北京现货TA快速连接试剂盒(pUC-T Simple)(含载

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名称：北京现货TA快速连接试剂盒(pUC-T Simple)(含载体，连接酶)折扣价
产地：国产|进口
编号：WE0247
品牌：百奥莱博
英文名：pUC-T Simple TA Cloning Kit
规格：20次
  pUC-T Simple载体是一种高效克隆PCR产物的专用载体，它是由pUC18载体在EcoR V酶切位点处切开，在两侧的3＇端添加T而成。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR产物的3＇端添加一个A，可以与pUC-T 3＇端的T互补连接，同时它消除了pUC18载体上的多克隆酶切位点，克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时，酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响，可以大大提高酶切效率，增加亚克隆成功率。
  试剂盒中配备高效率的T4 DNA Ligase和为快速高效DNA连接优化的2×Quick Ligation Reaction Buffer。连接效率相当于用T4 DNA Ligase 进行常规连接1小时。带有插入片段的重组子可根据α互补原理，进行蓝白斑筛选，判断载体中有无外源基因的插入。克隆后可以用BcaBEST Sequencing Primers和 M13通用引物对PCR产物进行测序。

试剂盒组成：

 

组份	20次
pUC-T Simple(50 n g/μl)	20μl
Control Insert(50ng/μl)	10μl
Quick T4 DNA Ligase	20μl
2×Quick Ligation Reaction Buffer	120μl

注意事项：

1、Insert DNA 要求
1)连接使用的PCR片段3’末端应带有“A”尾。有些高保真DNA聚合酶，如我公司的Pfu扩增的PCR产物是平滑末端，可使用加A试剂盒加上A尾后，再进行T载体克隆。
2)PCR产物建议进行切胶回收纯化后再进行T载体克隆，以免PCR产物中的非特异片段或残存引物等杂质影响。推荐使用WE0168快速琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒。

2、连接反应要求
1)本试剂盒能使大多数连接反应在25℃条件下5分钟甚至更短时间内达到反应终点，增加反应时间反应效率不会增强。如用快速连接反应1小时后，转化效率会明显降低；如25℃快速连接反应过夜，则转化效率会下降到75%。
2)2×Quick Ligation Reaction Buffer含有ATP，使用前置于冰上使其融化后充分混匀，建议初次使用分装成小管冻存，避免其反复冻融影响DNA连接效率。
3)由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深，以免粘在枪头上造成损失。
4)如快速连接产物用于电转，因快速连接反应体系中的PEG会影响电转效率，建议使用离心柱将连接产物进行DNA纯化(如WE0170快速DNA产物纯化试剂盒)后再进行电转。

3、感受态细胞要求
建议使用高效的热击转化感受态细胞，这样才可能得到比较理想的阳性克隆，如需进行蓝白筛选，宿主细胞必须具有正确的基因型(F´编码的【lacZ ΔM15】)产生ω片段，才能与载体DNA产生的LacZ α 多肽结合，表现出β-半乳糖苷酶活性(α互补)。pUC-T Simple载体以pUC18载体为基础构建而成，因此，适合pUC18载体的感受态细胞都可以使用。推荐使用本公司WE0251 TOP10感受态细胞、WE0252 DH5α感受态细胞。

4、阳性克隆筛选
阳性DNA片段成功插入至pUC-T Simple Vector中后，一般情况下β-半乳糖苷酶的表达将受到破坏，重组克隆体在含有X-Gal、IPTG、Amp的LB固体培养基上培养时将显示白色菌落。但有时比较短的DNA片段插入载体时，基因的读码框有可能正好与LacZ的读码框相吻合，克隆体也会显示蓝色菌落。

5、阳性对照
为了确认实验操作的正确性，以及实验试剂的有效性，我们建议使用本试剂盒中配备的Control Insert(750 bp)进行阳性对照实验。

使用方法：

1、按以下体系配制反应液：

成分	反应体系	对照体系
pUC-T Simple(50ng/μl)	1μl	1μl
DNA 插入片段 *	0.1 -0.3 pmol	--
Control Insert DNA	--	1μl
2×Quick Ligation Reaction Buffer	5μl	5μl
Quick T4 DNA Ligase	1μl	1μl
RNase-Free Water	补足至10μl	补足至10μl

Insert DNA的使用量：在进行克隆时，Vector DNA和 Insert DNA的摩尔比一般为：1:2-1:10，可根据实验情况选择适当的Vector DNA和 Insert DNA的摩尔数比。Insert DNA的使用量=nmol数×660×Insert DNA bp数。本载体1μl(50ng)的摩尔数约为0.03 pmol。

2、轻轻混合，短暂离心。25℃反应5分钟。
注意：反应时间不要超过15分钟，否则会降低连接效率。
3、反应结束后，将DNA连接产物存放于0-4℃，而后进行转化实验；也可将DNA连接产物置于-20℃保存。
注意：勿进行加热失活反应。
4、将连接产物加入50μl感受态细胞中(将感受态细胞置于冰上融化)，冰浴30分钟。
注意：用化学法转化时，连接产物的加入量不要超过感受态细胞体积的10%。
5、42℃热击45秒钟，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
6、加入450μl无菌SOC或LB培养基，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟，使菌体复苏。
7、根据实验要求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有X-Gal、IPTG和Amp的LB固体培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃，直至液体被吸收后，倒置培养，37℃培养12-16小时。
8、计算白、蓝色菌落，挑选白色菌落，使用PCR法或酶切法鉴定插入片段是否正确。




储存条件：-20℃。

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·无毒RNA酶清除剂
编号：WE0222
英文名称：RNase Removal
规格：100ml
  本产品是一种高效的RNase灭活清洁剂。它含有多种成分，能高效灭活玻璃、塑料表面的 RNase污染，保障工作环境的清洁。本产品效力和速度远远高于常用的DEPC，可在5分钟内将固体表面的多达100μg的RNase彻底灭活。经RNase清除剂清洗过的容器、实验台面、枪头、电泳槽等，可确保不含RNase污染。

产品特点
1、无毒的RNase灭活剂；
2、可代替DEPC，去除固体表面的RNase。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、使用前请检查本产品是否出现沉淀，如有沉淀，请将溶液置于 37℃水浴重新溶解。
2、RNase 清除剂可直接使用，请勿稀释，稀释后会降低灭活效力。
3、操作人员在使用RNase 清除剂过程中要戴手套，避免皮肤直接接触。使用喷洒瓶时请戴口罩并在通风橱等通风环境下 进行，以防对人产生刺激。
4、请勿将RNase 清除剂用在易腐蚀的金属表面。

使用方法：

一、用RNase清除剂处理工作平台
直接将RNase清除剂喷于台面，普通吸水纸擦净，用水冲洗干净后用吸水纸擦净，晾干。

二、用RNase清除剂处理实验仪器
用浸有RNase清除剂吸水纸擦拭仪器表面，用水冲洗干净后用吸水纸擦干。 一些小的仪器部分可直接浸泡在RNase清除剂溶液中，用水冲洗干净后用吸水纸擦干。

三、用RNase清除剂处理玻璃和塑料器皿
将器皿浸泡在RNase清除剂溶液中或将RNase清除剂溶液喷洒在器皿表面，再用蒸馏水冲洗两次，倒立晾干后备用。如处理离心管可直接将RNase清除剂溶液加入离心管中，进行涡旋震荡，离心后去除RNase清除剂溶液，蒸馏水 冲洗两次，晾干后备用。

四、用RNase清除剂处理移液枪
根据生产厂家的使用手册卸下移液枪的前端， 留下接口塞和圈套后将其浸泡在RNase清除剂中，再用水冲洗干净， 晾干，将移液枪按使用手册组装好。

储存条件：室温(15～30℃)


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