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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
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冷藏
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品,包括呼吸道合胞病毒荧光PCR检测试剂盒(RSV)北京价格在内的病毒PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品,欢迎选购。
名称:呼吸道合胞病毒荧光PCR检测试剂盒(RSV)北京价格
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
规格:48次/盒
编号:SYA171
想要了解更多关于呼吸道合胞病毒荧光PCR检测试剂盒(RSV)北京价格的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联*(代"系")。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:
·肺炎支原体单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA035
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·肠集聚性大肠杆菌(EAEC)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA094
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·博卡病毒(HBocaV)/偏肺病毒(HMPV)双重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA189
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子样品等临床样品中偏肺病毒/博卡病毒的特异性检测。适用于偏肺病毒/博卡病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供临床参考。
本试剂盒用一对偏肺病毒型特异性引物,一对博卡病毒型特异性引物,分别结合一条特异性荧光探针,用一步法双重荧光RT-PCR 技术对偏肺病毒/博卡病毒RNA 进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中偏肺病毒型的探针报告基团为FAM,博卡病毒型的探针报告基团为VIC/HEX/JOE。
试剂盒组成:
| 组份 | 数量 | 规格 |
| 偏肺病毒/博卡病毒反应液(HMPV/HBocaV-qRT-PCR MIX) | 1管 | 576μL/管 |
| qRT酶混合物(qRT Enzymes MIX) | 1管 | 192μL/管 |
| 无核酸酶水(Nuclease-Free Water) | 1管 | 500μL/管 |
| 阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
| 偏肺病毒/博卡病毒阳性对照(HMPV/HBocaV-PTC) | 1管 | 50μL/管 |
储存条件:-20℃以下,有效期6个月。
使用方法:
一、样品采集:
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
➤血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
➤血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
➤拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
➤病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
二、RNA提取:
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取4μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
三、检测步骤:
1.试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(HMPV/HBocaV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
| 试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
| 荧光PCR反应液 | 12µL | N×12µL |
| 酶混合物 | 4µL | N×4µL |
| 总量 | 16µL | N×16µL |
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm 离心10s,向设定的N 个PCR 反应管中分别加入16μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(HMPV/HBocaV-PTC)4μL,10000rpm 瞬时离心10 秒。
2.qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
| 反转录(Reverse Transcription) | 1循环 | 50℃ for 30 min | |
| 预变性 | 1循环 | 95℃ for 5 min | |
| PCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 10 sec 55℃ for 45 sec |
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM和VIC(若仪器无VIC通道,可选择HEX或JOE通道)。其中FAM基团检测HMPV,VIC/HEX/JOE基团检测HBocaV。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
四、结果分析:
1.结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2.试验成立判定
➤阴性对照(NTC):FAM和VIC/HEX/JOE通道均无扩增。
➤阳性对照(HMPV/HBocaV-PTC):FAM和VIC/HEX/JOE通道均有扩增。
➤以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效
3.结果判定
➤FAM通道:Ct值≤35HMPV核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明HMPV核酸阴性。
Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明HMPV核酸阳性;否则判为样本阴性。
➤VIC/HEX/JOE通道:Ct值≤35 HBocaV核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明HBocaV核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明HBocaV核酸阳性;否则判为样本阴性。
五、注意事项:
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA 酶。
➤PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等),防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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·麻疹病毒/风疹病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA250
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·滑液支原体(MS)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号:SYA547
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·肺炎克雷伯菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA037
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·炭疽芽胞杆菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA121
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·口蹄疫病毒(FMDV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA401
等级:科研实验专用
规格:48次/盒|96次/盒
一、简介:
口蹄疫病毒实时荧光qRT-PCR检测操作说明书是按照参照OIE《Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 2009》国际标准和《中国国家标准口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测方法》(GB22915-2008)而制备的商业化检测试剂盒。试剂盒的探针报告基团为6-FAM,能对样品中口蹄疫病毒进行快速检测,具有特异性高、敏感性强和操作简便的特点。
二、用途:
本试剂盒适用于检测发病动物血清、水泡液、淋巴结等标本以及细胞培养液中所有血清型(包括A、O、C、南非1、南非2、南非3和亚洲1型)口蹄疫病毒(FMDV)RNA;适用于口蹄疫病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供参考。
三、试剂盒组成:(40T/Kit)
组份 数量 规格
荧光qRT-PCR反应液(FMDV-qRT-PCR MIX) 1管 560μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 40μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1 管 50μL/管
阳性对照(FMDV-PTC) 1 管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-18℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
(1) 猪病料:剪取50-100mg猪病料,加入装有500 µl PBS或生理盐水的研钵中缓慢研成匀浆,取匀浆液转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20sec;取上清备用。
(2) 动物血清、水泡液、淋巴结等标本以及细胞培养液:取样本至无RNA酶污染的离心管中备用。
6.2 样品RNA提取
可按常规方法提取,也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
(1) 取灭菌的1.5 mL Eppendorf离心管,做好标识。
(2) 每管加入600 µL裂解液,分别加入被检样本200 µL,再加入200 µL*仿,混匀器上振荡混匀5 s,于4℃ 12000 r离心15 min。
(3) 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管,加入-20℃预冷400µL异丙醇,吸取步骤(2)各管中的上清液转移至相应的管中,避免吸出中间层,颠倒混匀。
(4) 于4℃ 12000 r离心15 min,弃上清,倒置于吸水纸上,沾干液体;加入600µL 75%预冷乙醇,洗涤。
(5) 于4℃ 12000 r离心10 min,弃上清,倒置于吸水纸上,沾干液体。
(6) 10000 r离心10 s,用微量加样器将其吸干,室温干燥5 min~10 min。
(7) 加入10µL 无核酸降解酶的水,溶解管底的RNA,5000 r离心5 s,冰上保存备用。若需长期保存须放置-70℃ 冰箱。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(FMDV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000r离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(FMDV-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 real time RT-PCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 5 min
预变性 1循环 94℃ for 30 sec
PCR扩增(PCR amplification ) 40循环 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(FMDV-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明FMDV核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明FMDV核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行FMDV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明FMDV核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
呼吸道合胞病毒荧光PCR检测试剂盒(RSV)北京价格关键词:呼吸道合胞病毒荧光PCR检测试剂盒,RSV,SYA171,呼吸道合胞病毒荧光PCR检测试剂盒(RSV),百奥莱博
·新城疫(NDV)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号:SYA516
等级:科研实验专用
规格:10次/盒|48次/盒
·大豆特异性基因Lectin单重凝胶PCR检测试剂盒
编号:SYA288
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·小反刍兽疫病毒(PPRV)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号:SYA575
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·猪细小病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA778
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介
本试剂盒用一对猪细小病毒特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对猪细小病毒核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、原理
该试剂盒适用于检测带毒猪血液、分泌物、排泄物以及肾、肺、肝、脑、睾丸、淋巴结和胎盘等组织标本中猪细小病毒(PPV)DNA,用于猪细小病毒(PPV)感染的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成(48T)
组份 数量 规格
荧光PCR反应液 1管 672μL/管
阴性对照 1管 50μL/管
阳性对照 1管 50μL/管
FD1试剂 1瓶 15mL/瓶
FD2试剂 1管 500μL/管
FD3试剂 1瓶 15mL/瓶
FD4试剂 1瓶 30mL/瓶
FD5试剂 2管 2mL/管
吸附柱及收集管 1包 48套/包
四、储存条件及有效期
荧光定量PCR试剂盒于-20℃以下保存,有效期为12个月;DNA提取试剂盒于常温保存,有效期为12个月。1.5mL离心管、移液器、吸头等请自备。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无DNA酶污染的离心管中备用。
6.1.4 病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.2 DNA提取
6.2.1 在上述样本中加入300μL FD1试剂和10μL FD2试剂,震荡混匀;
6.2.2 58℃孵育至完全裂解(样品不同而异,细菌、液体样本建议孵育15min,动物细胞、组织和粪便样本建议孵育15min-1h,样本裂解越完全,核酸提取效果越好);
6.2.3 12000 rpm离心5min,转移上清于一无菌离心管中;
6.2.4 在2.3的离心管中加入300ul FD3试剂,震荡混匀;
6.2.5 将全部溶液加入带膜吸附柱(收集管)中,12000 rpm离心1min,弃去流出液;
6.2.6 加入600ul的FD4试剂,12000 rpm离心1min,弃去流出液;
6.2.7 12000 rpm离心2min,去除残留液体;
6.2.8 将吸附柱放置于新的无核酸酶的1.5 mL离心管中,在膜中央加入20-50µL FD5试剂,室温静置1min,12000rpm离心1min,收集核酸溶液,-20℃保存,若长期保存需放置-80℃冰箱。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(PPV-qPCR MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性质控品(NTC)/阳性质控品(PPV-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(PPV-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明猪细小病毒核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明猪细小病毒核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行猪细小病毒qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明猪细小病毒核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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