北京现货T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)特价促销

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京现货T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)特价促销，产品信息：

类别：工具酶

英文名：T4 Polynucleotide Kinase

产品名	产品编号	包装规格
T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)	YT513	100U|500U

英文名：T4 Polynucleotide Kinase

产地：国产|进口

规格：100U|500U

编号：YT513

本酶是一种多聚核苷酸5"羟基激酶，可以催化ATP的γ位磷酸基团向单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3"磷酸基团的单核苷酸的5"羟基转移。其他NTP也可产生相同的反应：5"-OH + NTP → 5"-P + NDP。

 

上述的磷酸化反应是可逆的。当缺失ATP并且存在ADP的情况下，T4 Polynucleotide Kinase可以显示出5"磷酸酯酶的活性，催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3"磷酸基团的单核苷酸的5"磷酸基团向ADP的转移形成ATP。其他NTP也可产生相同的反应：5"-P + NDP → 5"-OH + NTP(最适pH为6.4左右)。

 

当ATP和ADP都适量存在时，T4 Polynucleotide Kinase可以催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3"磷酸基团的单核苷酸的5"磷酸基团和ATP的γ位磷酸基团之间的交换反应。其他NTP也可产生相同的反应：5"-P + NTP + NDP→5"-P + NDP + NTP。T4 Polynucleotide Kinase同时具有3"磷酸酯酶活性，可催化3"磷酸化的多聚核苷酸的去磷酸化：3"-P → 3"-OH + Pi(最适pH为5.9左右)。T4 Polynucleotide Kinase的激酶活性在C-末端附近，而磷酸酯酶活性在N-末端附近。

 

产品组份：

T4 Polynucleotide Kinase(10U/μl) ——————100U

Reaction Buffer A(10X)————————————80μl

Reaction Buffer B(10X)————————————40μl

24% PEG Solution———————————————40μl

 

用途：寡核苷酸、DNA或RNA的5"末端标记，用作Southern、Northern、EMSA等的探针，凝胶电泳的marker，DNA测序引物，PCR引物等；使寡核苷酸、DNA或RNA的5"端磷酸化，确保后续连接反应顺利进行；催化3"磷酸化的单核苷酸的5"磷酸化，使该单核苷酸可以和DNA或RNA的3"末端连接；去除3"端磷酸基团。

来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。

活性定义：37℃30分钟内，将转移ATP上1 nmol γ-磷酸基团转移到DNA 5"-OH末端所需的酶量定义为1个活性单位。

酶活性检测条件：100mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgCl2，5mM DTT，0.5mM 5"-OH DNA，0.05mM ATP，0.1MBq/ml [γ-33P]-ATP。

纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。

酶储存溶液：20mM Tris-HCl(pH7.5)，25mM KCl，0.1mM EDTA，2mM DTT，50% glycerol。

Reaction Buffer A(10X)(用于磷酸化反应)：500mM Tris-HCl(pH7.6 at 25℃)，100mM MgCl2，50mM DTT，1mM spermidine，1mM EDTA。

Reaction Buffer B(10X)(用于交换反应)：500mM imidazole-HCl(pH6.4 at 25℃)，0.18M MgCl2，50mM DTT，1mM spermidine，1mM EDTA，1mM ADP。

失活或抑制：75℃加热10分钟可使T4 Polynucleotide Kinase失活，加入EDTA也可使T4 Polynucleotide Kinase失活。金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50mM的KCl和NaCl均可显著抑制T4 Polynucleotide Kinase的活性。

储存条件：-20℃。

 

注意事项：

1. 铵盐沉淀获得的DNA不能用于T4 Polynucleotide Kinase的标记反应。铵盐可强烈抑制T4 Polynucleotide Kinase的酶活性。

2. PEG可促进磷酸化反应速率和效率；交换反应体系应加入PEG。

 

使用说明：

1. DNA 5" 末端标记：

a. 参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA—————————————————1~20pmol (5" 末端)

Reaction Buffer A (10X)———————————2µl

[γ-32P or γ-33P]-ATP (3,000Ci/mmol)————20pmol

补充无核酸酶的去离子水 ———————————至19µl

T4 Polynucleotide Kinase (10U/µl)——————1µl

b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。

c. 37℃孵育30分钟。

d. 加入1µl 0.5M EDTA (pH8.0)混匀，以终止反应。

e. 后续可以使用酚*仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。

 

2. DNA 5’ 末端磷酸化：

a. 参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA————————————————1~20pmol (5" 末端)

Reaction Buffer A (10X)——————————2µl

0.1mM ATP—————————————————1µl

补充无核酸酶的去离子水 ——————————至19µl

T4 Polynucleotide Kinase (10U/µl)—————1µl

b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。

c. 37℃孵育30分钟。

d. 加入1µl 0.5M EDTA (pH8.0)混匀，以终止反应。

e. 后续可以使用酚*仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。

 

3. 通过交换反应(exchange reaction)进行DNA 5" 末端标记：

a. 参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA——————————————————1~20pmol (5" 末端)

Reaction Buffer B (10X)————————————2µl

[γ-32P or γ-33P]-ATP (3,000Ci/mmol)—————40pmol

24% PEG Solution ———————————————4µl

补充无核酸酶的去离子水 ————————————至19µl

T4 Polynucleotide Kinase (10U/µl)———————1µl

b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。

c. 37℃孵育30分钟。

d. 加入1µl 0.5M EDTA (pH8.0)混匀，以终止反应。

e. 后续可以使用酚*仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。

 

4. 其它用途可以参考上述用途或相关文献资料进行。

北京现货T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)特价促销专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK),T4 Polynucleotide Kinase,YT513

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编号	类别	名称
YT560	酶和辅酶	海藻糖合成酶
YT170	细胞组织染色	溶酶体β-半乳糖苷酶染色试剂盒
YT768	一抗	兔抗VEGF抗体
YT604	酶和辅酶	麦芽寡糖基海藻糖合成酶
YT118	细胞凋亡与增殖	细胞凋亡染色试剂盒(细胞Hoechst染色)
YT108	免疫检测	DyLight 405抗兔免疫荧光染色试剂盒
YT743	一抗	兔抗MSH6抗体
YT096	免疫检测	抗荧光淬灭PVP封片液
YT795	一抗	HDAC6抗体
YT658	一抗	CDK4抗体
YT103	免疫检测	AMCA抗兔免疫荧光染色试剂盒
YT314	生化检测试剂盒	总抗氧化能力快速检测试剂盒(ABTS法)
YT354	抑制剂激活剂	HDAC抑制剂(Trichostatin A)
YT358	探针标记及检测	细胞内*离子荧光探针(Fura-2 AM)
YT647	一抗	Bak抗体
YT349	抑制剂激活剂	HMG-CoA Reductase抑制剂(Simvastatin)
YT886	免疫检测	YT™免疫染色封闭液
YT453	克隆与表达	p53荧光素酶报告基因质粒(p53抑癌基因质粒)
YT599	酶和辅酶	苏*酸脱*酶
YT469	克隆与表达	C端Flag标签融合蛋白质粒
YT569	酶和辅酶	S-ω-*基酸转*酶
YT542	酶和辅酶	甘露醇脱*酶
YT286	生化检测试剂盒	一氧化*(代"氮")检测试剂盒

 

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