柱式藻类RNA大量提取试剂盒特价促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")柱式藻类RNA大量提取试剂盒特价促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：柱式藻类RNA大量提取试剂盒特价促销
编号：BTN120504
规格：5次
英文名：Algae RNA Column large-scale extraction kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
本试剂盒是在本公司柱式藻类RNA提取试剂盒(BTN120503)的大提升级产品，跟柱式藻类RNA提取试剂盒相比，它具有下列特点：
1.样品处理量大，最多可以处理50mL液体藻类培养物。
2. 操作简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
3. RNA 纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
4. RNA产量高，一般在20-70μg/mL液体藻类培养物(约2.0×107个细胞)。非酶细胞破裂法，适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	150ml
溶液D	50ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
RNA 洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将50mL液体藻类培养物在塑料离心管中5000-7,000rpm 4℃离心1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入10mL溶液A并充分吹打混匀。注意：溶液A存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入10mL溶液B，剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。注意：不要超过5分钟，否则RNA 容易降解。
5. 5000-7,000rpm 4℃离心3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的50mL塑料离心管中。
6.在上清液中加入2mL自备的*仿，充分振荡30秒混匀。
7. 4℃ 5000-7,000rpm离心3～5分钟，转移上清液到一自备的、干净的50mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液(约10mL左右)3倍体积的溶液C和1倍体积的溶液D，充分混匀。如果上清为10mL，则加入30mL溶液C和10mL溶液D。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移后需要室温放置2-3分钟以让RNA跟吸附膜充分结合，然后5000-7,000rpm室温离心30-60秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入后一批混合液，重复操作，直到混合液全部挂柱。
10. 第一次洗涤：将10mL 通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品OD260/280 比值不高，可以再用10mL 通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12.室温离心空柱子(带收集管)半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 50mL塑料离心管中，加入1mL RNA 洗脱液。
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA完整性的电泳检测：
注意：普通DNA上样液不含变性剂，更没经过去RNase处理，所以最好不要用于RNA电泳。
16. RNA产量和纯度产率测定：
将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在DEPC 水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%；也不要稀释过度，使OD读数在仪器的有效范围之外，这样得到的OD 比值没有意义。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用5分钟柱式DNA 清除剂、非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。

欲咨询购买柱式藻类RNA大量提取试剂盒特价促销，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·*基酰dUTP溶液，10mM
编号：BTN120631
英文名称：aminoallyl-dUTP Solution
规格：100μL
本产品是浓度为10mM的5-(3-*基烯丙基)-2’-脱氧鸟苷-5´-三磷酸的溶液，pH为7.0。可在各种DNA聚合酶作用下掺入到新合成的DNA产物中。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·硫*(代"酸")新霉素干粉
编号：BTN60203
英文名称：Neomycin Sulfate Powder
规格：1g
本品为白色或类白色的粉末，极易引湿，水溶液显右旋光性。在水中极易溶解，在乙醇、乙*(代"醚")、丙*(代"酮")或*仿中几乎不溶，有毒。

作用原理：通过结合于70S核糖体亚基阻碍蛋白质合成。高浓度的新霉素可导致真菌细胞毒作用，这是由于它和真核线粒体核糖体(与原核核糖体相似)相互作用，与真核核糖体低亲和力。

抗性机制：抗性基因aph 来于Tn5，编码*基糖苷磷酸转移酶元，它使硫*(代"酸")新霉素失活。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

·λDNA(不含N6-甲基腺嘌呤)
编号：BTN90407B
英文名称：Lambda DNA
规格：5μg
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA，是一种常见的DNA底物，分子量为31.5×106Da/48502bp，浓度为200～500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。

储存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

纯度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后，琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小时)后，在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。


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·长效期SDS-PAGE配胶液
编号：BTN100909
英文名称：Stable SDS-PAGE Gel Buffer
规格：200mL
本产品专门用于配制长效SDS-PAGE胶，本配胶液pH值偏酸性，使PAGE胶比常规SDS-PAGE更加稳定，便于配预制胶，增加实验的可重复性。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

·电泳级耐热型SYBR染料
编号：BTN61201
英文名称：SuperSYBR Green
规格：50μL
本品是改良型的SYBR Green I，它跟常规的SYBR Green I相比检测灵敏度相当，但具有耐热、耐水解的特点，所以十分稳定，使用更加方便。

产品特点：
1. 稳定，本产品浓缩液可以在常温下存放一年以上，方便运输和保存。本产品的1X工作液在常温下的半衰期为120 多天，比常规的SYBR Green I(5天)长20倍以上。
2. 使用方便多样，既可以在制备凝胶时加入到融化的琼脂糖凝胶中，还可以象常规的SYBR Green I、SYBR Gold、SYBR safe、GelStar一样用于电泳后染色。
3. 灵敏，其检测灵敏度跟SYBR Green I相同，比EB 灵敏200-100倍。
4.低毒、环保、健康。
5.可检测各种核酸分子，包括dsDNA、ssDNA、RNA和Oligo。
6. 兼容性好，不但与常用的TAE、TBE和5分钟超快电泳缓冲液SuperBuffer-2等兼容，还与常用的UV 检测系统和可见光激发检测系统兼容。
7. 对 DNA 泳动速度的影响小于常规的SYBR Green I。
8. 半衰期长，自然损耗低，可多次使用，使其相对使用成本比常规的SYBR Green I和其它非对称花青类染料低。

储存条件：常温运输保存(避光)，保存期为一年。

本产品可以在电泳中染色，优点是用量少，但如果与DNA的比例没达到最佳时，带型容易弥散；也可以在电泳后染色，优点是不会对DNA电泳产生干扰，但用量大，还需要额外的染色过程。客户可以根据需要选择使用方法。百奥莱博不建议将本产品用于染色后再上样(即先将其与DNA 混合然后再上样)，也不建议将其用于PAGE(因分子较大,难以进入凝胶)。

使用方法之一：电泳中染色(仅适于琼脂糖凝胶电泳)
1. 按常规方法制备琼脂糖凝胶，胶中不能含任何其他染料。
2. 将按1：10000的比例将SuperSYBR 直接加到熔化的琼脂糖凝胶中并充分摇晃均匀(5μl可以加入到50mL 熔化的琼脂糖凝胶中)，然后倒胶。
3.其余的上样、电泳、UV 观察等步骤按常规操作进行。在254nm 紫外照射透视下，与双链DNA 接合的SuperSYBR 呈现绿色荧光。拍照时最好使用绿色滤光片。如果使用300nm 紫外照射透视*(代"仪")观察也可以，但效果不如254nm。
4. 未用完的胶可以反复融化，如果保存时间在一周以上，最好闭光。
 注意：本方法的灵敏度比在熔化的琼脂糖凝胶中加EB染色的方法高，比电泳后染色经济(后者用量大)。SuperSYBR与DNA 结合同SYBR Green I跟DNA的结合一样，有时会影响DNA样品的相对迁移率。如果出现DNA电泳带弥散的现象，说明SuperSYBR和DNA的比例没达到最佳，可以适当调节DNA的上样量。

使用方法之二：电泳后染色
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用水将10000×SuperSYBR 原液稀释2500倍成4×工作液(如：将5μl SuperSYBR 原液加到10mL 水和2.5mL 5 M NaCl中，加NaCl的目的是促进SuperSYBR与DNA的结合)。由于SuperSYBR 对玻璃和非聚丙*(代"烯")材料具有一定亲和力，故建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙*(代"烯")类容器。
3. 将电泳后染色工作液倒入合适的聚丙*(代"烯")容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。
4.在 254nm紫外照射透视下，与双链DNA 接合的SuperSYBR 呈现绿色荧光。拍照时最好使用绿色滤光片。如果使用300nm 紫外照射透视*(代"仪")观察也可以，但效果不如254nm。
 注意：电泳后染色工作液可以冷冻避光储存，可以在一个星期内重复使用多次。


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·Hoechst 33342干粉
编号：BTN130865
英文名称：Fluorescent Dye Hoechst 33342，Powder
规格：10mg
Hoechst 33342是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。Hoechst 33342常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342-DNA的激发和发射波长分别为350nm和460nm。

CAS号：23491-52-3
分子式：C27H28N6O·3HCl
分子量：561.93

储存条件：低温运输，-20℃干燥避光保存，有效期一年。

·一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装
编号：BTN70606
英文名称：One-Stop miRNA Urea-PAGE Pack
规格：30次
尿素-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离200nt以下的小片段RNA，尤其是20nt左右的microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此我们公司开发了本产品。

产品特点：
1.一站式，含有电泳所需要的所有试剂，即开即用，十分方便，免去了实验人员称取有毒物品。
2. 灵活，可以根据需要配制各种浓度的Urea-PAGE，以便对长度各异的RNA进行电泳。
3.电泳后可直接用于UV观察、银染、胶回收、Northern杂交和放射自显影等。
4. 使用新型缓冲液，可以防止甘油的干扰。

产品组成：

成分	规格
尿素	210g
丙*(代"烯")酰胺	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺	3g
TBE电泳液，10×	250ml
TEMED	1.5ml
过硫*(代"酸")铵(干粉)	1g
miRNAload	10ml
miRNA Marker	30次
固相RNase清除剂	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输、4℃保存(miRNAload、miRNA Marker需要-20℃保存)。保存期为一年。

使用方法：

一、准备工作
1. 用固相RNase清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。
2. 配制1 X电泳缓冲液：将适量的10X电泳缓冲液用RNase-free水稀释10倍，得到1X电泳缓冲液待用。
3. 配制10%过硫*(代"酸")铵溶液：精确称取约100mg过硫*(代"酸")铵到一干净的1.5mL离心管中，按每1mg过硫*(代"酸")铵加10μl RNase-free水的比例加入RNase-free水，摇晃致溶，立即使用。注意：放置时间不要超过一周。

二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积，一般配制一块13cm×15cm×0.8mm的胶需要15mL凝胶溶液，配制一块36cm×45cm×0.8 mm的胶需要120mL凝胶溶液。
2. 根据所需要的凝胶溶液的体积，在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分(此处以配制100mL浓度为15%的凝胶为例):

成分	终浓度	用量
尿素	7M	42g
40% Acrylamide/Bis溶液	15%	37.5mL
10×电泳缓冲液	1×	10ml
补RNase-free水到100mL

注：Acrylamide/Bis的终浓度需要根据待分离RNA长度选择(见下表)。
 

需分离的RNA长度范围	Acrylamide/Bis工作浓度
6-100nt	20%
25-150nt	15%
40-200nt	12%
60-400nt	8%
80-500nt	5%
1000-2000nt	3.5%

3. 搅拌并加热到40-50℃左右，直到尿素完全溶解。
4. 冷却到室温后，将三角瓶接上真空系统抽真空处理10-15分钟以充分去除溶液中的氧气(氧气会降低聚合反应效率)。但如果实验条件有限，此步也可以省略。
5. 边摇晃溶液变加入50μl TEMED和500μl 10%过硫*(代"酸")铵。注意：即使选择其他工作浓度的Acrylamide/Bis，TEMED和10%过硫*(代"酸")铵的用量也不需要随之改变。但如果配置的凝胶溶液的体积变化，TEMED和10%过硫*(代"酸")铵的用量也要按比例改变。
6. 再充分摇晃约30秒后迅速灌胶，然后插入样品梳。
7.室温放置30-60分钟使胶凝固。
8. 将凝胶板放置在电泳装置上后，在上下层分别加入适当量的1×电泳缓冲液。如果不马上使用，需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
9. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液，充分将每个加样空中未聚合的Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。

三、电泳
1.在上样前，预电泳 20-30分钟以使多余的过硫*(代"酸")铵跑出加样空，同时还可以使凝胶的温度升高(到 50℃左右)，有利于RNA电泳时维持在变性状态。预电泳电流见下面第 5 条。
2. 将miRNA样品与等体积的miRNAload 混合，70℃保温 2-3分钟后迅速放置在冰上冷却，快速离心半分钟，放冰上待用。
3. 关电泳仪后开始上样。注意：每次上样后如果不更换枪头，则需要充分吹打洗净枪头以防样品的交叉污染。
4. 同时上样 miRNA Marker。
5. 重开电泳仪，对 13cm×15 cm的胶，以20-30mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止；对 36cm×45cm的胶，则以50-60mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止。

四、后续处理
1.染色观察：将凝胶一面的玻璃板揭开，直接用仍然附着在另一玻璃板上的凝胶进行各种染色，包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每100mL 1×TBE中加 20μL 10mg/mL的EB溶液)、我们公司低毒核酸染料 DNAgreen(每100mL 1×TBE中加10μL DNAgreen 原液)。UV下观察并拍照。
2. miRNA回收：按上法用EB等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后进行胶回收处理。
3. Northern杂交：按上法用EB等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后电转移到带正电的尼龙膜上，然后进行杂交处理。
4. 放射自显影：如果miRNA样品电泳前经过同位素标记，则将凝胶一面的玻璃板揭开，用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来，然后包上保鲜膜，真空抽干，然后使胶跟X光片向对置进行放射自显影。

我公司正在优惠促销RNA纯化等系列产品，期待您的咨询选购柱式藻类RNA大量提取试剂盒特价促销。