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- 详细信息
- 文献和实验
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- 库存:
869
- 英文名:
Plasmid DNA column extraction kit
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应柱式质粒DNA提取试剂盒现货促销,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:柱式质粒DNA提取试剂盒现货促销
规格:50次
产地:国产|进口
编号:BTN60205
英文名:Plasmid DNA column extraction kit
本试剂盒是用于质粒DNA小量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处理,再通过离心吸附柱,专一结合DNA,最后洗去杂质,高效快速提取质粒DNA,全*(代"套")操作可以在30分钟之内完成。使用本试剂盒可从1-5mL过夜培养的菌液纯化得到高达20μg的高纯度质粒DNA(OD260/OD280 = 1.8-2.0),可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。
试剂盒特点:
1.快速、步骤少,整个操作在半个小时之内完成。
2. 不需要预平衡离心吸附柱。
3. 洗柱液即开即用,不需要额外加乙醇。
4. 纯度高,采用本试剂盒提取的质粒OD 比值在1.8-2.0 之间。
5.产量高,每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5μg/mL。
6. 用途广,适用于低拷贝和高拷贝质粒。
7. 价格低,比多数国内同类产品的价格更便宜。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 13ml |
| 溶液B | 13ml |
| 溶液C | 18ml |
| RNase A溶液(10mg/mL) | 0.15ml |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml |
| 离心吸附柱,6层 | 50只 |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,RNase A 需要-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. 先将全部RNase A溶液全部加入到溶液A中,摇匀后再取用,未用完的溶液A最好在4℃保存。
2.从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中,37℃震荡培养12-16小时(摇床转速200-300)。注意:建议使用LB培养基,营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高,超过纯化系统处理能力而降低DNA 质量。另外,延长培养时间有利于提高质粒DNA浓度,但是菌液培养过长时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA浓度降低。
3. 用1.5mL离心管收集1-4mL 过夜培养饱和菌液,室温12000rpm离心1分钟,弃上清,再短暂离心,吸弃残留液体。
4. 加入250μL溶液A,用枪头充分吹打使菌体重悬(此步在冰上操作效果更佳)。
注意:细胞未充分悬浮会影响后续操作,可以使用漩涡振荡器帮助混匀或使用Tip 吸头吹打沉淀至完全混匀。
5. 加入250μL溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀4-6次,看到溶液变粘即可,然后冰上放置不超过4-5分钟。注意:此步处理不能超过5分钟,否则DNA的碱损伤比较严重。同时千万不要剧烈振荡,否则基因组DNA 断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。溶液B用后需要将盖拧紧存放,否则空气中的二氧化碳会进入溶液,形成碳酸,中和溶液B中的NaOH,降低其效率)。
6. 加入350μL 冰上预冷的溶液C,反复颠倒混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后冰上放置至少5分钟。
7. 最高转速(12000rpm以上)4℃离心5分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。如果此步的离心在室温进行,更容易出现沉淀物漂浮的现象。
8. 静置2分钟以让质粒DNA与吸附柱充分结合,此步十分重要。
9.室温12000rpm离心1分钟,弃收集管中的废液。
10. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000rpm离心1分钟,弃收集管中废液。
注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。
11. 重复上步1次。
12.室温12000rpm离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
13. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管(自备)中,加入30-100μL65-80℃预热的DNA 洗脱液2.0,室温放置2分钟。常温的DNA 洗脱液2.0也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。
14.室温12000rpm离心1分钟,离心管底溶液即质粒DNA。
15. 由于百奥莱博的吸附柱结合DNA 能力较强,如果再加适量DNA 洗脱液2.0 到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多质粒DNA(相当于第一次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。
我公司的柱式质粒DNA提取试剂盒现货促销,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
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·RNase A溶液(2mg/mL)
编号:BTN60309
英文名称:RNase A Solution(2mg/mL)
规格:1.5mL
本产品是浓度为2mg/mL的RNase A溶液,不含DNase和蛋白酶活性,可以用于DNA提取(包括质粒DNA提取)时和蛋白质纯化时去除RNA污染。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
·微量蛋白沉淀试剂盒
编号:BTN81217
英文名称:Mini Protein Precipitation Kit
规格:50次
本产品用于微量沉淀浓缩蛋白质样品,其原理是通过酸使蛋白质变性,溶解度降低,在离心条件下沉淀,而达到蛋白变性、蛋白浓缩、蛋白去盐的目的。他们还有一个重要的用途是去除污染的盐离子和其他小分子。
产品特点:
1. 操作方便迅速,只需要混匀后离心,不需要其他仪器。
2.产品稳定,可室温长期放置。
3.可以处理各种液体样品(如细胞或细菌培养物,细胞裂解物,蛋白质提取物等等)。
4.浓缩效果强,可浓缩浓度低达1μg/mL的蛋白。
5.可用于含SDS的样品,但灵敏度稍低(5μg/mL)。
6. 得到的蛋白质可用于后续的SDS-PAGE、免疫沉淀和质谱分析等实验。但蛋白已经变性,没有活性。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 0.5ml |
| 溶液B | 1ml |
| 溶液C | 50ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法一:用于不含SDS的样品,但样品蛋白浓度不能低于1μg/mL
1、将100μL需要沉淀浓缩的蛋白样品转移到一个自备的1.5mL塑料离心管中。
2、加入10μL溶液A,涡旋激烈震荡10-30秒混匀。
3、冰上放置15分钟。
4、加入10μL溶液B,轻轻混匀。
5、冰上放置60分钟。
6、4℃12000~15000×g离心10分钟。
7、小心移弃上清液,保留蛋白沉淀。
8、加入1mL 冰浴的溶液C,震荡混匀后4℃12000~15000×g离心15分钟。
9、小心移弃上清液,保留蛋白沉淀。
10、短暂离心,小心移弃残留上清液后,将有蛋白沉淀的离心管敞开放置在冰上,空气晾干。一般需要10分钟左右。
11、样品放4℃保存或立即电泳检测。可直接用1×SDS-PAGE上样液或其他电泳缓冲液溶解蛋白沉淀,取适量上样。如果蓝色的*酚蓝染料变黄,则说明有残留酸性物质TCA污染,必须加少量自备的1M Tris-HCl(pH8.8)缓冲液,直到颜色变成蓝色为止,否则将影响电泳结果。
使用方法二:用于含SDS的样品,但样品蛋白浓度不能低于5μg/mL
1、将200μL需要沉淀浓缩的蛋白样品(浓度不低于5μg/mL)转移到一个自备的1.5mL塑料离心管中。
2、加入8μl溶液B,涡旋激烈震荡10-30秒混匀。
3、冰上放置30分钟或-20℃放置15分钟(过夜放置更好)。
4、4℃ 12000~15000×g离心15分钟。
5、小心移弃上清液,保留蛋白沉淀。
6、加入1mL冰浴的溶液C,震荡混匀后4℃ 12000~15000×g离心15分钟。
7、小心移弃上清液,保留蛋白沉淀。
8、短暂离心,小心移弃残留上清液后,将有蛋白沉淀的离心管敞开放置在冰上,空气晾干。一般需要10分钟左右。
9、样品放4℃保存或立即电泳检测。可直接用1×SDS-PAGE上样液或其他电泳缓冲液溶解蛋白沉淀,取适量上样。如果蓝色的*酚蓝染料变黄,则说明有残留酸性物质TCA污染,必须加少量自备的1M Tris-HCl(pH8.8)缓冲液,直到颜色变成蓝色为止,否则将影响电泳结果。
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等[36〕采用美国Roche公司的DNA Isolation Kit for Cell and Tissue和上海生工公司的UNIQ- 10小量柱式基因组DNA提取试剂盒对个体体积较小的圆紫菜(Porphyra suborbiculato )、铁钉菜(Ishige okamurae)等进行DNA 的提取,获得高纯度的基因组DNA,完全能满足酶切片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism, AFLP)技术的需要。陈子 桂 等[371以海洋尾
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