- 询价
- 2026年03月30日
9 年钻石会员
企业认证
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
细胞自噬(autophagy or autophagocytosis)：又称为Ⅱ型细胞死亡，是细胞在自噬相关基因(autophagy related gene，Atg) 的调控下利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程。自噬作为时下的研究热点，有非常深远的研究意义。拓普生物在自噬研究方面具有丰富的经验，我们可以为您提供从课题设计-实验操作-实验结果-数据分析的整体解决方案。
（一）自噬诱导剂
1）Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin ：模拟内质网应激
2）Carbamazepine/ L-690，330/ Lithium Chloride（氯化锂）：IMPase 抑制剂（即Inositol monophosphatase，肌醇单磷酸酶）
3）Earle's 平衡盐溶液：制造饥饿
4）N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：Class I PI3K Pathway 抑制剂
5）Rapamycin：mTOR 抑制剂(这是最常用的)
6）Xestospongin B/C：IP3R 阻滞剂
图片来源：Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2017 Dec;21(24):5548-5556
（二）自噬抑制剂
1）3-Methyladenine（3-MA）：（Class III PI3K） hVps34 抑制剂
2）Bafilomycin A1：质子泵抑制剂
3）Hydroxychloroquine（羟氯喹）
（三）细胞自噬形态学特征的检测方法
1）透射电镜观察自噬体。
自噬体是自噬的标志性结构。自噬体属于亚细胞结构，直径一般为300～900nm，平均500nm，普通光镜下看不到。通过透射电子显微镜发现自噬体一直是观察自噬现象最直接、最经典的方法，是自噬检测的“金标准”。
图片来源：Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2017 Dec;21(24):5548-5556
2）荧光显微镜下采用GFP-LC3融合蛋白来示踪自噬形成。
由于自噬体膜形成过程中需要LC3，因此通过标记LC3可以识别自噬体。
图片来源：Onco Targets Ther. 2018 Apr 9;11:2017-2028
3）荧光染色法
用荧光染料对组织切片或细胞进行染色观察自噬的发生。晚期自噬体与溶酶体融合而呈酸性，根据这个特点可用酸向性染料MDC、吖啶橙和Lyso Tracker标记自噬溶酶体。
MDC染色法观察自噬 图片来源：Acta Pharmacol Sin. 2016 Apr; 37(4): 505–518
(四)自噬标志性蛋白
1.自噬标记蛋白LC3微管相关蛋白1轻链3(LC3／Atg8)是自噬体膜上的标记蛋白。细胞内存在两种形式的LC3蛋白，LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ。细胞内新合成的LC3其C端被Atg4蛋白酶剪切，成为胞质可溶形式的LC3-Ⅰ。当自噬体形成后，LC3-Ⅰ经剪切和泛素化加工修饰．与自噬体膜表面的磷脂酰乙醇胺(PE)偶联，成为膜结合形式的LC3-Ⅱ并定位于自噬体内膜和外膜,因此LC3-Ⅱ/Ⅰ比值的大小可以估计自噬水平的高低。
图片来源：BMC Ophthalmol. 2018 Apr 27;18(1):110
2）细胞自噬底物蛋白的检测
p62偶联于LC3，作为一种调节因子参与自噬体的构成，在自噬的中、晚期被降解。细胞内整体p62水平的表达与自噬活性存在负相关。蛋白质免疫印迹技术检测p62水平的降低可以反映自噬活性程度。p62的增加暗示着自噬、溶酶体降解途径被抑制。
图片来源：Front Physiol. 2018; 9: 441
3）Atg12-Atg5复合体
除了LC3，自噬体膜上标志性蛋白质还有Atg12-Atg5结合体。Atg12和Atg5在翻译后就像单个分子一样共价结合在一起，它定位在自噬体双层隔离膜的整个延长阶段。
图片来源：Front Physiol. 2018; 9: 441
4）Beclin1
哺乳动物Beclin1是酵母Atg6基因的同源物。Beclin1通过激活自噬对细胞生长和抑瘤机制进行控制。蛋白质印迹技术检测Beclin1蛋白表达情况直接反映自噬活性。
图片来源：Onco Targets Ther. 2018 Apr 9;11:2017-2028
5）自噬相关的标志性蛋白还包括ATG1、ATG9、DRAM1、ATG14、ATG16以及 ATG18等。
（五）自噬的调控通路
1）依赖mTOR（哺乳动物雷帕霉素靶点）途径的自噬
A．PI3K-AKT-mTOR信号通路
图片来源：Onco Targets Ther. 2018 Apr 9;11:2017-2028
B. AMPK-TSC 1/2-mTOR 信号通路
2)其它的信号通路
A. 3-甲基腺嘌呤（3-MA）通过抑制Class ⅢPI3K的活性抑制自噬。
B. beclin1和UVRAG作为正调控子，抗凋亡因子bcl-2作为负调控子共同参与组成ClassⅢPI3 复合物调控自噬。
C. GTP结合的G蛋白亚基Gαi3抑制自噬；GDP结合的Gαi3蛋白活化自噬。
D. 死亡相关蛋白激酶（death-associated proteinlinase,DAPK）和DAPK相关蛋白激酶（DAPK-related protein kinase-1,DRP-1）诱导自噬。
参考文献：
1.Li et al.Autophagy attenuates the oxidative stress-induced apoptosis of Mc3T3-E1 osteoblasts. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2017 Dec;21(24):5548-5556.
2.Fu et al. Hyperoside induces both autophagy and apoptosis in non-small cell lung cancer cells in vitro. Acta Pharmacol Sin. 2016 Apr; 37(4): 505–518.
3.Yao et al. Crocin induces autophagic apoptosis in hepatocellular carcinoma by inhibiting Akt/mTOR activity. Onco Targets Ther. 2018 Apr 9;11:2017-2028.
4. Li et al. Manipulation of autophagy: a novelly potential therapeutic strategy for retinal neovascularization. BMC Ophthalmol. 2018 Apr 27;18(1):110.
5. Huang et al. Severe Burn-Induced Intestinal Epithelial Barrier Dysfunction Is Associated With Endoplasmic Reticulum Stress and Autophagy in Mice. Front Physiol. 2018; 9: 441
（一）自噬诱导剂
1）Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin ：模拟内质网应激
2）Carbamazepine/ L-690，330/ Lithium Chloride（氯化锂）：IMPase 抑制剂（即Inositol monophosphatase，肌醇单磷酸酶）
3）Earle's 平衡盐溶液：制造饥饿
4）N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：Class I PI3K Pathway 抑制剂
5）Rapamycin：mTOR 抑制剂(这是最常用的)
6）Xestospongin B/C：IP3R 阻滞剂
图片来源：Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2017 Dec;21(24):5548-5556
（二）自噬抑制剂
1）3-Methyladenine（3-MA）：（Class III PI3K） hVps34 抑制剂
2）Bafilomycin A1：质子泵抑制剂
3）Hydroxychloroquine（羟氯喹）
（三）细胞自噬形态学特征的检测方法
1）透射电镜观察自噬体。
自噬体是自噬的标志性结构。自噬体属于亚细胞结构，直径一般为300～900nm，平均500nm，普通光镜下看不到。通过透射电子显微镜发现自噬体一直是观察自噬现象最直接、最经典的方法，是自噬检测的“金标准”。
图片来源：Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2017 Dec;21(24):5548-5556
2）荧光显微镜下采用GFP-LC3融合蛋白来示踪自噬形成。
由于自噬体膜形成过程中需要LC3，因此通过标记LC3可以识别自噬体。
图片来源：Onco Targets Ther. 2018 Apr 9;11:2017-2028
3）荧光染色法
用荧光染料对组织切片或细胞进行染色观察自噬的发生。晚期自噬体与溶酶体融合而呈酸性，根据这个特点可用酸向性染料MDC、吖啶橙和Lyso Tracker标记自噬溶酶体。
MDC染色法观察自噬 图片来源：Acta Pharmacol Sin. 2016 Apr; 37(4): 505–518
(四)自噬标志性蛋白
1.自噬标记蛋白LC3微管相关蛋白1轻链3(LC3／Atg8)是自噬体膜上的标记蛋白。细胞内存在两种形式的LC3蛋白，LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ。细胞内新合成的LC3其C端被Atg4蛋白酶剪切，成为胞质可溶形式的LC3-Ⅰ。当自噬体形成后，LC3-Ⅰ经剪切和泛素化加工修饰．与自噬体膜表面的磷脂酰乙醇胺(PE)偶联，成为膜结合形式的LC3-Ⅱ并定位于自噬体内膜和外膜,因此LC3-Ⅱ/Ⅰ比值的大小可以估计自噬水平的高低。
图片来源：BMC Ophthalmol. 2018 Apr 27;18(1):110
2）细胞自噬底物蛋白的检测
p62偶联于LC3，作为一种调节因子参与自噬体的构成，在自噬的中、晚期被降解。细胞内整体p62水平的表达与自噬活性存在负相关。蛋白质免疫印迹技术检测p62水平的降低可以反映自噬活性程度。p62的增加暗示着自噬、溶酶体降解途径被抑制。
图片来源：Front Physiol. 2018; 9: 441
3）Atg12-Atg5复合体
除了LC3，自噬体膜上标志性蛋白质还有Atg12-Atg5结合体。Atg12和Atg5在翻译后就像单个分子一样共价结合在一起，它定位在自噬体双层隔离膜的整个延长阶段。
图片来源：Front Physiol. 2018; 9: 441
4）Beclin1
哺乳动物Beclin1是酵母Atg6基因的同源物。Beclin1通过激活自噬对细胞生长和抑瘤机制进行控制。蛋白质印迹技术检测Beclin1蛋白表达情况直接反映自噬活性。
图片来源：Onco Targets Ther. 2018 Apr 9;11:2017-2028
5）自噬相关的标志性蛋白还包括ATG1、ATG9、DRAM1、ATG14、ATG16以及 ATG18等。
（五）自噬的调控通路
1）依赖mTOR（哺乳动物雷帕霉素靶点）途径的自噬
A．PI3K-AKT-mTOR信号通路
图片来源：Onco Targets Ther. 2018 Apr 9;11:2017-2028
B. AMPK-TSC 1/2-mTOR 信号通路
2)其它的信号通路
A. 3-甲基腺嘌呤（3-MA）通过抑制Class ⅢPI3K的活性抑制自噬。
B. beclin1和UVRAG作为正调控子，抗凋亡因子bcl-2作为负调控子共同参与组成ClassⅢPI3 复合物调控自噬。
C. GTP结合的G蛋白亚基Gαi3抑制自噬；GDP结合的Gαi3蛋白活化自噬。
D. 死亡相关蛋白激酶（death-associated proteinlinase,DAPK）和DAPK相关蛋白激酶（DAPK-related protein kinase-1,DRP-1）诱导自噬。
参考文献：
1.Li et al.Autophagy attenuates the oxidative stress-induced apoptosis of Mc3T3-E1 osteoblasts. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2017 Dec;21(24):5548-5556.
2.Fu et al. Hyperoside induces both autophagy and apoptosis in non-small cell lung cancer cells in vitro. Acta Pharmacol Sin. 2016 Apr; 37(4): 505–518.
3.Yao et al. Crocin induces autophagic apoptosis in hepatocellular carcinoma by inhibiting Akt/mTOR activity. Onco Targets Ther. 2018 Apr 9;11:2017-2028.
4. Li et al. Manipulation of autophagy: a novelly potential therapeutic strategy for retinal neovascularization. BMC Ophthalmol. 2018 Apr 27;18(1):110.
5. Huang et al. Severe Burn-Induced Intestinal Epithelial Barrier Dysfunction Is Associated With Endoplasmic Reticulum Stress and Autophagy in Mice. Front Physiol. 2018; 9: 441
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验相关实验
和元生物
proteins are visualized in the pellet fraction （P） after centrifugation of the reaction. 由于膜蛋白的过表达可能对细胞有毒性，并且在纯化时很难选择合适的溶解试剂，再加上目前对膜蛋白晶体培养缺少有效方法和模型，所以要想顺利地获得膜蛋白的三维数据更是难上加难。幸亏技术总在进步，创新的产品也不断涌现。QIAGEN在2009年推出了膜蛋白的整体解决方案
什么是外泌体？ 外泌体（Exosomes）是细胞分泌到胞外的一种囊泡（Extracellular Vesicles，EVs），其大小为30-150nm，具有双层膜结构和茶托状形态，含有丰富的内含物（包括核酸、蛋白和脂质等），参与细胞间的分子传递。外泌体广泛存在于细胞培养上清以及各种体液中，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁等，同时也存在于组织样本中，如脑组织、肌肉组织、脂肪组织等。 脑组织分离方法简述：将脑组织剪成薄片，放入离心管中加上消化液进行消化，经水浴、反复轻轻上下颠倒，再用移液
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
自噬整体解决方案
询价
