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- Cmbio
- 上海
- CM-6029K
- 2025年08月31日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
零下80度
- 保质期：
1年
- 英文名：
BJ5183-AD-1 电转化Chemically Competent Cell
- 库存：
1000只
- 供应商：
上海淳麦
- 规格：
20*100ul
BJ5183-AD-1 Electroporation-Competent Cell
BJ5183-AD-1感受态细胞基因组：
endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (Strr) [pAdEasy-1 (Ampr)]
BJ5183-AD-1感受态细胞简要说明：
BJ5183-AD-1 是携带了腺病毒质粒 pAdeasy-1 的 BJ5183 菌株。-CMbio-BJ5183 菌株是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株，是目前腺病毒系统最常用的感受态细胞。-CMbio- BJ5183 菌株含有 sbcBC recBC 双重突变，赋予 BJ5183 细胞较强的重组能力，有利于转入的目的基因与腺病毒骨架 质粒的重组。endA1（缺失核酸内切酶）的突变有利于重组 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。BJ5183-AD-1 菌株细胞中已经提前转入了腺病毒质粒 pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]，赋予该 菌株氨苄抗性，在病毒质粒构建时，只需转入线性化的目的质粒即可，简化了实验步骤，提高了病毒质粒重组概率。 Strr 赋予 BJ5183-AD-1 菌株链霉素抗性。-CMbio-
-CMbio-BJ5183-AD-1 电击感受态细胞适用于普通质粒和大质粒的构建，经特殊工艺制作，pCAMBIA2301 质
粒(size:1163bp)检测转化效率>1×106 cfu/μg DNA。
BJ5183-AD-1感受态细胞操作说明：
1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使乙 醇充分挥 发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中 静置 5 分钟充分降温。 2. 取-80℃保存的 BJ5183-AD-1 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用 手拨打 EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pCAMBIA2301；B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA) 重 悬，DNA 浓度不超过 100 ng/μl，体积不超过 5 μl/50 μl 感受态。-CMbio-
3. 用 200 μl 枪头(用刀切除 0.5cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用 电转仪 推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。-CMbio-
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后，转移到 50 ml 离心管（BD Falcon 50 ml 锥形离心管等），向离心管中 补加 S.O.C. 培养基至 10 ml。37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。-CMbio-
6. 5000 rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大， 若全部涂 板请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。-CMbio-
DH5α感受态细胞 TOP10感受态细胞 TOP10F′ 感受态细胞 Mach1-T1感受态细胞 T1感受态细胞 JM109感受态细胞 JM110感受态细胞 XL1-Blue感受态细胞XL2-Blue感受态细胞 DB3.1感受态细胞 Stbl2感受态细胞 Stbl3感受态细胞 XL10-Gold感受态细胞 TG1感受态细胞 HB101感受态细胞 SURE感受态细胞 DH10B感受态细胞 DH10Bac感受态细胞 BJ5183感受态细胞BJ5183-AD-1感受态细胞 Stable感受态细胞 Turbo感受态细胞 F-DH5α感受态细胞 F-TOP10感受态细胞 DH5a 电转化感受态细胞 TOP10 电转化感受态细胞 SURE 电转化感受态细胞 BJ5183 电转化感受态细胞 BJ5183-AD-1 电转化感受态细胞 DH10B 电转化感受态细胞 XL1-Blue 电转化感受态细胞 stable 电转化感受态细胞 TG1 电转化感受态细胞EPI400感受态细胞 EPI400 电转化感受态细胞 BL21感受态细胞 BL21(DE3)感受态细胞 BL21(DE3)pLysS感受态细胞 BL21(AI)感受态细胞 BL21 Star(DE3)感受态细胞 BL21-Star(DE3)pLysS感受态细胞 BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受态细胞 Rosetta(DE3)感受态细胞Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞Rosetta-gami 2(DE3)感受态细胞 OrigamiB(DE3)感受态细胞 TB1感受态细胞 OverExpress C43(DE3)感受态细胞 Tuner(DE3)感受态细胞 ER2566感受态细胞 F-BL21(DE3)感受态细胞GV3101感受态细胞 EHA105感受态细胞 AGL1感受态细胞 LBA4404感受态细胞 EHA101感受态细胞 GV3101 电转化感受态细胞 EHA105 电转化感受态细胞 AGL1 电转化感受态细胞LBA4404 电转化感受态细胞 EHA101 电转化感受态细胞 Y1HGold感受态细胞 Y2HGold感受态细胞 AH109感受态细胞 Y187感受态细胞 EGY48感受态细胞 NMY51感受态细胞
上海淳麦生物科技有限公司专注于感受态细胞、质粒、载体、农杆菌、酵母等生命科学领域的产品研发和技术服务支持。
上海淳麦生物科技有限公司在感受态细胞的研发方面，实力雄厚，拥有了克隆、表达、酵母和农杆菌4大类，共计百余种感受态细胞。在电击感受态方面，拥有了大肠杆菌和农杆菌电击感受态种类，极大提高了客户在转基因以及文库构建方面的成功率。
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文献和实验Generation of Recombinant Adenovirus Using the Escherichia coli BJ5183 Recombination System
here uses homologous recombination machinery of Escherichia coli BJ5183 to construct plasmids used in generation of adenoviral vectors. With this method, no ligation steps are involved in generating the plasmids, and any region of the adenoviral genome
1．电转化感受态细胞的制备 1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照） 2. 37℃，220rpm，培养14-16个小时。 3. 第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。 4. 将菌液在冰上预冷30分钟，随后将菌液分装到500ml 预冷的离心
试剂准备： LB培养基: 500mL 双蒸水：600mL 高压灭菌 预冷 10%甘油：1000mL 预冷 250ml离心杯：高压灭菌 预冷 50mL离心管数个，250mL摇瓶4个，1.5mL EP管 高压灭菌 制备步骤： 1、接种原代菌（DH5α或DH10B），次日挑取单菌落，放入1mL LB培养基中，37℃，300rpm，6 hr
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