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Hieff NGS Library Quantification Kit for Illumina®, qPCR Master Mix
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有效期6个月
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
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500T
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格(元) |
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, qPCR Master Mix | 12302ES05 | 500 T | -20℃ | 1526.00 |
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, DNA Standard 1-6 | 12307ES09 | 6×96 μL | -20℃ | 2126.00 |
组分编号 | 组分名称 | 规格 | 12302ES05 | 12307ES09 |
12302-A | Hieff NGS® SYBR qPCR Master Mix (2×) | 5×1 mL | √ | -- |
12302-B | qPCR Primer Mix | 600 μL | √ | -- |
12302-C | 50×Low Rox | 200 μL | √ | -- |
12302-D | 50×High Rox | 200 μL | √ | -- |
- | DNA Standards 1-6 | 6×96 μL | -- | √ |
类别 | 机型 |
不添加ROX | Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™; Cepheid SmartCycler®; Eppendorf Mastercycler®ep realplex, realplex 2 s; Illumina Eco qPCR; Qiagen/Corbett Rotor-Gene®Q, Rotor-Gene®3000, Rotor-Gene®6000; Roche Applied Science LightCyclerTM480; Thermo Scientific PikoReal Cycler. |
添加50×High Rox | Applied Biosystems 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast; StepOne™, StepOnePlus™. |
添加50×Low Rox | Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA™7; Stratagene MX4000™, MX3005P™, MX3000P™ |
DNA Standard | 摩尔浓度 | 质量浓度 | 拷贝数浓度 |
Std 1 | 20 pM | 5.5 pg/μL | 12×106 copies/μL |
Std 2 | 2 pM | 0.55 pg/μL | 12×105 copies/μL |
Std 3 | 0.2 pM | 0.055 pg/μL | 12×104 copies/μL |
Std 4 | 0.02 pM | 0.0055 pg/μL | 12×103 copies/μL |
Std 5 | 0.002 pM | 0.00055 pg/μL | 12×102 copies/μL |
Std 6 | 0.0002 pM | 0.000055 pg/μL | 12×101 copies/μL |
名称 | 体积 |
Hieff NGS® SYBR qPCR Master Mix(2×) | 10 μL |
qPCR Primer Mix | 1 μL |
Diluted DNA Library/DNA Standard 1-6/ddH2O* | 2 μL |
ddH2O | 7 μL |
Total | 20 μL |
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 5 min | 1 cycle |
循环反应 | 95℃ | 10 sec | 40 cycles |
60℃ | 45 sec* | ||
熔解曲线 | 95℃ | 15 sec | 1 cycle |
60℃ | 60 sec | ||
95℃ | 15 sec |
问题 | 可能原因与解决方法 |
扩增效率不在90%-110% | 1. 如Ct (NTC) - Ct (DNA Standard 6) < 3或者Ct (DNA Standard 6) - Ct (DNA Standard 5) < 3.1,且计算扩增效率超过100%,提示反应体系有污染。应根据NTC阴性对照的融解曲线确认污染源(文库污染或DNA Standards污染)。 2. 不恰当的基线基线(Baseline)设置。手动调整基线(Baseline)为1-3循环。 3. 移液精确度差,重复实验,确保所有试剂使用前完全溶解并混匀。 |
相关系数R2 < 0.99 | 1. 移液精确度差,重复实验,确保所有试剂使用前完全溶解并混匀。 2. 仪器相关问题,确保仪器与ROX匹配使用。 |
标曲扩增曲线分布不均一 | 1. Ct (DNA Standard 6) - Ct (DNA Standard 5) < 3.1,提示反应体系有污染。根据NTC 阴性对照的融解曲线确认污染源(文库污染或DNA Standards污染)。 2. Ct (DNA Standard 2) - Ct (DNA Standard 1) < 3.1,提示基线基线(Baseline)设置不当。手动调整基线基线(Baseline)为1-3。 3. DNA Standards之间的ΔCt > 3.6,提示扩增效率差。确认所有试剂在使用前都已充分解冻并彻底混匀;确认所有组分浓度正确以及反应程序无误。 4. 长时间强光照射会导致qPCR Master Mix荧光值下降,进而造成ΔCt > 3.6。应按照推荐方式避光贮存试剂。 |
复孔重复性差 | 1. 移液精确度差,重复实验,确保所有试剂使用前完全溶解并混匀。 2. 仪器相关问题,确保仪器与ROX匹配使用。 |
文库稀释液ΔCt不在合理范围(如2倍稀释文库,ΔCt为0.9-1.1) | 1. 移液精确度差,重复实验,确保所有试剂使用前完全溶解并混匀。 2. 文库难于扩增。GC/AT含量过高或长度超过1 kb的文库扩增效率较差。 3. 文库降解。文库应现用现稀释,稀释好的文库应置于冰上备用。 |
文库各稀释度计算的初始文库浓度差异超过10% | 1. 移液精确度差,重复实验,确保所有试剂使用前完全溶解并混匀。 2. 文库难于扩增。GC/AT含量过高或长度超过1 kb的文库扩增效率较差。 3. 文库降解。文库应现用现稀释,稀释好的文库应置于冰上备用。 |
稀释文库Ct值不在标曲Ct的有效范围 | 1. 使用有效范围内的Ct值计算文库浓度。当Ct (稀释文库) < Ct (DNA Standard 1),提示文库稀释度不够,应提高文库稀释倍数重复实验。 2. Ct (稀释文库) > Ct (DNA Standard 6),提示文库稀释度过高,应减少稀释倍数重复实验。 3. 推荐稀释度为1:1000-1:100000。对于高浓度文库,可额外设置3个2倍稀释梯度,如按1:1000稀释文库,可额外设置1:2000,1:4000,1:8000稀释比例,以保证测定值在试剂盒所提供的标曲范围内。 |
DNA Standard 1扩增曲线异常 | 不恰当的基线基线(Baseline)设置。手动调整基线(Baseline)为1-3循环。 |
DNA Standards有扩增,而文库没有或Ct很大 | 1. 文库接头序列错误。核对文库末端序列与试剂盒提供的引物序列是否匹配。 2. 稀释度过高。减少稀释倍数,重复实验。 3. 文库降解。文库应现用现稀释。 |
建库试剂盒 | 产品编号 | 规格 |
Hieff NGS® MaxUp II Dual-mode mRNA Library Prep Kit for Illumina® | 12300ES08/24/96 | 8/24/96 T |
Hieff NGS® Ultima DNA Library Prep Kit for Illumina® | 12199ES08/24/96 | 8/24/96 T |
Hieff NGS® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina® | 12200ES08/24/96 | 8/24/96 T |
Hieff NGS® OnePot DNA Library Prep Kit for Illumina® | 12203ES08/24/96 | 8/24/96 T |
Hieff NGS® OnePotTM II DNA Library Prep Kit for Illumina® | 12204ES08/24/96 | 8/24/96 T |
Hieff NGS® Fast Tagment DNA Library Prep Kit for Illumina® (for 1 ng) | 12206ES08/24/96 | 8/24/96 T |
文库构建磁珠 | 产品编号 | 规格 |
Hieff NGS® cfDNA Clean Beads(100~200 bp) | 12599ES03/08/56 | 1/5/60 mL |
Hieff NGS® Smarter DNA Clean beads (50 bp以上) | 12600ES03/08/56/75 | 1/5/60/450 mL |
Hieff NGS® DNA Selection Beads(Superior AMPure XP alternative) | 12601ES03/08/56/75 | 1/5/60/450 mL |
Hieff NGS® RNA Cleaner | 12602ES03/08/56/75 | 1/5/60/450 mL |
Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit | 12603ES24/96 | 24/96 T |
建库接头 | 产品编号 | 规格 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1 | 12615ES04/16 | 12×4/12×16 T |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 2 | 12616ES04/16 | 12×4/12×16 T |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 3 | 12617ES04/16 | 12×4/12×16 T |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 4 | 12618ES04/16 | 12×4/12×16 T |
Hieff NGS® Tagment Index Kit for Illumina®,(96 Index) | 12610ES96 | 96 T |
建库模块 | 产品编号 | 规格 |
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent | 12609ES24/96 | 24/96 T |
Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module | 12608ES24/96 | 24/96 T |
Hieff NGS® UltimaTM DNA Ligation Module | 12604ES24/96 | 24/96 T |
2×Super Canace®Ⅱ Uracil High-Fidelity Mix for Library Amplification | 12620ES24/96 | 24/96 T |
2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library Amplification | 12621ES24/96 | 24/96 T |
Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat) | 12253ES08/24/96 | 8/24/96 T |
文库定量 | 产品编号 | 规格 |
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, qPCR Master Mix | 12302ES05 | 500 T |
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, DNA Standard (1-6) | 12307ES09 | 6×96 μL |
dsDNA HS Assay Kit for Qubit® | 12640ES60/76 | 100/500 T |
1×dsDNA HS Assay Kit for Qubit® | 12642ES60/76 | 100/500 T |
多重PCR | 产品编号 | 规格 |
Hieff® Multiplex PCR Kit | 13279ES60/76 | 100/500 T |
2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix 2×高GC多重PCR预混液 | 13283ES03/08/50/60/76 | 1/5×1/50/250/500mL |
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