北京SYA499型炭疽杆菌荧光PCR检测试剂盒(BA)现货供

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京SYA499型炭疽杆菌荧光PCR检测试剂盒(BA)现货供应，产品信息：

类别：动物疫病PCR检测试剂盒

产品名	产品编号	等级含量	包装规格
炭疽杆菌荧光PCR检测试剂盒(BA)	SYA499	科研试剂	48次/盒

品牌：百奥莱博

编号：SYA499

等级：科研试剂

规格：48次/盒

一、简介

本试剂盒用一对炭疽杆菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对炭疽杆菌核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

 

二、用途

该试剂盒适用于检测发病部位新鲜脓液、渗出物，吸入性炭疽的咯痰、呕吐物、肠炭疽的粪便及脑脊液、外周血等样本中炭疽杆菌(BA)DNA，用于炭疽病等疾病的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

 

三、试剂盒组成(50T/Kit)

组份 数量 规格

BA反应液(BA-qPCR MIX) 1管 1mL/管

核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管

酶混合液(Enzymes MIX) 1管 50μL/管

阴性对照(NTC) 1管 250μL/管

BA阳性对照(BA-PTC) 1管 50μL/管

 

四、荧光PCR仪器适用范围

ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。

 

五、储存条件及有效期：

本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为12个月。

 

六、样品采集、前处理与DNA提取

6.1 样品采集

6.1.1 适用标本类型：新鲜脓液、渗出物、吸入性炭疽的咯痰、呕吐物、肠炭疽的粪便及脑脊液、牛外周血。

6.1.2 标本采集

6.1.2.1 组织：取发病组织约1g，置入1.5mL洁净EP管，立即送检；

6.1.2.2 血液：无菌注射器抽取外周血1-2mL注入EDTA2Na(或柠檬酸*)抗凝管；

6.1.2.3 体液等液体标本：取0.5-1mL左右，置入1.5mL洁净EP管，立即送检；

6.2 样本前处理：

6.2.1 组织：取50mg左右组织用玻璃匀浆器匀浆，匀浆后置于洁净的1.5mL离心管中；

6.2.2 血液样本：直接取200uL抗凝血，转至一洁净的1.5mL离心管中，加入1mL双蒸水，剧烈震荡30s，8000rpm离心5min，弃上清(若沉淀颜色呈红色，请再重复洗涤一次)；

6.2.3 粪便等固体标本：挑取米粒大小粪便，放置于0.5mL生理盐水的离心管中，震荡混匀，13000rpm离心2min，弃上清；

6.2.4 液体标本：取适量标本13000rpm离心2min，弃上清。

6.3 DNA提取

6.3.1 对上述处理好的样本加入40uL核酸提取液，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；

6.3.2 DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。

 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

 

七、检测步骤：

7.1 试剂的准备

从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BA-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。

设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量

荧光PCR反应液 20µL N×20µL

酶混合液 1µL N×1µL

总量 21µL N×21µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(BA-PTC)4μL，10000rpm瞬时离心10秒。

7.2 qPCR反应条件

将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。

推荐循环条件:

预变性 1循环 94℃ for 2 min

PCR扩增 40循环 94℃ for 15 sec

55℃ for 30 sec

在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。

 

八、结果分析

8.1 结果分析条件设定

直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。

8.2 试验成立判定

（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。

（2） 阳性对照(BA-PTC)：均产生扩增曲线。

（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。

8.3 结果判定

（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明炭疽杆菌核酸阳性。

（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明炭疽杆菌核酸阴性。

（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。

（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行炭疽杆菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明炭疽杆菌核酸阳性；否则判为样本阴性。

 

九、注意事项：

（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。

（2） 所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。

（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。

（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。

（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

 

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DNA通常保存在什么缓冲液中？

采用TE缓冲液，Tris-HCl的缓冲系统，加入EDTA可以螯合二价金属离子进而抑制依赖于二价金属离子的DNA酶的活性，对DNA起到保护作用。

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编号	类别	名称
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