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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
230
- 英文名:
SuperTOPO TA Cloning Kit
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
2~8℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应北京现货SuperTOPO-Kan TA克隆试剂盒特价优惠,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:北京现货SuperTOPO-Kan TA克隆试剂盒特价优惠
编号:BTN160686-25K
规格:25次
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
本试剂盒是基于Topoisomerase能够在几秒钟之内高速连接DNA片段的原理开发的无背景克隆试剂盒,它使用了本公司通过定点突变改良的TOPO酶,连接效率比野生型更高。
产品特点:
1.高效快速,连接反应几乎在几秒钟内完成,连接率几乎达到100%。
2.适用于具有A 尾巴的DNA片段使用。
3. 无杂带或引物二聚体的PCR扩增产物可以不经过纯化直接用于连接反应。
4.转化时只需要37℃,10分钟复苏即可涂盘,免去冰浴、热休克和复苏步骤。
5. 零背景,无需IPTG-X-Gal蓝白斑筛选,故不需要IPTG-X-Gal培养基。
6. 本试剂盒按10μL标准反应体系,有25次和50次两种规格包装供选择。
7. 提供含Amp和Kan两种抗性的载体供选择(BTN160686-25A是含Amp抗性TOPO载体,BTN160686-25K是含Kan抗性TOPO载体)。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| SuperTOPO-Amp载体 | 25μl(BTN160686-25A) |
| SuperTOPO-Kan载体 | 25μl(BTN160686-25K) |
| 连接缓冲液 | 25μl |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
注意:BTN160686-25A提供SuperTOPO-Amp载体,BTN160686-25K提供SuperTOPO-Kan载体。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. PCR扩增或酶切回收DNA插入片段。如果是PCR制备插入片段,所用引物不能磷酸化,使用Taq系列的DNA聚合酶。
2.电泳检测并相对定量PCR片段或酶切回收片段(跟DNA marker比较)。
并根据插入片段长度和下表确定每次连接反应需要的最佳用量:
| 插入片段长度 | 最佳用量 |
| 100-1000bp | 20-50ng |
| 1000-2000bp | 50-100ng |
| 2000-5000bp | 100-200ng |
3.在一个干净的塑料离心管中,室温下(不要放在冰上)设置如下连接反应体系:
| 成分 | 用量 |
| 纯化后的PCR产物 | 不超过8μl(详见注意事项) |
| SuperTOPO-Amp载体或 SuperTOPO-Kan载体 |
1μl |
| 连接缓冲液 | 1μl |
| 超纯水 | 补到10μL |
注意:如果使用未经纯化的PCR产物,则需要加入量不能超过1μL,否则PCR 体系会干扰连接体系。
4. 轻柔吹打混匀后,短暂离心,常温(20-30℃)放置0-5分钟。如果在冬天室温低于20℃,建议使用25℃水浴或金属浴。注意:连接时间超过5分钟的话连接效率会降低。
5. 如果当天不转化,可以将离心管放-20℃保存。如果转化,则取5μL连接液加到50-100μL刚刚融化的感受态细胞中,轻柔混匀。注意:本产品要求感受态细胞的转化效率不得低于5﹡10E7cfu/ug。
6. 如果片段长度小于2Kb,则不需要冰浴和热激,直接在离心管中加入500μL不含抗菌素的SOC或LB培养基,然后取200μL涂盘。也可以先3000g离心2分钟后,弃掉大部分上清,只留约100μl左右,然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-Amp)或Kan(对SuperTOPO-Kan)的培养皿上,37℃过夜培养。
7. 如果片段长度长于2Kb,则按常规转化方式,先冰浴2-30分钟,然后42℃热激30秒,冰上防放置2分钟,再在离心管中加入500μL不含抗菌素的SOC或LB培养基,37℃ 250rpm培养60分钟,然后取200μL涂盘。也可以先3000g离心2分钟后,弃掉大部分上清,只留约100μL左右,然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-Amp)或Kan(对SuperTOPO-Kan)的培养皿上,37℃过夜培养。
8. 用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。
除北京现货SuperTOPO-Kan TA克隆试剂盒特价优惠外,我公司正在打折促销以下产品:
·DNA marker(λDNA/HindIII)
编号:BTN90602A
英文名称:DNA ladder(λDNA/HindIII)
规格:50次
本系列产品为传统的酶切分子量标准,由单一的质粒DNA或噬菌体DNA经单个限制性内切酶完成消化后,加热灭活而成。每次上样总DNA含量已知,每条带的含量可根据其摩尔数的比值计算出来。本系列产品成分中已经含有上样缓冲液,所以可以直接上样电泳。得到的电泳条带长度准确,明亮清晰,背景较低,稳定性很好。
每次加样量为5μL,可用于相对定量。本系列产品与各种琼脂糖和各种电泳缓冲液兼容。
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
使用方法:直接上样电泳,每次加样量为5uL。
使用效果:
疑难解答:
a)如对带型要求较高,建议使用0.8-1.5%琼脂糖凝胶(对SuperBuffer-2缓冲液,电压为250-400V)或1.5-2.0%琼脂糖凝胶(对TAE或TBE缓冲液,电压为80V),同时适当延长电泳时间。
b)电泳图象的质量与琼脂糖、电泳缓冲液有关。请采用高质量的琼脂糖,同时要经常更换电泳缓冲液。
北京现货SuperTOPO-Kan TA克隆试剂盒特价优惠关键词:SuperTOPO TA Cloning Kit ,SuperTOPO-Kan TA克隆试剂盒,BTN160686-25K
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