T4 RNA连接酶品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")T4 RNA连接酶品牌，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：T4 RNA连接酶品牌
规格：1000U
产地：国产|进口
编号：BTN120421
英文名：T4 RNA Ligase
本酶催化ATP降解为AMP和焦磷酸的反应，释放的能量能使寡核苷酸的5´-P末端和3´-OH末端结合，也能催化分子内连接的环化反应以及分子间的连接反应。最小底物为NpNpNOH(3´-OH Oligomer、受体)、pNp(5´、3´-DP monomer、供体)。连接效率受供体和受体各自的碱基影响很大。与RNA相比DNA连接的效率较低。

产品用途：
1．单链RNA及单链DNA的3´-OH末端的标记。
2．单链Oligo RNA及单链Oligo DNA的合成。
3．合成全长cDNA。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：以Oligo(A)n为底物，在5℃、10分钟内使1pmol［5´–³²P］pCp 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

我公司的T4 RNA连接酶品牌，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·菌落PCR试剂盒2.0
编号：BTN50901
英文名称：Colony PCR Kit 2.0
规格：50次
菌落PCR是筛选重组子的有效方法，可以使质粒鉴定过程从两天缩短到几小时。但由于它直接以E.coli菌落为PCR而菌落中常常含有未进入细菌的、来源于连接反应的载体DNA和插入片段，所以十分容易产生假阳性。本产品针对此缺点进行了改良。

产品特点：
1. 无假阳性率，特殊的溶菌方式能有效降低菌落中未转化DNA 对PCR的干扰，使假阳性率低于5%，远低于绝大部分同类产品。
2. 简单快速，用户只需要提供PCR引物和E.coli菌落，不需要细菌培养和质粒提取,整个筛选过程从一天缩短到2-3小时，节约时间和成本。本产品与常用E.coli菌株和载体兼容。既可小规模筛选，也适用于大规模筛查。
3.高灵敏度，既可用于高拷贝质粒，也适合于低拷贝质粒。
4. PCR反应体系中含有惰性电泳染料，反映完成后可直接上样电泳，不需另加上样液。
5.处理过的菌落样品低温长期保存后仍能用于PCR 筛查。
6. 性价比高，价格跟质粒提取试剂盒相当，但节约一天时间。

成分	规格
溶菌液A	0.5ml
溶菌液B	0.1ml
PCR 2.0	0.75ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 标记1.5mL塑料离心管，除样品管外，还必须加上阳性和阴性对照管。
在每个管中加入下列成份配制100μL 溶菌液：

H2O(自备)	88μl
溶菌液A	10μl
溶菌液B	2μl
合计	100μl

2. 用无菌牙签或无菌移液枪头从培养皿上挑取一个菌落或部分菌落，放入溶菌液中，充分震荡直到菌落彻底分散混匀。为方便回查，最好在培养皿上给已取样的菌落做好标记。
3. 重复第2 步直到待筛查菌落全部转移到相应的离心管中。
4.在阳性对照管中，加入已知含有待筛选质粒的菌落；如果没有此菌落，直接进入第6 步，用连接反应液直接作PCR的阳性对照。
5.在阴性对照管中，加入已知的不含有待筛选质粒的任何E.coli菌落(如常见的宿主细菌)，其他处理同第2 步。
6. 将所有离心管置于37℃保温30分钟，然后转入100℃水浴处理10分钟。振荡混匀溶液数秒后10,000 g离心1分钟，转移上清到一新的离心管中待用。此溶液为样品DNA溶液。
7. 标记与第1 步数量相同的PCR 管，每个管中分别加入下列成份并充分混匀：

样品DNA溶液	1-5μl
PCR MagicMix	15μl
引物1(10 pmol/μL)	1μl(自备)
引物2(10 pmol/μL)	1μl(自备)
Taq物DNA聚合酶(5U/μL)	0.2-0.4μL(1-2U)
补水到	30μl

 注意:引物选择有三种情况，
 一是选用商品化的能与多克隆位点两边顺序结合的通用引物(如T7、T3、SP6等)；
 二是使用用户自己合成的能与插入片段结合的引物(如果插入片段是PCR产物，引物是现成的)；
 三是组合第一种情况和第二种情况的引物。选择前两种引物在筛查到重组子后还必须用其他方法(如质粒制备后酶切或使用载体引物/插入片段引物PCR)进一步确定插入方向。选择第三种引物则可以同时完成重组子筛选和DNA 插入方向确定两项工作。用户可以根据自己的具体情况选择。
8. 将PCR 管放入PCR 仪器中进行扩增，PCR 温度参数根据引物和模板情况由客户自己预先确定。
9. PCR结束后取10μl电泳直接进行琼脂糖电泳分析。(注：本试剂盒提供的PCR buffer中已经含有电泳染料和甘油，故可以直接上样)


T4 RNA连接酶品牌关键词：T4 RNA Ligase,T4 RNA连接酶,BTN120421


·地塞米松
编号：BTN131234
英文名称：Dexamethasone DXM Solution
规格：1mL
本产品为浓度为50mg/mL的地塞米松乙醇溶液。地塞米松(Acido*(代"c")ont,Deronil,Dexacortal,dexametona)又名*美松、*甲强地松龙、德沙美松。分子式：C22H29FO5，分子量：392.5，CAS号：50-02-2。溶于乙醇。地塞米松属于糖皮质类激素，具有抗炎、抗过敏、抗风湿、免疫抑制等作用。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。

·1×TBS(含5%BSA，0.1%Tween20溶液)
编号：BTN160697
英文名称：Dexamethasone DXM Solution
规格：250mL
Tris缓冲盐溶液简称TBS，属于常规pH缓冲液，常用于清洗Western Blot中蛋白印迹膜或者配制封闭液，是常用分子生物学试剂。在TBS的基础上加入一定比例的Tween 20，能够大大增强TBS的洗涤作用。本产品主要成分为1*TBS、0.1%Tween20和5%BSA，可作为封闭液的基础试剂。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

·EDTA溶液(RNase-Free)(0.5M,pH8.0)
编号：BTN60308
英文名称：Dexamethasone DXM Solution
规格：250mL
Tris缓冲盐溶液简称TBS，属于常规pH缓冲液，常用于清洗Western Blot中蛋白印迹膜或者配制封闭液，是常用分子生物学试剂。在TBS的基础上加入一定比例的Tween 20，能够大大增强TBS的洗涤作用。本产品主要成分为1*TBS、0.1%Tween20和5%BSA，可作为封闭液的基础试剂。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

·TRIzol试剂伴侣
编号：BTN81027
英文名称：TRIzol-Mate
规格：50次
TRIzol是用于总RNA提取(主要是动物总RNA提取)的著名产品，具有广大的客户群。但其缺点之一是一直没有柱式升级产品，客户仍然要使用既繁琐又费事的非柱式操作(另一缺点是不能用于富含多糖和多酚的材料)为解决此问题，我们特推出本产品，其操作流程如下：


产品特点：
1. RNA 质量更好，因为操作简短减少了RNA在提取过程中的降解。
2. RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在 1.9以上，比经典 TRIzol法得到的更纯。
3. 专门的洗涤条件能有效去除基因组 DNA，进一步减少其对 RNA的污染。
4.适用于其他基于酸酚/ 异硫*酸胍提取原理的RNA提取产品，包括TRIzol、TRIzol LS、TRI Reagent等。
5.可以省略*仿处理步骤，避免接触有毒试剂(但效果稍差)。
6.跟TRIzol 结合使用，把经典操作变成了柱式操作，简化了实验流程，用户可以节约30分钟的时间。

产品组成：

成分	规格
溶液A	50ml
硅胶膜离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用及效果：


使用方法：
1. 按 TRIzol的使用说明书进行总 RNA提取到加*仿之前一步。
2. 如果需要加*仿，则继续按TRIzol的使用说明书操作，用*仿处理裂解液离心后得到上清液。如果省略*仿处理步骤，则需要将裂解物直接离心。
3. 将经过*仿处理得到的上清液或没有经过*仿处理直接离心得到的裂解液转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意：如果是经过*仿处理，则离心后，下层有机相和中间层将含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μl上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
4. 加入等体积的溶液A，颠倒混匀 30秒。
5. 根据混合物的多少，一次或分两次转移到离心吸附柱中。
6. 每次转移后，需要13000-15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
7. 加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品OD260/280 比值不高，可以再用0.3mL 通用洗柱液重复此步一次。
8.室温离心半分钟。此步对去除残留通用洗柱液十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的质量和使用。
9. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μl RNA 洗脱液。
10.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
11. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
12. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
13. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如我公司的RNAload)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的说明书进行操作。


T4 RNA连接酶品牌关键词：T4 RNA Ligase,T4 RNA连接酶,BTN120421


·5´RACE试剂盒
编号：BTN101105
英文名称：5´-RACE Kit
规格：10次
研究真核基因的最基础的工作之一就是确定其转录终止位点，目前最通用的方法是5´-RACE法，RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是Frohman发明的、通过PCR快速克隆cDNA末端的技术，它在不建立cDNA文库的前提下，利用已知cDNA序列设计引物，通过往两端延伸和扩增获得其5´-端序列。本试剂盒就是根据5´-RACE原理而开发。RACE的原理如下图：


产品特点：
1. 即开即用，客户不需要单独准备各种材料。
2.反应条件经过精心优化，包括使用无RNase H活性的MMLV和优化的引物。

试剂盒组成：

成分	规格
MMLV逆转录酶-RI混合液(RNase H-，200U/μL)	10μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	60μl
微量核酸沉淀剂	400μl
TdT(末端转移酶)	10μl
2×TdT Buffer(含dATP)	100μl
PCR MagicMix 3.0	1.5ml
5´-RACE引物A-引物B混合液	100μl
5´-RACE引物C	100μl
RNase-Free水	1ml

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

1.变性模板RNA：将1μg mRNA或5μg总RNA加入到一个RNase-free的PCR管中，补RNase-Free水到9μL，65℃保温5分钟后短暂离心，立即放冰上待用。如果RNA浓度偏低，体积超过9μl,可以使用本公司的核酸浓缩剂(需另购,产品编号为BTN110801)浓缩到所需的体积。
2. 设置RT反应(用户可以根据需要设阴性对照)：在上步的含变性后的RNA模板的PCR管中，按顺序加入：

成分	用量
自备的基因专一性引物A(10μM)	4μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	6μl
MMLV逆转录酶-RI混合液	1μl
合计	20μl

3. 37℃保温60分钟，42℃保温30分钟，50℃保温10分钟，最后75℃保温10分钟使逆转录酶变性。
4. 短暂离心5秒后待用。
5.在PCR管中加入40μl微量核酸沉淀剂(本产品含不溶的核酸助沉剂，用前需要充分摇匀再取用)，震荡混匀。
6.室温12000rpm离心15分钟，小心吸弃上清。
7. 加入1mL自备75%乙醇，室温12000rpm离心5分钟，小心吸弃上清。
8. 短暂离心数秒，小心吸弃残留液体后，稍微晾干后加入10μL RNase-free水，充分吹打溶解，得到cDNA溶液。注意：为保证加尾效率，溶解cDNA的RNase-free水最好不要超过10μl。
9. 加尾反应：在10μL cDNA溶液中加10μL 2×TdT Buffer(含dATP)和1μL TdT酶，轻柔吹打混匀。
10. 37℃保温15分钟进行加尾反应，然后75℃保温3分钟灭活末端转移酶。
11. 加入0.5mL RNase-free水稀释加尾反应体系。此稀释液将作为PCR的模板。
12. 第一轮PCR：用不同量的稀释后的加尾反应液设置PCR反应(样品组最好设用量梯度，单位：μL)。

成分	梯度1	梯度2	梯度3	梯度4
PCR MagicMix 3.0	25	25	25	25
自备基因专一性引物B(10μM)	2.5	2.5	2.5	2.5
5´RACE引物 A-引物B混合液	2.5	2.5	2.5	2.5
稀释后的加尾反应液	1	5	10	15
RNase-free 水	19	15	10	5
合计	50	50	50	50

13. 按下列条件进行 PCR(注：应根据实际情况选择适当的退火温度)。
 第1次循环：94℃ 5分，48-52℃ 2分，72℃ 4分
 第2-30次循环：94℃ 40秒，52-60℃ 1分，72℃ 3分
 最后延伸：72℃ 15分
14. 取10-20μL PCR产物进行琼脂糖电泳电泳检查PCR结果，如果一条清晰的条带，则可以不做后续的第二轮PCR，而直接进行 DNA 测序或TA克隆。
15. 第二轮PCR：如果第一轮PCR没有一条清晰的条，则带从4管PCR产物中各取1μL分别加入到20μL RNase-free水中进行稀释，然后各取1μL分别作为4管第二轮PCR的模板：

成分	用量
第一轮 PCR产物的稀释液	1μl
PCR MagicMix 3.0	25μl
5´RACE引物 C	2.5μl
自备基因专一性引物 C(10μm)	2.5μl
RNase-free 水	补水至50μl
合计	50μl

16. 按下列条件进行 PCR：第 1-30次循环(94℃ 40秒，52-60℃ 1 分，72℃ 3分)，最后延伸：72℃ 15分
17. 取10-20μL第二轮 PCR产物进行琼脂糖电泳，一般都会有一个样品有清晰的条带出现，则可以直接进行DNA测序或TA克隆。

我公司正在打折促销工具酶全系列产品，恭候您的咨询选购T4 RNA连接酶品牌。