北京酿酒酵母Y187感受态细胞厂家

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名称：北京酿酒酵母Y187感受态细胞厂家
编号：BTN140389
规格：10×100μL
英文名：E.coli Y187 Rosetta Competent Cell
品牌：百奥莱博
产地：北京
 Y187菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母单杂，双杂实验用菌株，MATα型，可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株(Y2HGold，AH109等)通过mating 操作进行筛库试验。Transformation marker 为: trp1，leu2，报告基因为：lacZ，MEL1。Y187-GAL4 酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N 端1～ 174 位*基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒PGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C 端768～881 位*基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4 系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N 端1～174 位*基酸区段的DNA 结合域(DNA-BD)和位于C端768～881 位*基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD 单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD 不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD 融合，形成 bait 融合蛋白(bait -BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果 bait和prey发生相互作用，就会促使 BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。Y187 有两个报告基因：lacZ，MEL1，分别由两种不同的启动子(G1，M1)启动，这两种启动子只有GAL4 识别的17bp 核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。

 Y187感受态细胞是实验室常用酵母双杂用菌株，本产品经特殊工艺制作而成，经PGADT7质粒检测转化效率为104 cfu/μg DNA。

菌株基因型：MATα，ura3-52，his3-200，ade 2-101，trp 1-901，leu 2-3，112，gal4Δ，met–,gal80Δ，URA3: :GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ，MEL1

产品组成：

 

成分	规格
Y187感受态细胞	0.1ml×10支
PGADT7(control vector)，10 ng/μL	10μl
Carrier DNA，5μg/μL	100μl
PEG/LiAc	5ml
说明书	1份

储存条件：感受态细胞干冰运输、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/liAC、PGADT7质粒4℃保存；有效期半年。

自备试剂：目的DNA、YPDA、SD培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中依次加入预冷的目的质粒2-5μg，CarrierDNA(95-100℃ 5分钟，快速冰浴，重复一次)10μL，PEG/LiAc 500μL，吹打混匀，30℃水浴30分钟(15分钟时翻转6-8次混匀)。
3. 42℃水浴15分钟(7.5分钟时翻转6-8次混匀)。
4. 5000rpm离心 40秒，弃上清。取400μL ddH2O 重悬沉淀，5000rpm离心 30秒，弃上清。
5. 取 50μL ddH2O 重悬沉淀，涂板，29℃培养48-96小时。

注意事项：
1. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA 平板29℃，48h培养可见直径1mm 克隆；涂SD 单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 三缺或四缺平板29℃，80-90h培养可见直径1mm 克隆。
2.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。

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·遗传霉素(G418)干粉
编号：BTN100838
英文名称：G418 Sulfate (Geneticin) Powder
规格：100mg
G418又叫Geneticin(遗传霉素)，分子式为C20H40N4O10·2H2SO4，分子量为692.71，CAS号为108321-42-2，白色结晶，溶于水。在分子遗传试验中,是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。

结构式：


抗性机制：它通过干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成，对原核和真核细胞都有毒性。真核细胞中表达细菌APH(*基糖苷磷酸转移酶)的基因(源自Tn5)，可使G418失去作用。

储存条件：常温运输，4℃避光保存、有效期一年。


北京酿酒酵母Y187感受态细胞厂家关键词：E.coli Y187 Rosetta Competent Cell,酿酒酵母Y187感受态细胞,BTN140389

HR0095 细菌外膜蛋白提取试剂盒 Bacterial outer membrane protein extraction kit
SV1005 Q5 反应缓冲液套装
YT041 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit
BTN120654E Southern DNA Marker Oligo(生物素标记) Southern DNA Marker Oligo(Labeled by Biotin)
SV1450 羊抗小鼠 IgG 磁珠
SV0125 BfuAI限制性内切酶 BfuAI Restriction Endonuclease
KFS324 FITC-Brdu细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法) BrdU cell proliferation Detection Kit
SY0568 iFluor 555标记鬼笔环肽(橘色) iFluor 555 phalloidin
SV0687 SexAI限制性内切酶 SexAI Restriction Endonuclease
BTN101001 Benzonase核酸酶 Benzonase Nuclease
HR0573 细胞固定/破膜试剂盒 Cell fixation/membrane rupture Kit
SY0203 STAT5-GFP报告基因质粒 STAT5 GFP Reporter Plasmid
YT288 一氧化*(代"氮")合成酶检测试剂盒(荧光法) Nitric Oxide Synthase Assay Kit
BTN51101 常态细胞转化液(免感受态细胞制备) Tranzol
ALH211 高保真PCR MasterMix 2×KOD PCR MasterMix
YT548 谷*酸脱*酶 L-Glutamate Dehydrogenase (Crude Enzyme)
WE0276 BCA蛋白定量试剂盒 BCA Protein Assay Kit
BTN130948 革兰氏阴性菌DNA提取试剂盒(百万碱基级) Gram negative bacteria DNA extraction kit(millions of base)
SV1277 Quick-Load Purple 100 bp DNA Ladder
北京酿酒酵母Y187感受态细胞厂家关键词：E.coli Y187 Rosetta Competent Cell,酿酒酵母Y187感受态细胞,BTN140389

SY0460 重组人胰岛素 Insulin, human recombinant
SV0381 FspI限制性内切酶 FspI Restriction Endonuclease
BTN111208B 植物线粒体纯化试剂盒B(精提) Plant Mitochondria Purification Kit(B)
HR0371 考马斯亮蓝染色液 Commassie Blue Staining Solution
SY0099 GAL4-Luc荧光素酶报告基因质粒 GAL4 luciferase reporter plasmid
BTN160227 甲醛-乙酸-乙醇固定液(FAA) Formaldehyde-acetic acid-ethanol Fixative
BTN100941 通用型全基因组扩增试剂盒 Universal Whole Genome Amplification Kit
SV1649 BioLux Gaussia 荧光素酶检测试剂盒
YT389 dNTP套装(100mM) dNTP Set
BTN131220 即用型BGG蛋白标准品系列 Instant BGG Standard
BTN80104 一站式miRNA柱式提取试剂盒 One-stop miRNA column extraction kit
SV1000 LongAmp Taq 反应缓冲液套装
YT036 蛋白浓度测定试剂盒(增强型BCA法) Enhanced BCA Protein Assay Kit

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