耐热逆转录酶II厂家价格

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")耐热逆转录酶II厂家价格，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：耐热逆转录酶II厂家价格
产地：国产|进口
规格：2000U
编号：SY0294
品牌：百奥莱博
Reverse Transcriptase（第二代耐热逆转录酶）是Reverse Transcriptase（第一代耐热逆转录）的升级产品，是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上通过体外分子进化技术获得的全新耐热逆转录酶。与上一代相比，进一步大幅提高了热稳定性，50℃下半衰期超过240min，并长时间耐受55℃高温且保持稳定，非常适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。此外，增加了多个突变位点，进一步增强了模板亲和力和行进性，大幅提升全长cDNA的合成能力，可获得长达20 kb的cDNA。另外，对于常见的逆转录抑制物具有更高的耐受度，非常适合于植物组织RNA的逆转录反应。

活性定义：以Poly(rA) Oligo(dT)为模板/引物，在37℃，10min内，掺入1 nmol的dTTP为酸不性溶物质所需要酶量定义为1个活性单位（U）。

质量控制
核酸外切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在37 ºC下孵育1h，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37 ºC下孵育1h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：200 U本品和1 μg小鼠肝脏总RNA在37 ºC下孵育1h，RNA电泳谱带不发生变化。
功能检测1：逆转录体系中加入200 U本品，以100 pg Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23为引物，50 ºC反应30min。取10% cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的550 bp条带。
功能检测2：逆转录体系中加入200 U本品，以500 ng Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23为引物，55 ºC反应45min。取10% cDNA产物进行PCR扩增Polε基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的4.8 kb (GC-rich)条带。
功能检测3：逆转录体系中加入200 U本品，以1 pg-1 μg Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23VN和Random Hexamers为引物，测试qRT-PCR 性能。以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线，R2>0.990，斜率在-3.20到-3.60之间。

准备工作
1. 防止RNase污染：请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free。
2. 引物选择：
2.1 后续实验为PCR
a, 如果模板为真核生物来源，一般情况下首选Oligo dT18，与真核生物mRNA的3’Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
b, 基因特异性引物 (GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成。这时，可改用Oligo dT18或Random hexamers重新进行逆转录。
c, Random hexamers特异性最低，所有RNA，包括mRNA, rRNA, tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，使用Oligo dT18或基因特异性引物 (GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random hexamers为引物。
2.2 后续实验为qPCR
a, 将Oligo dT18与Random hexamers混合使用，可使mRNA的各个区域均能以相同效率引发cDNA合成，有助于提高定量结果的重复性。

除耐热逆转录酶II厂家价格外，我公司正在打折促销以下产品：

·碱性磷酸酶活性检测试剂盒
编号：SY0467
英文名称：Alkaline Phosphatase Activity Detection Kit
规格：100T
本品为碱性磷酸酶活性检测试剂盒，可快速、便捷地检测细胞或组织裂解液/匀浆液、血清、血浆、尿液、纯化酶等样品中的ALP活性。该试剂盒包括标准品和空白对照，可进行达100个样品的检测。

碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，简写为ALP或AKP），又称碱性磷酸酯酶，是一组同工酶，目前已发现六种ALP1-ALP6。广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织，是经肝脏向胆外排出的一种酶。碱性条件下可催化磷酸酯键的水解，从而将底物分子上的磷酸基团去除，转化为羟基。此类底物包括核酸（DNA、RNA）、蛋白、生物碱等。常见的有肠道碱性磷酸酶、非组织特异性碱性磷酸酶、胎盘碱性磷酸酶等；生物学中碱性磷酸酶（ALP）水平的变化及其活性的高低常被作为一种检测组织行为的指标，如：1）作为iPS成功诱导的标志；ALP在大多数细胞类型中均有表达，但是在iPS细胞内的表达水平明显升高；2）结肠癌细胞分化程度定性和定量的指标；3）血清中碱性磷酸酯酶的升高可导致高碱性磷酸酶血症，常被认为和恶性胆管阻塞，原发性硬化胆管炎，肝癌，肝硬化等肝胆疾病密切相关；4）血清中碱性磷酸酶活性升高还和骨骼损伤导致的骨生成，以及骨骼疾病如纤维骨炎、佝偻病、成骨不全等密切相关；5）碱性磷酸酶水平也会出现一些病理性降低的情况，多见于重症慢性肾炎、儿童甲状腺机能不全、贫血等。对于正常成人来说，血清内ALP的范围为40-150U/L。

对硝基*(代"*")磷酸（p-nitrophenyl phosphate, pNPP）是一种常用的磷酸酶显色底物，碱性条件下，可在ALP作用下生成对硝基*(代"*")酚（p-nitrophenol, pNP），后者在碱性环境下呈黄色产物，并在405nm处可检测到最大吸收峰。产物黄色越深，说明ALP活性越高，反之则活性越低。因此，通过检测OD405吸光值即可计算ALP活性水平。

产品规格：

 

ALP反应缓冲液 ALP Assay Buffer	15ml	-20℃
显色底物 pNPP Substrate	2管	-20℃避光
pNP标准品溶液p-nitrophenol Standard	100ul (10mM)	-20℃避光
反应终止液 Stop Solution	12ml	-20℃

储存条件：-20℃，有效期一年。

注意事项
1） 如果进行酶活力的绝对定量，进行酶反应时必须注意精确计时。此时推荐孵育30min等较长时间，以减小操作过程中的时间误差。如果样品中酶活性较高，则可以预先适当稀释样品。
2）样品溶液中须避免出现EDTA、*离子、柠檬酸盐等碱性磷酸酶抑制剂。
3）ALP反应缓冲液和p-nitrophenol标准品溶液对人体有害，请注意适当防护。反应终止液有腐蚀性，请小心操作。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 试剂准备
将所有试剂取出，恢复至室温使用。
1） 显色底物溶液：取一管显色底物，溶解于2.5ml的ALP反应缓冲液中，充分溶解和混匀，冰上放置。注意：新鲜配制的显色底物溶液需在数小时（≤ 6h）内使用。
2） 标准品工作液：取10μl p-nitrophenol标准品溶液(10mM)，用ALP反应缓冲液稀释至0.2ml，使得终浓度为0.5mM。

2．样品准备
1） 细胞或组织裂解液的准备：采用适当细胞或组织裂解液裂解细胞和组织，如果有必要需进行适当匀浆，随后离心取上清，用于ALP活性的检测。注意：裂解液中不能含有磷酸酶抑制剂。样品可以-80℃冻存，避免反复冻融。
2） 血浆、血清和尿液的准备：血浆和血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。注意：血浆制备不能用含EDTA和柠檬酸盐的抗凝管。尿液通常也可以直接用于测定。上述样品可以-80℃冻存，避免反复冻融。
3） 样品的稀释：若样品中含有较高活性的ALP，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，也可以采用试剂盒中的ALP反应缓冲液进行稀释。若使用上述反应缓冲液进行稀释，需保留足够的缓冲液用于试剂盒的检测过程。

3．加样
参考下表使用96孔板设置空白对照孔、标准品孔和样品孔。标准品的用量分别为4、8、16、24、32和 40μl，样品通常可以直接加50μl。如果样品中的碱性磷酸酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

表1 各组分加样数据表

	空白对照（Blank）	标准品（Standard）	样品（Sample）
ALP反应缓冲液	50μl	(100-x)μl	(50-y) μl
显色底物	50μl	－	50μl
样品	－	－	yμl
标准品工作液	－	xμl	－

4. 混匀：用枪头轻轻吹打混匀，也可借助摇床进行混匀。

5. 孵育：37℃孵育5-10min。（待测样品中ALP活性较低时，可适当延长孵育时间至30min）

6. 终止：每孔加入100μl反应终止液终止反应。此时，标准品或有ALP活性的孔会呈现不同深浅的黄色。

7. 检测：405nm测定吸光度。如果不能测定405nm，也可以在400-415nm范围内检测吸光度。如果不能立即测定，可以在数小时内完成测定，所显现的黄色在数小时（≤ 6h）内稳定。

8. 结果分析
碱性磷酸酶活性单位的定义：在pH9.8的二乙醇胺（diethanolamine, DEA）缓冲液中，37℃条件下，每分钟水解pNPP显色底物产生1μm p-nitrophenol所需的ALP量定义为一个酶活力单位，也被称作一个DEA酶活力单位。在pH9.6的甘*酸缓冲液中，25℃条件下，每分钟水解pNPP显色底物产生1μm p-nitrophenol所需的ALP量定义为一个酶活力单位，也被称作一个甘*酸酶活力单位。一个甘*酸酶活力单位约相当于3个DEA酶活力单位。本试剂盒测定的是DEA酶活力单位。

最后，根据酶活性单位的定义，计算出样品中的碱性磷酸酶活性。


耐热逆转录酶II厂家价格关键词：SY0294,耐热逆转录酶II,Reverse Transcriptase II

ARB10964 人免疫球蛋白A Fc段受体I(FcαRI/CD89)定量分析 Human receptor i for the fc region of immunoglobulin a,fcαri ELISA KIT
N-乙酰-L-色*酸 Acetoin 1218-34-4
两性霉素B溶液(10mg/ml) Amphotericin B 10mg/ml 5ml
BL0978 豚鼠外周血淋巴细胞分离液
硬脂酸乙酯 4-Nitroacetophenone 111-61-5
CYB168001 标准胎牛血清 100ml/瓶
邻菲啰啉盐*(代"酸")盐 EMS 3829-86-5
2,6-二*靛酚*盐 L-Valine 620-45-1
PY01-138  血粉蛋白胨  250克  
BTN81224 BCIP/NBT显色试剂盒 BCIP/NBT Chromogenic Kit
F020227 山羊抗人IgG抗体 Goat Anti-Human IgG
BTN60301 盐*(代"酸")四环素干粉 Tetracycline HCl Powder
NTE缓冲液(10×,pH7.4)   100ml
4-甲基七叶亭 Grease of high temperature Ⅲ 529-84-0
磺丁基-β-环糊精 D-(+)-Gluconic acid δ-lactone 25167-62-8
BTN130904 超级杂交液(Oligo探针) SuperHyb Solution for Oligo
SJ0172 DNA(Herring sperm) 鲱鱼精
ARB10648 人血管生长素(ANG)酶联免疫定量检测 Human angiogenin,ang ELISA KIT
ARB11971 大鼠c-Jun*基末端激酶(JNK)免费代测 Rat c-jun n-terminal kinases,jnk ELISA KIT
10034-99-8 Mangnesinm  Sulfte  硫*(代"酸")*七水
2x PCR Reagent 
ARB10532 人鸟*酸*基甲酰转移酶(OCT)elisa测定使用说明书 Human ornithine carbamoyl transferase,oct ELISA KIT
耐热逆转录酶II厂家价格关键词：SY0294,耐热逆转录酶II,Reverse Transcriptase II


·腔肠素cp
编号：SY0238
英文名称：Coelenterazine cp
规格：1×250μg
本品为粉末形式供应的腔肠素cp（Coelenterazine cp），是天然腔肠素的衍生物之一。 其与水母蛋白（Apoaequorin protein）形成的光蛋白复合物的发光强度是天然腔肠素的15倍，且具有更快的Ca2+反应速率。腔肠素cp可用于 G-蛋白偶联受体(GPCRs)药物的高通量筛选研究。

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷（ATP），因此更便于体内生物荧光的研究。因此，腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光，细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号，因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平。

腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET），利用此特性，当与荧光蛋白如GFP的突变体（增强的黄色荧光蛋白，EYFP）联合使用，在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量随之转移到EYFP上，发出绿光（~530nm）。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估，适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外，由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量，适用于高通量筛选如药物开发。

更为重要的一个功能，水母发光蛋白复合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）、分子氧和底物腔肠素组成。只有当*离子（Ca2+）与该复合物结合后，腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。正是此Ca2+依赖性的反应过程（见图1），使得腔肠素非常适用于监测活细胞内*离子水平。与常规的荧光*离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点：
1）能检测较大范围的*浓度 – 从0.1 μM至 >100μM。
2）样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光*离子指示剂；虽然信号比使用荧光*离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。
3）水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的*离子监测。



图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca2+依赖反应流程

目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素（Coelenterazine native），另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验，但是由于其发光波长，细胞膜渗透性，光量子效率上的差异，使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物。

CAS：123437-25-2
分子式：C25H25N3O3
分子量：415.48g/mol
溶解性：溶于甲醇或者乙醇，不可溶于DMSO
外观：黄色粉末
纯度：＞95%（TLC）
结构：



运输和保存方法：冰袋运输。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性气体下以避免接触空气。

注意事项
1）腔肠素cp粉末最好使用惰性气体-氮气或氩气，在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-70℃。管内即使有少量空气进入，也可能造成腔肠素cp氧化失活，使量化分析的结果难以在不同试验间进行比较。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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