blot)
ALH424 强效EB去除剂 EB Eraser
YT602 葡萄糖胺-2-差向异构酶 Glucosamine-2-Epimerase (Crude Enzyme)
BTN130821 阿尔玛蓝细胞增殖与细胞毒检测试剂 Alamar Blue Cell Proliferation And Cytotoxicity Detection Kit
BTN60904 一站式RNA电泳套装 One-Stop RNA Electrophoresis Pack
SV1374 HEN1 miRNA 甲基转移酶
YT191 封闭液(YT190专用) Block Solution For YT190 Chemiluminescent EMSA Kit
BTN120627 CTP溶液(100mM) CTP Solution，100mM
SY0510 细胞增殖示踪荧光探针 CFDA, SE
SV0535 NheI限制性内切酶 NheI Restriction Endonuclease
WE0180 粪便基因组DNA提取试剂盒 Stool Genomic DNA Extraction Kit

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