手机验证
604
Ribo-SPIA RNA Amplification Kit
1年
北京百奥莱博科技有限公司
低温运输,-20℃保存,有效期为1年。使用方法:一:样品RNA的制备本产品不含RNA相关试剂,用于Ribo-SPIA扩增的每个批次的RNA样品最好先做一个预实验。总RNA样品的浓度必须在1-20ng/μL,一次RIBO-SPIA所需总RNA的量为1ug。也可以使用mRNA,一次Ribo-SPIA所需总mRNA的量为5-100 ng。过低则需要浓缩,过高则需要用无RNase的水稀释。RNA必须经过DNase处理,不能含DNA污染。微量提取时不能使用核酸类的助沉剂。注意:本产品只能扩增含带polyA尾巴的RNA,不能扩增DNA和不含polyA尾巴的RNA。二:一管式双链cDNA的合成1.在0.5mL PCR管中,按下表配制双链cDNA合成反应。注意:最好每次实验设置一个阴性对照组,在此对照中用超纯水替代自备的mRNA或总RNA:<table width=600 border=1 style="border-collapse:collapse;text-align:center;border:black;"><tr style="text-align:center;font-weight:bold;border-bottom:3px solid;background-color:#D7D1F8;"><td>成分<td>用量<tr><td>自备mRNA或总RNA<td>4μL mRNA(5-100ng)或4μL总RNA(1ug)<tr><td>SPIA RT引物MTA3 20uM<td>1μl<tr><td colspan=2 style="text-align:left;">65℃,5分钟后室温放置2分钟,短暂离心后放4℃<tr><td>cDNA一链合成缓冲液<td>4μl<tr><td>MMLV逆转录酶<td>1μl<tr><td colspan=2 style="text-align:left;">轻柔吹打混匀后得到10μL的反应体系。42℃保温90分钟合成第一链cDNA。结束后70℃保温15分使酶变性,最后4℃放置,然后加入下列成分,得到80μL反应体系。<tr><td>超纯水<td>50μl<tr><td>cDNA二链合成缓冲液<td>16μl<tr><td>cDNA二链合成酶混合液<td>4μl<tr><td colspan=2 style="text-align:left;">轻柔吹打混匀后,短暂离心,16℃保温2小时合成cDNA第二链,然后75℃ 15分灭活酶,最后4℃放置待用</table>三:SPIA扩增2.在0.5mL PCR管中,按下表配制20μL的SPIA反应体系。注意:最好设置两个阴性对照组,在此两个对照中分别用超纯水替代SPIA引物和cDNA双链反应液。<table width=600 border=1 style="border-collapse:collapse;text-align:center;border:black;"><tr style="text-align:center;font-weight:bold;border-bottom:3px solid;background-color:#D7D1F8;"><td>成分<td>用量<tr><td>cDNA双链反应产物<td>40μL(来于上步)<tr><td>SPIA扩增引物10uM<td>16μl<tr><td>SPIA反应液,5×<td>16μl<tr><td>超纯水<td>42μl<tr><td colspan=2 style="text-align:left;">94℃20秒后50℃放置复性待用<tr><td>SPIA酶混合液<td>6μl<tr><td colspan=2 style="text-align:left;">轻柔吹打混匀后得到120μL反应体系,50℃扩增60分钟,最后4℃放置</table>四:SPIA扩增产物的检测3. 取5μL SPIA扩增产物进行PAGE电泳检测。标准的反应结果是产生长度在200-2000bp之间的产物。4. 如果产物将用于PCR定量,则可以不经过纯化直接使用,如果需要用于芯片杂交和浓度测定,则需要按常规的方法纯化cDNA以便去除残留的dNTP和引物。5. OD检测纯度和浓度。在OD260的波长下测样品你给的光吸收。由于扩增产物是单链DNA,故1OD260=33ug/mL。6. 所得DNA可以放-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒大量库存促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒大量库存促销
编号:BTN131083
规格:20次
英文名:Ribo-SPIA RNA Amplification Kit
品牌:百奥莱博
产地:北京
血液样品和各种临床样品(包括组织检查、FFPE切片或少量细胞样品)都是基因表达分析和诊断的常见材料,但这些样品通常数量有限,质量不高,还没法进行第二次取样。所以得到足够RNA量供后续试验是一个非常棘手的瓶颈。为解决这一问题,本公司根据Ribo-SPIA技术,开发了本产品。Ribo-SPIA技术的核心是利用DNA/RNA嵌合引物,以带polyA尾巴的mRNA为模板进行逆转录并得到双链cDNA、RNase H不间断地在cDNA第1链中的RNA部分产生裂口,DNA聚合酶以此裂口为基础进行链取代聚合反应,产生cDNA单链。
产品特点:
1.高效,能线性扩增1000-10000倍,能用5-100 ng总RNA模板扩增得到5μg左右的单链cDNA(扩增的cDNA主要来源于总RNA中的mRNA)。
2. 步骤简单方便,扩增在恒温进行,只需要4个小时,不需要特殊仪器设备。
3. 保真性好,保持RNA样品中各分子的相对丰度。
4. 尤其适用于RNA产量和质量都不高的样品。
5.扩增得到的单链cDNA能直接用于各种后续试验,包括qPCR、芯片分析、杂交反应等。
6. 本产品足够做10次双链cDNA的合成,20次SPIA扩增。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
cDNA一链合成缓冲液 | 40μl |
MMLV逆转录酶 | 10μl |
cDNA二链合成缓冲液,5× | 160μl |
cDNA二链合成酶混合液20× | 40μl |
SPIA RT引物 | 40μl |
SPIA反应液,5× | 320μl |
SPIA扩增引物 | 320μl |
SPIA酶混合液 | 120μl |
超纯水 | 1ml |
说明书 | 1份 |
成分 | 用量 |
自备mRNA或总RNA | 4μL mRNA(5-100ng)或4μL总RNA(1ug) |
SPIA RT引物MTA3 20uM | 1μl |
65℃,5分钟后室温放置2分钟,短暂离心后放4℃ | |
cDNA一链合成缓冲液 | 4μl |
MMLV逆转录酶 | 1μl |
轻柔吹打混匀后得到10μL的反应体系。42℃保温90分钟合成第一链cDNA。结束后70℃保温15分使酶变性,最后4℃放置,然后加入下列成分,得到80μL反应体系。 | |
超纯水 | 50μl |
cDNA二链合成缓冲液 | 16μl |
cDNA二链合成酶混合液 | 4μl |
轻柔吹打混匀后,短暂离心,16℃保温2小时合成cDNA第二链,然后75℃ 15分灭活酶,最后4℃放置待用 |
成分 | 用量 |
cDNA双链反应产物 | 40μL(来于上步) |
SPIA扩增引物10uM | 16μl |
SPIA反应液,5× | 16μl |
超纯水 | 42μl |
94℃20秒后50℃放置复性待用 | |
SPIA酶混合液 | 6μl |
轻柔吹打混匀后得到120μL反应体系,50℃扩增60分钟,最后4℃放置 |
我公司生产供应销*(代"售")的核酸扩增(PCR)产品正全系列现货促销,满分期待您的垂询选购Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒大量库存促销。
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。