北京现货BTN90407A型λDNA库存

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名称：北京现货BTN90407A型λDNA库存
品牌：百奥莱博
英文名：Lambda DNA
编号：BTN90407A
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA，是一种常见的DNA底物，分子量为31.5×106Da/48502bp，浓度为200～500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。

储存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

纯度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后，琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小时)后，在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。

关于北京现货BTN90407A型λDNA库存的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·亲和素
编号：BTN131085
英文名称：Avidin
规格：10mg
本产品为母鸡卵清糖蛋白冻干粉末，亲和纯化，脱盐处理。它结合能力为11-15μg生物素/mg亲和素，等电点10～10.5，在很宽的pH和温度范围稳定。

产品应用：
➤作为与生物素化的酶结合或用于标记酶的免疫分析试剂。
➤作为富含生物素组织切片的封闭蛋白(使用0.1%来抑制内源生物素)。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·DNA探针变性液
编号：BTN131208
英文名称：DNA Probe Denaturation Solution
规格：10mL
杂交反应进行时，探针和靶核酸都必须是单链的。如果用双链DNA探针进行杂交(包括检测RNA时)，双链DNA探针在杂交前必须进行变性。本产品就是即用型的DNA探针变性液，专门针对DNA探针在杂交前进行变性处理。

产品特点：
1. 即开即用。
2. 使用方便快捷，可用于核酸杂交。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

一、根据探针和靶分子的不同，分别按下面不同情况计算杂交分子的Tm 值
1. 对 DNA-DNA杂交，其Tm = 81.5 + 16.6×log10[Na+] + 0.41×GC%–500/L
说明：L是探针或靶分子的长度(用两者中最短的一个)
 GC%是探针或靶分子中的GC 百分比(用两者中最短的一个)
 Na+浓度是超级杂交液中Na+的浓度，为0.75 M，16.6×log10[Na+]=(-2.07)
2. 对 DNA-RNA杂交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高10-15℃。
3. 对 RNA-RNA杂交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高20-25℃。
4. 对 Oligo探针杂交，Tm=GC 数量×4℃+AT 数量×2℃。

二、确定最佳杂交温度(预杂交温度跟杂交温度应该一样)
1. 对于大于200bp的DNA-DNA杂交，最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃，一般选择68℃。
2. 对 RNA-RNA或DNA-RNA杂交，最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃。
 如果这样计算出的杂交温度很高(如高于70℃)，则RNA 容易降解，所以最好选用含甲酰胺的超级杂交液(超级杂交液B型)，以便能在42℃完成杂交。
3. 对 Oligo探针的杂交，最佳杂交温度一般比Tm低5℃。由于Oligo 较短，更容易受各种因素影响(如错配率、修饰碱基比例等)，所以最佳温度需要适度摸索和优化。

三、确定洗膜温度
一般使用0.1×SSC做洗膜液，在此条件下的最佳洗膜温度比Tm低5-12℃，一般情况下可以在55℃进行洗膜。Oligo探针可以室温洗膜。

四、预杂交步骤
 预杂交就是用不含探针的超级杂交液跟印迹膜进行孵育，其目的是用所含的非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物将印迹膜上会非特异地吸附探针分子的位点封闭，否则这些位点会吸附标记的探针，造成高背景。
1. 将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的6×SSC溶液中，使其充分湿润。
2. 将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋最好预先封口，再剪掉一角，留一个小口)，按每平方厘米印迹膜加0.2mL超级杂交液的比例沿小口加入超级杂交液，然后用塑料封口机将口封牢。
3. 将此塑料袋浸没入温度设定在最佳杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中，保温1-2小时，延长到12-16小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停的摇动状态中，使超级杂交液与印迹膜充分接触。

五、杂交步骤
1. 如果标记的探针是双链核酸，则需经变性处理。具体操作是：根据探针浓度和杂交所需探针的量计算出所需的探针体积，取出所需体积的探针到一干净的硅化的塑料离心管中，加入等体积的本产品，吹打混匀后室温放置5分钟变性后，将探针样品放入冰浴中冷却，加入0.05倍体积的自备的1 M的Tris-Cl溶液(pH7.2)以及等体积的自备的0.4 M的HCl溶液。
将探针样品保存在冰浴中直至需要。如果是单链DNA或RNA探针，则不需变性，直接使用。
2. 将单链探针或变性后的双链探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪刀剪一小口，加入探针后用热封机封口)。探针的加入量视探针标记效率而定，一般要求终浓度不能低于1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷贝基因，探针的加入量应加大，而对于检测克隆的基因片段，则探针的量可减少。如果是放射性探针，应将此塑料袋套在另一塑料袋之中，以避免杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
3.在选定的杂交温度下继续保温，时间一般为6-12小时。

六、洗膜步骤。
 注意在下面的所有操作过程中，一定不要使印迹膜干燥。此步是将与印迹膜非特异结合的探针分子洗去而只留下特异结合的探针分子。由于非特异性杂交的杂交分子解链温度较低，热稳定性较差，在一定的温度和较低的离子强度下，即可洗掉。
1.杂交完毕，取出塑料袋，剪去一角，倒出所有的含探针的杂交液。此含探针的杂交液可以多次使用再倒弃。
2. 剪开杂交袋，用镊子取出印迹膜，浸没于大量的2×SSC(含0.5 % SDS)溶液中，室温下振荡漂洗15分钟。
3. 重复上步操作一次。
4. 将印迹膜转移至0.1×SSC(含0.1% SDS)溶液中，在计算好的洗膜温度下振荡漂洗30分钟至1小时。
5. 重复上步操作一次。如果是同位素标记探针，则需要重复至用盖革计数器在无核酸区域检测不出放射信号为止。
6. 将印迹膜转移到滤纸上，吸去表面液体后印迹膜即可用于后续检测。


北京现货BTN90407A型λDNA库存关键词：λDNA,Lambda DNA,BTN90407A


·Dicer(RNase III)
编号：BTN130676
规格：200U
Dicer(RNase III)能在含有锰离子的反应缓冲液中，将较长双链RNA切割成一组由18-25bp组成的小片段干扰RNA(siRNA)，更适合用于哺乳动物细胞的RNA干扰实验。用1.5个单位(1μl)的Dicer(RNase III)能够将1μg的dsRNA完全切割成siRNA，其反应图如下：


产品特点：
1．为RNA干扰研究提供siRNA；
2．基因沉默；
3．靶标确认；
4．去除dsRNA；
5．无核酸内切酶和外切酶污染。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期两年。

活性定义：1单位指50μl的反应体系中，37℃条件下，20分钟将1μg dsRNA切割成siRNA所需要的酶量。


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D-甲硫*酸 DPC 348-67-4
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PY08-008  SS琼脂平板 9CM  10皿/盒，用于沙门氏菌和志贺氏菌的选择性分离培养
Gram碘液   100ml
BTN100838 遗传霉素(G418)干粉 G418 Sulfate(Geneticin)Powder
D-葡萄糖醛酸* Choline chloride 207300-70-7

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