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- 北京
- 2025年07月16日
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572
- 英文名：
Cell Lysate RT-PCR Mix
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
低温运输，-20℃
特别提示：包括免RNA提取RT-PCR试剂盒(细胞组织裂解物RT-PCR试剂盒)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：免RNA提取RT-PCR试剂盒(细胞组织裂解物RT-PCR试剂盒)
英文名称：Cell Lysate RT-PCR Mix
产品规格：100次
本产品是一种免RNA提取的RT-PCR的试剂盒，它使用精心优化的细胞裂解液直接裂解培养细胞和痕量组织块，然后直接在细胞裂解液中进行RT，再用cDNA进行PCR或荧光定量PCR。
产品特点：
1. 免RNA提取，从细胞裂解到得到RT-PCR或real-time RT-PCR结果只需3个步骤约3小时，省略了整个RNA提取过程。
2. 灵敏度不低于常规方法(先提总RNA再进行RT-PCR)，不但可以检测到低拷贝的RNA，还可用于检测miRNA。
3. 整合了去除基因组DNA的步骤，只检测RNA，无需担心基因组DNA的污染。
4. 每次只需要10-10000个培养细胞或含相应细胞数的痕量组织(如LCM样品)，验证过的细胞包括Hela、CHO、293、COS-7等，但不能用于U937细胞系。
5. 两步法RT-PCR，后续使用灵活。得到的cDNA既可用于普通PCR，也可用于基于SYBR的荧光定量PCR，也可用于其他定量PCR(如TaqMan)，非常灵活。
6. 有单管操作和多孔板操作两种模式，前者适用于少量样品，后者适用于平行处理大量样品，适用于高通量筛查。
7. 本产品足够100次50μL体系的RT反应和600次30μL体系的PCR反应。
试剂盒组成：
| 成份 | 规格 |
| 细胞裂解液成分一 | 3.8mL |
| 细胞裂解液成分二 | 300μL |
| 细胞裂解液成分三 | 100μL |
| Oligo(dT),0.5ug/uL | 50μL |
| 随机引物,0.2ug/uL | 50μL |
| MMLV逆转录酶(含RI) | 300μL |
| PCR MagicMix3.0 | 9mL |
| RNase-free 水 | 10mL |
| 使用手册 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
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文献和实验获取目的蛋白的思路是行不通的，因为获取的DNA里面会含有非编码区。要表达真核生物的基因并表达出相应的蛋白，只能通过提取其mRNA并RT-PCR这条颇费周折的途径 1．RNA的提取 RNA的提取其实原理很简单：通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。
RNA提取和RT-PCR 在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时，会用到RNA提取和RT-PCR技术。 真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢？因为真核生物的基因含有大量的非编码区，称为内元（intron），真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的，这些编码区叫做外元（exon）。真核生物的DNA转录成为RNA之后，经过剪切和拼接，去掉这些非编码区，才形成成熟的mRNA，由mRNA再翻译
做RT也做了几次,有成功也有失败,在园子中受益良多,把我自已的一个流程放上来,供大家参考.细胞RT-PCR操作流程实验流程一 、取RNA：1、 处理细胞：（1） 贴壁细胞：先用无菌DEPC水配制的PBS洗细胞两次，弃尽PBS后，直接向培养瓶中加入1ml Trizol，通过溶解细胞，通过移液管分次移出细胞裂解物。当Trizol量不足，可导致RNA中有DNA污染。（2） 悬浮细胞：先用无菌DEPC水配制的PBS洗细胞，通过离心沉淀细胞，在Trizol中移液管反复吹打来裂解细胞，每107细胞
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