BTN90801A型一站式TA克隆试剂盒特价促销

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应BTN90801A型一站式TA克隆试剂盒特价促销，产品信息：

类别：克隆与表达

英文名：One-Stop TA Cloning Kit(A)

产品名	产品编号	包装规格
一站式TA克隆试剂盒	BTN90801A	20次

品牌：百奥莱博

编号：BTN90801A

产地：国产|进口

英文名：One-Stop TA Cloning Kit(A)

规格：20次

TA克隆就是利用T载体两个3´端各带有一个T突出，而PCR扩增产物两个3´端各带有一个A突出的特点，在DNA连接酶的作用下，将PCR产物克隆到T载体中的过程，它是克隆PCR扩增产物的主要手段。

 

产品特点：

1.一站式，用户只需要准备PCR产物即可进行TA克隆。

2. T载体由Xcm I酶切方法制备，两个5´端100%含T突出，自连率几乎为零。

3. 克隆效率高，一次TA克隆实验一般能得到上百个重组子。

4. 阳性率高，一般能到90%以上，大大缩短了筛选工作。

5. 提供供两次实验用的对照插入片段，方便分析实验数据。

6. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如EcoR I)，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。

7. 克隆位点两侧分别有T3和T7 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。

8.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。

9. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。

10.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

 

 

成分	规格
即用型蓝白T载体(50ng/μL)	20μl
对照插入片段(50ng/μL)	5μl
T4快速连接缓冲液，2×	100μl
T4 DNA连接酶(5U/μL)	30μl
超纯水	1ml
高效感受态细胞	100μL×10只(只B型有)
说明书	1份

 

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。感受态细胞需要干冰运输，-70℃保存，有效期6个月。

 

自备试剂：插入片段。

 

使用方法：

 

一：PCR产物的纯化和定量注意事项

1. 由于PCR体系中有大量会抑制DNA连接反应的dATP、还有一些可能在电泳胶上不一定会显示出来的非特异性扩增产物和引物二聚体，所以PCR产物必须用胶回收方法制备才能用于本试剂盒的连接。可以分别使用本公司柱式DNArc(BTN60202)和PAGE DNArc(包括柱式PAGE DNArc)从琼脂糖胶和PAGE胶上纯化回收PCR片段。具体操作见相关产品使用手册。

2. 琼脂糖胶回收的电泳缓冲液最好不要使用TBE缓冲液，因为它会影响DNA的胶回收效率。

3. 为避免UV对DNA的伤害，切胶最好在日光下进行(使用百奥莱博的绿如蓝染料的话，可以直接在黑色背景下看见DNA条带，不需要紫外光)。如果使用EB或其他染料，必须在紫外下切胶时，最好选择长波(360nm)紫外灯并以最快速度切胶，文献报道短波UV(300nm和240nm)会使DNA连接效率降低400多倍。使用短波UV时，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)减少伤害。

4. PCR片段的体积越小越便于后续操作。洗脱PCR片段时，用最少量的洗脱液洗脱。

 本试剂盒要求PCR回收片段的浓度最好为50ng/μL。如果浓度不够，最好用醇沉淀法沉淀后直接在管内设置连接反应，也可以使用本公司的核酸浓缩剂(BTN110801)直接浓缩。

5. 为准确定量回收的PCR产物同时又节约样品，最好使用微量分光光度计(只需用1μL样品测量)。如果分光光度计需要大量样品，建议使用电泳法定量：将回收的PCR片段与浓度已知的DNA Marker在含EB或绿如蓝染料的琼脂糖凝胶中电泳，通过比较DNA条带的相对荧光强度而估测PCR产物的浓度。

 

二：连接反应

1. 短暂离心装有蓝白T载体、连接缓冲液和T4连接酶的离心管。

2.在三个离心管中加入下列成分(注意，对照可以不做，在出现问题时再做)：

 

成份	样品管	阳性对照管	自连对照管
T4快速连接缓冲液，2×	5μl	5μl	5μl
蓝白T载体(50 ng/μL)(=0.03 pmol/μL)	1μl	1μl	1μl
自备PCR 纯化产物(0.03-0.1 pmol/μL)	Xμl(见注)	不加	不加
对照插入片段(50ng/μL)(=0.06 pmol/μL)	不加	1.5μl	不加
T4 DNA连接酶(5U/μL)	1-1.5μL	1-1.5μL	1-1.5μL
超纯水	补到10μL	补到10μL	补到10μL

注: 如何根据T载体的用量计算PCR纯化片段的最佳用量？

第一：确定插入片段与载体的最佳摩尔比，在本产品的T载体的长度固定(3Kb)时，最佳摩尔比跟插入片段的长度关系如下：

 

插入片段长度	与载体的摩尔比
1Kb以下	2:1或3:1
跟T载体接近(±1Kb)	1:1
比T载体长1Kb或更多	1:2或1:3

第二：根据选定的最佳摩尔比按下面方程式计算用量：

本产品提供的T载体长度为3 Kb，推荐用量为50ng，如果PCR片段长度为0.5 Kb，最佳摩尔比设定为3:1，则其用量为:

3. 用移液器吹打连接反应液使之混匀，然后放置在16℃孵育30分钟-过夜。

4. 65℃5分钟灭活连接酶后直接用于转化或-20℃保存。

 

三：细菌转化及筛选(仅供参考，本产品不提供相关试剂)

1. 将100μl转化效率在1×108 cfu/μg以上的感受态细胞于冰上解冻。

2. 取5-10μl连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。

3.在冰上放置30分钟。

4. 将离心管放42℃热休克90秒，然后快速将其转移到冰浴中放置1～2分钟。

5. 每管中加900μl LB培养基，37℃振荡培养1小时复苏细胞。

6. 将100μL复苏涂布到含Amp的LB琼脂平板上(也可加上X-gal和IPTG)。

7.室温4,000rpm离心剩余的900μl复苏细胞5分钟，弃去800μl上清，用剩余100μL培养基重悬细胞并涂布到含Amp的LB琼脂平板上(可加X-gal、IPTG)。

8. 将平板置于室温直至液体被吸收。此步非常重要，否则培养板将在37℃排除水分，细菌将随水在培养基上到处游动，不能形成单个菌落。

9. 倒置平皿，于37℃培养，12～16小时后可出现菌落。一般情况下阳性对照组总共会有上千个菌落(100μl转化液产生的菌落数×10)，自联对照只有少数几个菌落，样品组的菌落数取决于PCR回收片段的质量。

10. 按常规方法筛选重组子。

 

MCS位点：

BTN90801A型一站式TA克隆试剂盒特价促销专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：一站式TA克隆试剂盒,BTN90801A,One-Stop TA Cloning Kit(A)

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编号	类别	名称
BTN100912A	蛋白质研究	长效期SDS-PAGE电泳液(＞30 KD)(干粉)
BTN120501	DNA纯化	柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(测序级)
BTN100865	其他生化试剂	20% PVP K30溶液(DNA级)
BTN130896	其他培养基	YPG液体培养基
BTN130952	DNA纯化	M13噬菌体单链基因组DNA提取试剂盒
BTN80910	克隆与表达	X-gal溶液
BTN91204	蛋白质研究	动植物膜蛋白微量制备试剂盒
BTN130829	RNA纯化	细胞蛋白质-RNA共提试剂盒
BTN161205	克隆与表达	农杆菌EHA101感受态细胞
BTN100405	其他生化试剂	20×SSC溶液
BTN120411	工具酶	T4 DNA聚合酶
BTN60408	其他生化试剂	通用洗柱液
BTN100830	蛋白质研究	低pH缓冲液套装
BTN61201	核酸电泳和回收	电泳级耐热型SYBR染料
BTN131108	蛋白质研究	ONPG干粉
BTN70303	核酸电泳和回收	绿如蓝核酸染料(UV)
BTN80933	其他生化试剂	Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH9.0)(不含RNase)
BTN100211	核酸电泳和回收	50×TAE电泳液
BTN100805B	RNA纯化	Tris饱和酚-*仿-异戊醇混合液(DNA提取用)
BTN131109	蛋白质研究	Tris缓冲盐溶液(TBS)
BTN101204	其他生化试剂	1M Tris-HCl(pH7.0)(DNA级)
BTN130889	蛋白质研究	昆虫细胞裂解液
BTN131021	蛋白质研究	链霉亲和素
BTN91103	RNA纯化	非冻型拭子病毒保存液
BTN140653	蛋白质研究	50mL亲和层析柱

 

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