大肠杆菌DH10B电击感受态细胞 克隆与表达

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大肠杆菌DH10B电击感受态细胞 是高品质的克隆与表达产品，由北京百奥莱博供应，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多大肠杆菌DH10B电击感受态细胞等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：大肠杆菌DH10B电击感受态细胞 克隆与表达
编号：BTN160901
规格：50μL×5
品牌：百奥莱博
英文名：E.coli DH10B Electroporation-Competent Cell
产地：国产|进口
 本电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。DH10B菌株来源于MC1061菌株，mcrA、mcrBC 及mrr突变使DH10B菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(无论真核生物还是原核生物的基因组DNA 都能被高效的转入DH10B中)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。φ80dlacZΔM15 标记的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选，rpsL 赋予其链霉素抗性。DH10B电击感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建。本感受态细胞经特殊工艺制作，经 pUC19质粒检测，转化效率>1010cfu/μg。
 菌株基因型为：[F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1endA1 araD139 Δ(ara，leu)7697 galE15 galK λ- rpsL nupG。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC培养基等。

使用方法：
1. 将0.1 cm的电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的DH10B电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。(注：对于质粒，测定转化效率使用1μl 10 pg/μL的对照质粒pUC19；对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液(10mM Tris HCl，pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA浓度不超过100 ng/μL，体积不超过5μL/50μL感受态。)
3. 用 200μl 枪头(用刀切除0.5 cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4.启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.4 kV(此为BioRad电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作)，将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5. 向电击杯中加入700μL 不含抗生素的无菌培养基 SOC.，混匀后转移到空EP 管中，37℃，200rpm 复苏60分钟。
6. 5000rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200μL 涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。平板上(因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少13小时。

注意事项：
1. 加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。
2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4.电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
6. 对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液(10mM Tris HCl,pH7.5; 1mM EDTA)重悬产物，保证DNA浓度不超过100 ng/μL。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。
8.转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
9.电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。

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·荧光素标记的生物素
编号：BTN131093
英文名称：FITC-Biotin
规格：5mg
本产品为荧光素标记的生物素，激发波长492nm，发射波长510nm。颜色为黄绿色。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·核酸外切酶I
编号：BTN120410
英文名称：Exonulease I
规格：750U
核酸外切酶I是单链特异性3´→5´核酸外切酶，从ssDNA的3´-OH末端分解生成5´-单核苷酸。本酶对单链DNA的特异性非常高，不分解双链DNA及RNA。

产品特点：
➤ PCR反应后残存Primer的分解，对PCR产物进行测序时，如果在反应体系中残存Primer和dNTP，测序反应则不能正常进行。使用Exonuclease I可以解多余的Primer；同时使用SAP(BTN120403)可降解多余的dNTP，之后不需要对 PCR产物进行精制，立即可以进行测序反应。
➤ P在反应液中去除ssDNA fragment。

产品组成：

 

成分	规格
核酸外切酶I(5U/μl)	150μL
10×Buffer	1ml
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期半年。

贮存Buffer：Tris-HCl(pH7.5)20mM，EDTA 0.5mM，DTT1mM，Glycerol 50%。

反应Buffer(10×)：Glycine-KOH(pH9.5)670mM，DTT 10mM，MgCl2 67mM。

热失活：80℃热处理15分钟

活性定义：以热变性的小牛胸腺DNA为底物，在37℃、pH9.5的条件下，30分钟内产生10nmol的酸可溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

纯度
1．25U的本酶和1μg的λDNA-Hind III片段在37℃、pH7.5的条件下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2．25U的本酶和1μg的Closed circular(RFI)pBR322 DNA在37℃、pH7.5的条件下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
3．25U的本酶和1μg的M13 mp18 ssDNA在37℃、pH7.5的条件下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
4．25U的本酶和1μg的16S，23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应16小时，RNA的电泳谱带不发生变化。


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