北京现货柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(测序级)批发

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(测序级)批发，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(测序级)批发
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：Animal mitochondrial DNA column extraction kit(Sequencing Grade)
规格：15次
本试剂盒就是基于先纯化动物细胞线粒体、再从中柱式法纯化其DNA的两步法试剂盒。

试剂盒特点：
1. 即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2. 两步法，先纯化线粒体，再柱式法纯化其中的DNA，有粗提(mtDNA纯化前不用DNase处理线粒体)和精提(mtDNA纯化前用DNase处理线粒体)两套操作方案，适合于各种要求不同的后续实验。
3. 本产品一次可以处理约107×108个培养细胞，10mg培养细胞(相当于5瓶150 mm培养细胞)可以纯化到到0.2-0.5mg线粒体。
4. 本产品适用于各种动物悬浮培养细胞和贴壁培养细胞，不建议用于动物实体组织。
5. 提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。

试剂盒组成：

 

成分	规格	备注
溶液A	225ml	配制匀浆液
蔗糖	25.4g	配制匀浆液
詹纳斯染色液	1ml	染色线粒体
溶液B	0.5ml	配制核酸酶反应液
DNase A干粉	1mg	酶切细胞核DNA
Benzonase(1U/μL)	100μl	酶切细胞核DNA
溶液C	10ml	纯化mtDNA
溶液D	5ml	纯化mtDNA
溶液E	20ml	纯化mtDNA
离心吸附柱	15套	纯化mtDNA
通用洗柱液	15ml	纯化mtDNA
DNA洗脱液	10ml	纯化mtDNA
人TPMT VNTR	上游引物	GCT CCG CCC TGC CCA TTT
	下游引物	GCC TCC GCC ACC AAT GAC
人线粒体HV2区	上游引物	GGT CTA TCA CCC TAT TAA CCA C
	下游引物	CTG TTA AAA GTG CAT ACC GCC A
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或冷室进行，所要用到的溶液和离心管都必须预先冷却，否则线粒体容易破裂。

一：线粒体粗提
1. 称25.4g蔗糖到225mL溶液A中，盖上盖子后充分摇晃3～5分钟溶解即得250mL溶液A工作液，放冰上预冷待用。未用完的溶液A工作液需要-20℃保存，否则会长菌。
2. 如果是单层细胞，先用20mL PBS缓冲液洗涤107×108个培养的单层细胞，共洗涤2次。然后用塑料刮匙刮下细胞，重悬在20mL PBS缓冲液中。如果是悬浮细胞，则1000g 4℃离心10分钟收集107×108个细胞，再用20mL PBS缓冲液洗涤2次，最后将细胞重悬在20mL PBS缓冲液中。
3. 用平甩转子(swinging-bucket rotor)离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留细胞沉淀。
4. 加入5倍体积(以细胞沉淀的体积为基数)的溶液A工作液，轻柔重悬细胞。
5. 如果是成纤维细胞，由于其难于裂解，可将细胞重悬液在-80℃放置20-30分钟后再化冻，然后进入下步操作。如果不是，则直接进入下步操作。
6. 将细胞重悬液体转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中(工作体积为10-15mL，间隙为0.12 mm，最好是玻璃材质，否则线粒体产率会降低)匀浆适当次数。细胞株不同，其最适匀浆次数不同，一般需要40次-60次左右。匀浆是线粒体纯化最关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定最适匀浆次数，方法是每匀浆5-10次后，取2-3μl匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到20-50%以下为佳。
7. 用平甩转子离心机4℃ 1000 g离心10分钟。沉淀含残留完整细胞、细胞碎片和细胞核，上清液含线粒体。
8.转移上清液到离心管中，冰上放置待用。如有必要，可在显微镜下检测上清液中线粒体的完整性。具体做法是先滴一滴上清液到载玻片上，再滴入50μl詹纳斯染液染色20分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。
9. 用固定角度转子(fixed-angle rotor)离心机4℃ 10000 g离心10分钟，弃上清，所得棕黑色沉淀即为粗提线粒体沉淀。
10. 用5mL溶液A工作液洗涤2次得线粒体粗提液(即重悬后，4℃ 10000 g离心10分钟，弃上清)。
11. 如果后续实验是提取mtDNA用于PCR或Southern杂交，则直接进入第3部分mtDNA提取，也可以放-80℃长期保存待用。
12. 如果后续实验是提取mtDNA用于高通量测序，则必须彻底降解掉其中的细胞核DNA污染。匀浆过程中一个破裂的细胞核释放出的DNA相当于上百万个线粒体的DNA量之合，所以无论如何小心，粗提线粒体中必有大量的细胞核DNA污染，如果不将其清除，高通量测得的序列将绝大部分来于核DNA而非mtDNA。

二：线粒体粗提液中细胞核DNA的去除及鉴定
13. 将线粒体重悬于0.3mL溶液A工作液中，取10μl作为未处理对照。
14. 加入6μl Benzonase(1U/μL)溶液和30μl DNase A溶液(配法：将0.5mL溶液B加到装有1mg DNase A干粉的离心管中得到2mg/mL溶液，未用完的部分需要分装后放-20℃保存)。
15. 37℃保温一段时间酶切细胞核DNA。注意：最好先预实验，每隔一段时间取10μl样品，灭活其中的DNase后作为模板用PCR扩增1-4个自选的VNTR位点和1-2个mtDNA基因(如vis或COII基因)，检测不到VNTR基因而能检测到mtDNA基因的处理时间为最佳。可从本公司另购细胞核基因和线粒体基因专一性引物。
16. 加入10μl自备的0.5M EDTA溶液(pH8.0)以终止酶反应。显微镜下检查线粒体完整性(见上节第8步)。
17. 用固定角度转子离心机4℃10000 g离心10分钟，弃上清。
18. 用1mL的溶液A工作液洗涤沉淀(即重悬后，4℃ 10000 g离心10分钟，弃上清。此为一次洗涤。)2次得到线粒体沉淀。

三：线粒体DNA提取
19.在不超过100μl的线粒体沉淀中加入600μl预热的溶液C到沉淀中，充分吹打均匀。
20. 再加入150μl(可称150-160mg)预热的溶液D到离心管中，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。
21. 65℃放置3～5分钟。
22. 加入200μl自备*仿，震荡混匀10-30秒，此时溶液将呈乳白色。
23. 12000～15000g室温离心2分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5mL塑料离心管中，避免触及中间的白膜。
24. 加入1.5倍体积的溶液E，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少2分钟。
25. 12000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液。
26. 通用洗柱液洗涤2次(将0.5mL加入离心柱中，12000rpm室温离心1分钟，弃穿透液，此为洗涤一次，再重复一次)。
27. 空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的1.5mL离心管中。
28. 加30-50μl DNA 洗脱液，室温放置3～5分钟。
29. 12000rpm室温离心1分钟即得纯化的mtDNA溶液。

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·SDS-PAGE预制胶
编号：BTN100915
英文名称：Instant SDS-PAGE Gel
规格：10块
本产品是一种高性能低成本聚丙*(代"烯")酰胺预制凝胶，广泛应用于遗传学，分子生物学，细胞生物学，微生物学，植物学等各个学科领域中蛋白质的分离及分子量的测定。本产品是将凝胶事先配制好，制成预制胶，使用者可直接上样进行电泳。

产品特点：
1．分辨率高，条带清晰，电泳效果极佳；
2．保存期长，常温12个月；
3．胶夹打开极为轻松，无需起撬工具；
4．专利loading guide，加样方便；
5．兼容目前市场各种电泳槽，如BIORAD(11/3/Tetra System)，天能和君意东方等；
6．可用于SDS变性及非变性电泳；
7．8%，12%及6%-18%梯度等多种不同浓度供选择；
8．电泳时间短，在200V电压下，电泳30分钟即可完成。

使用效果：


产品组成：

成分	规格
预制胶	10块
电泳缓冲液粉末	1包
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

自备试剂：SDS-PAGE上样液。

使用方法：
1．在操作前请将产品配套的电泳缓冲液粉末溶解至3L待用。
2．撕开包装取出胶，将预制胶固定在电泳槽(Bio-Rad Mini-PROTEAN(11/3/Tetra System)或Hoefer Mighty Small(SE 250/ SE 260/ SE 280))中，加入电泳缓冲液没过梳齿部位，推荐的缓冲液使用量为300mL。
3．双手按住梳子左右部位将其平稳缓慢拔出，上样后电泳。使用150v -200v电压，30-40分钟，电泳过程中无需变换电压。
4．电泳结束后，取出胶板。由于本预制胶特殊设计，胶夹很容易打开。使用镊子或者梳子即可轻轻撬开。


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BTN130605 即用型多重PCR试剂盒 Multiplex PCR Marster Mix
BTN130506 海藻糖溶液,1.5M,PCR级 Trehalose Solution,PCR Grade
HC0167 (方孔)冻存盒
2′-脱氧胸苷 G-6-P-Na2 50-89-5
ARB11498 人脂质运载蛋白2(LCN2)定量分析 Human lipocalin 2,lcn2 ELISA KIT
CYB168009 马血清 500ml/瓶
ARB14081 犬降*素原(PCT)尿液中含量检测 
ARB11197 人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA检测服务 Human tissue-type plasiminogen actilyse,t-pa ELISA KIT
PY02-360  梭菌增菌培养基  250克  
BL0264 (原装)DifcoTM Skim Milk 脱脂奶粉
50-89-5 Thymidine  胸腺嘧啶核苷
HRP化学发光增强底物 
全反式维A酸 Diphenylcartazide 302-79-4
邻*二甲*(代"酸")二(2-甲氧基)乙酯 5-Fluorocytosine 117-82-8
ARB13068 小鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)酶联免疫定量检测 Mouse pulmonary surfatcant-associated protein a,sp-a ELISA KIT
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604-44-4 4-*-1-*酚(4ClN) 4-Chloro-1 Naphthol
ARB11999 大鼠P选择素(Ps)血清中含量检测 Rat P-Selectin,ps ELISA KIT
SSPE缓冲液(20×,pH7.4)   500ml
D-阿拉伯糖醇 Fmoc-Cys(tBu)-OH 488-82-4
ARB10022 人5核苷酸酶(5-NT)酶免分析 Human 5-nucleotidase,5-nt ELISA KIT
PY02-016  霉菌培养基  250克  
酸性偶氮红 EDAC?HC1 3734-67-6
BTN131157 藻红蛋白标记山羊抗兔IgG Goat Anti-Rabbit IgG ,PE Conjugate
ARB12180 大鼠白细胞介素16(IL-16)含量检测 Rat interleukin16,IL-16 ELISA KIT
F030308 胶体金标记兔抗人血清白蛋白抗体 Rabbit Anti-HSA*GOLD
碳酸**溶液  3.7%|5.6%|7.4%|7.5% 100ml
A8016-19 大鼠血清Rat Serum
9048-46-8 Albumin BovineⅤ  牛血清白蛋白Ⅴ(不含脂肪酸)
ARB10318 人中性粒细胞趋化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA代测服务 Human neutrophil activating protein-2,nap-2 ELISA KIT
BTN130632 T7核酸外切酶 T7 Exonulease
ARB13915 猪肝细胞生长因子(HGF)Elisa方法检测 Porcine hepatocyte growth factor,hgf ELISA KIT
PY02-377  菌种芽孢培养基  250克  
ARB13524 兔6酮前列腺素F1A(6-keto-PGF1A)代做ELISA实验 Rabbit 6-keto-prostaglandin f1a,6-k-pgf1a ELISA KIT
DEAE葡聚糖凝胶A-50 VC
ARB13774 豚鼠(NPC1L1)免费代测 
黏液卡红染色液   3×50ml|3×100ml

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