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469
- 英文名:
N-His plasmid(with CMV promoter)
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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
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-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京N端His标签融合蛋白质粒现货价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京N端His标签融合蛋白质粒现货价格
规格:1μg
英文名:N-His plasmid(with CMV promoter)
产地:国产|进口
编号:YT481
品牌:百奥莱博
本质粒是用于在哺乳动物细胞中表达N端和His tag(His标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5"端含有一个可以编码His标签的序列,因此可以表达出含有His标签的融合蛋白,可以方便地使用抗His的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
本质粒质粒的主要信息如下:
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
| His tag | 679-696 |
| multiple cloning site | 699-772 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 815-836 |
| SV40 polyA signal | 847-1230 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 1368-1674 |
| bla promoter | 1699-1823 |
| SV40 promoter | 1843-2181 |
| neomycin/kanamycin resistance ORF | 2216-3007 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 3008-3466 |
| pUC origin | 3595-4262 |
本质粒的图谱如下:
使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
储存条件:-20℃。
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北京N端His标签融合蛋白质粒现货价格关键词:N-His plasmid(with CMV promoter),YT481,N端His标签融合蛋白质粒
·YTM 总RNA抽提试剂(Trizol法)
编号:YT526
英文名称:Total RNA Extraction Reagent(Trizol Method)
规格:100ml
本试剂是一种用于动植物细胞或组织及细菌总RNA抽提的试剂。本产品采用和Invitrogen公司的TRIzol完全相似的原理和方法,抽提的方法和步骤完全相同。本试剂的颜色和TRIzol相同,加入*仿后上层呈无色,下层呈紫红色,便于吸取上层水相。
本试剂可以抽提长达15 kb的RNA,也可以抽提microRNA等小RNA。抽提小RNA时宜-70℃沉淀过夜。抽提所得RNA无DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值为1.8-2.0。裂解细胞或和组织共匀浆时,本试剂可以保持样品中RNA的完整性,即可以有效抑制RNA的降解。每一百万细胞用本试剂抽提可得5-15μg RNA;每毫克组织用本试剂抽提可得1-10μg RNA。产量因细胞和组织不同而异。每100ml 本试剂可以抽提100个六孔板中的样品或100个50-80mg的组织样品。抽提两个样品约需一小时。
本试剂抽提所得RNA可直接用于Northern,点杂交,纯化mRNA,体外翻译,RNase protection assay,cDNA克隆,以及RT-PCR;也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序(deep sequencing)等对RNA质量要求较高的情况。
百奥莱博的本试剂(YT526)和Trizol(YT527)的成分有细微差别,实际抽提效果无任何显著差异。
注意事项:
1. 需自备*仿,异丙醇,DEPC,75%乙醇(DEPC水配制),和DEPC水。DEPC水(YT528)可向百奥莱博订购。
2. 所有离心管,枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%(体积比) diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或Milli-Q级水中,处理过夜,灭菌即成DEPC水。
3. 使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA,推荐先加入适量本试剂,并裂解样品后冻存。
4. 必须戴一次性手套操作,且尽量不要对着RNA样品呼气或说话,以防RNA酶污染。建议戴一次性口罩操作。
5. 本试剂含有毒物质*酚,避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛,请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触本试剂,请立即用大量去垢剂和水冲洗,如仍有不适,请听取医生意见。
6. 本试剂抽提总RNA的同时,理论上也可抽提蛋白和DNA,但未经测试。有兴趣者可按Invitrogen公司的TRIzol的操作步骤进行操作。
储存条件:4℃,有效期一年。
北京N端His标签融合蛋白质粒现货价格关键词:N-His plasmid(with CMV promoter),YT481,N端His标签融合蛋白质粒
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文献和实验不需要切割带来的二次纯化。4,改良版PET-32a:带His标签(N端)+TrxA(硫氧还蛋白)说明:此载体表达的融合蛋白的N端带有His标签,可以通过一步亲和层析得到纯化,TrxA(硫氧还蛋白)与目的蛋白之间含有thrombin(凝血酶位点)和Linker(102bp)序列。5,改良版PET-NusA:带His标签(N端)+NusA(角质蛋白A)说明:此载体表达的融合蛋白的N端带有His标签,可以通过一步亲和层析得到纯化,NusA(角质蛋白)与目的蛋白之间含有thrombin(凝血
是由IRES序列行使功能的,但要注意的是,这部分的翻译水平比较低,比前面的MCSA大概低一个数量级。所以要选择好两个蛋白的各自位置。 3)、哺乳动物/真核荧光载体 pEGFP-N1 pEGFPN1 表达 绿色 荧光蛋白和目的基因的融合蛋白,目的基因位于N端 kan/neo 4.7kb E. coli/mammals pEGFP-N3 pEGFPN3 表达 绿色 荧光蛋白和目的基因的融合蛋白,目的基因位于N端 kan/neo 4.7kb E. coli/mammals pEGFP
。当某一个标签的使用,一是能构成表位利于纯化和检测;二是构成独特的结构特征(结合配体)利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力,可用于固定化金属螯合层析(IMAC),对重组蛋白进行分离纯化。使用His-tag有下面优点:1.标签的分子量小,只有~0.84KD,而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD,一般不影响目标蛋白的功能;2.His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化,前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用,后者在纯化包涵体蛋白时特别有用,用高浓度的变性剂溶解
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