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- 百奥莱博
- WE0196-VRC
- 北京
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
785
- 英文名：
RNAtiqu FFPE RNA Extraction Kit
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
室温(15～30℃
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖北京固定组织RNA提取试剂盒品牌在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称：北京固定组织RNA提取试剂盒品牌
规格：50次
英文名：RNAtiqu FFPE RNA Extraction Kit
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
本试剂盒适用于从福尔马林固定、石蜡包埋的组织中有效纯化总RNA。适合从小于30 mg的石蜡包埋组织或切片中抽提高纯度的总RNA，本试剂盒无需使用酚/*仿抽提和异丙醇沉淀，一小时内即可完成多个样品的抽提。本品使用专门优化的裂解液和蛋白酶K，释放福尔马林固定或组织切片样本中的RNA，无需过夜操作；消化后的样品在较高的温度孵育后，去除由福尔马林交联造成的抑制作用，有效释放组织切片中的RNA，而避免危害RNA的完整性；优化的缓冲系统使裂解液中的RNA可特异结合到硅胶吸附膜上，而其他污染物可流过膜；可通过漂洗步骤有效去除，经过洗脱的RNA可直接用于RT-PCR、Real-Time PCR和印迹分析等实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 50次 |
| Buffer GTL | 15ml |
| Buffer GL | 25ml |
| 蛋白酶K | 12.5mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 1.25ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 过滤柱FM及收集管 | 50套 |
| 吸附柱RS及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
自备试剂：无水乙醇(新开封或提取RNA专用)、10mM PBS(PH7.4)(固定液中的组织)。
产品特点：
1、安全－无酚*仿等有机物抽提。
2、快速－可在一小时内完成实验。
3、高效－提取RNA得率高、纯度好。
4、可从石蜡包埋或福尔马林固定样品中提取高纯RNA。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入0.625ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
3、获得样品后，要尽快将样品在4%-10%的福尔马林中固定，固定时间以14-24小时为宜，时间过长易导致RNA断裂，影响下游实验。
4、确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制蛋白酶K 的作用。
5、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
6、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GTL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
操作步骤：
1、样本处理：
① 石蜡包埋样本：用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉，露出组织。
② 福尔马林等固定液中的样本：取约20 mg的样本，切成小块，置于离心管中，加入500μl 10mM PBS(PH7.4),涡旋振荡，12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，重复3次，可直接进行第7步操作。
2、将组织块切成5-10μM的薄片。
注意：如果样品表面已经暴露在空气中，请将接触空气的2-3片弃掉不用。
3、取约1×1cm2的切片(共约4-5片切片)置于离心管(自备)中，加入1ml二甲*，盖紧管盖，涡旋震荡10秒。
4、12000rpm离心2分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。
5、加入1ml无水乙醇，涡旋震荡混匀。12000rpm离心2分钟，弃上清，注意不要吸弃沉淀。
注意：乙醇可以除去样品中残余的二甲*。
6、打开管盖，室温或最高至37℃孵育10分钟，直至无乙醇残留。
7、加入150μl Buffer GTL，重悬沉淀；加入10μl 蛋白酶K ，涡旋震荡混匀。
8、56℃孵育15分钟，直至样品完全溶解。80℃孵育15分钟。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成RNA断裂，产生RNA碎片。
2)56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到80℃后再把样品置于80℃孵育。
9、加入320μl Buffer GL，涡旋震荡彻底混匀。
10、将步骤9中所得到的溶液全部加入到已装入收集管的过滤柱中。12000rpm离心1分钟，收集滤液。
11、在步骤10得到的滤液中，加入720μl无水乙醇，涡旋震荡彻底混匀。
注意：加入无水乙醇后，可能有少量沉淀物析出，但不影响后续操作。
12、将步骤11中所得的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
13、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
14、重复步骤13。
15、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
16、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-50μlRNase-Free Water，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-20℃保存RNA。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于20μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用20-50μl新的RNase-Free Water重复步骤16。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤16。
储存条件：室温(15～30℃)。
北京固定组织RNA提取试剂盒品牌正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：
·一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(高含量ROX校正染料)
编号：WE0150
英文名称：BaldStar TaqMan One Step RT-qPCR Kit(High ROX)
规格：100次
本试剂盒是采用探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)进行一步法Real-Time RT-qPCR的专用试剂盒。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应时，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。本产品的检测灵敏度高，荧光信号强，信噪比高，非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。其所包含的特殊缓冲系统能使逆转录酶与DNA聚合酶同时发挥最大功效，提高反应效率。使用本产品可以得到更宽广的线性范围，对目的基因定量更准确，重复性好，可信度高。
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器:(WE0148)
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器：(WE0149)
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器：(WE0150)
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。
试剂盒组成：
| 组份 | WE0148-100次 | WE0149-100次 | WE0150-100次 |
| 2×BaldStar TaqMan One Step Buffer | 1.4ml | 1.4ml | 1.4ml |
| BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix | 100μl | 100μl | 100μl |
| 50×Low ROX | - | 50μl | - |
| 50×High ROX | - | - | 50μl |
| RNase-Free Water | 1.5ml | 1.5ml | 1.5ml |
注意事项：
1、本试剂盒中试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、本试剂盒中的各试剂应尽量避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。
4、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-qPCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。
5、本试剂盒推荐使用特异性探针，建议采用专业的设计软件进行设计。
使用方法：
以下举例为常规的反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小的不同进行相应的改进和优化。(反应液的配置请在冰上进行)
1、将RNA模板、引物、2×BaldStar TaqMan One Step Buffer、BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系：
| 试剂 | 25μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×BaldStar TaqMan One Step Buffer | 12.5μl | 1× |
| Forward Primer，10μM | 0.5μl | 0.2μM |
| Reverse Primer，10μM | 0.5μl | 0.2μM |
| Probe，10μM | 0.5μl | 0.2μM |
| BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix | 1.0μl | |
| RNA Template | Xμl | 10 pg～100ng |
| 50×Low ROX or High ROX(可选) | 0.5μl | 1× |
| RNase-Free Water | up to 25μl |
注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常RNA模板的量以10 pg – 100ng为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。
3、混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、RT-PCR反应条件：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 逆转录 | 45℃ | 10 min | |
| PCR预变性 | 95℃ | 10 min | |
| 变性 | 95℃ | 15 s | 30-40个循环 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 45 s |
注意：
1)1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、5-10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
储存条件：-20℃，避免反复冻融
北京固定组织RNA提取试剂盒品牌关键词：RNAtiqu FFPE RNA Extraction Kit,WE0196,固定组织RNA提取试剂盒
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北京固定组织RNA提取试剂盒品牌关键词：RNAtiqu FFPE RNA Extraction Kit,WE0196,固定组织RNA提取试剂盒
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风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验在相同的模板、引物和反应体系下，用ABI7000荧光定量PCR仪也进行了其荧光定量产品和国际知名厂家A品牌，以及T品牌相关产品的对比实验。 实验材料 小鼠肝脏组织 实验方法 RNA提取：BioTeke RNApure高纯总RNA提取试剂盒，操作步骤请参考说明书。 目的基因：小鼠管家基因β–actin cDNA制备：测定小鼠肝脏总RNA浓度后，使用BioTeke Super RT Kit 制备20μl cDNA.操作步骤参照试剂盒说明书。 二步法荧光定量PCR： 小鼠
，第一：采用直接过柱子方法，彻底抛弃了TRIzol苯酚，氯仿原理方法，使用无毒原料，并且添加了有自主知识产权的去除多糖多酚成分解决了多糖多酚和代谢产物对于RNA的破坏和干扰分离。第二：突破了直接过柱子的方法DNA去除的技术难点，解决了DNA残留过多问题。经过实践过程中，几十种国内外试剂盒包括Qiagen的RNeasy mini kit 提取失败的例子，包括棉花苹果等试剂盒不易提取的样品，使用北京艾德莱生物的EASYspin植物RNA提取试剂盒，20分钟可以轻松提取，不需要液氮，无苯酚氯仿。高质
填补Qiagen空白的植物RNA提取试剂盒（包括多糖多酚困难样品）
的EASYspin植物RNA提取试剂盒，20分钟可以轻松提取，不需要液氮，无苯酚氯仿。高质量的RNA可以成功完成下游反应试验。第三：实践过程中我们发现，部分复杂植物或者DNA含量特别丰富的植物样品使用Qiagen的RNeasy plant mini kit 会有明显残留。尝试北京艾德莱的RN09 EASYspin植物RNA快速提取试剂盒也一样有明显残留。对此问题Qiagen并没有提供优秀的解决方案。Qiagen只是建议使用传统的DNA酶消化的方法来解决，但是众所周知DNA酶消化的方法非常繁琐，费时间，消化
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