大肠杆菌SURE化学感受态细胞北京厂家

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名称：大肠杆菌SURE化学感受态细胞北京厂家
编号：BTN90208
规格：0.1mL*10
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：E.coli SURE Chemical Competent Cell
本产品是采用大肠杆菌SURE菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。该菌株主要是用来克隆不稳定DNA结构如重复序列、二级结构(如Z-DNA)等。

菌株基因型：

 

基因型	表现型
endA1	核酸内切酶I缺失
gyr A96	具有*啶酮酸抗性
lac	不能利用乳糖
rec B & rec J	DNA重组修复功能缺失
relA1	允许在无蛋白质合成时有RNA合成
sbcC	允许基本重组
supE44	抑制琥珀突变，为某些噬菌体必需
thi-1	需要硫*才能生长
umuC::Tn5	卡那霉素抗性
uvr C	不能切除变异碱基
mcrA△(mcr CB-hsdSMR-mrr)171	DNA甲基化系统缺失
F’[ lacIlac Z△M15 Tn10 proAB+]	提供α-互补所需的ω片断，具有四环素抗性

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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