北京现货一管式琼脂糖凝胶DNA回收试剂优惠价

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京现货一管式琼脂糖凝胶DNA回收试剂优惠价由老牌试剂供应北京百奥莱博供货并提供技术支持，本产品用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多一管式琼脂糖凝胶DNA回收试剂等核酸电泳和回收产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京现货一管式琼脂糖凝胶DNA回收试剂优惠价
编号：BTN60706
规格：30次
产地：国产|进口
本产品可以直接从溶化的琼脂糖凝胶中沉淀回收单双链DNA的产品，也堪称最快速的胶回收试剂,操作时间只有玻璃奶式和柱式胶回收方法的1/3左右。本产品也可以用于单双链RNA胶回收。

产品特点：
1.超快，整个过程不到15分钟(对一个样品而言)，由溶胶(3分钟)，放置(2分钟)，沉淀(5分钟)和两次洗涤(各1-2分钟)几步组成。
2. 纯度高，回收产物可以直接用于连接、酶切、PCR、测序等各种反应，不影响后续酶反应。
3. 回收率高，一般大于50%。
4.适用范围广，可用于回收普通琼脂糖凝胶能够分离的DNA片段(一般在100bp-50 Kb 之间)，而柱式同类产品几乎都不能回收50 Kb的超大片段。
5.一管式操作，不需要任何样品转移步骤，使大片段DNA 保持完整，同时减少了污染的可能。
6. 既可用于回收单双链DNA，又可用于回收单双链RNA。
7.扩容性好，可以在一个离心管中(包括15mL或50mL离心管)进行大规模回收，没有最大吸附量的限制；而柱式胶回收试剂都受最大吸附量的限制。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	9ml
溶液B	3ml
溶液C	30ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。
  溶液A呈淡黄色，溶液B呈红色，如果颜色发生变化，则表示pH已经改变，请弃之不用。溶液C为无色液体，会在瓶底产生少量晶体状产生沉淀，用前无需溶化，避开沉淀直接取上清液使用)。

使用方法：
1.从琼脂凝胶上切下目的DNA片段，放入1.5mL离心管中。尽可能多地去掉不含DNA的胶。如果方便最好称重以便估计需要的溶胶液(空的1.5mL离心管EP 约0.9 克，一片普通胶片的重量在0.05-0.1 克左右)。
2. 按0.1 克胶加300μL溶液A的比例加入溶液A，65℃保温3分钟使胶融化。其间可用摇晃几次以促进凝胶融化。如果放量使用，溶化胶的时间可能需要延长。
3. 待胶完全溶化后，按0.1 克胶加100μL溶液B的比例加入溶液B，充分混匀。如果回收20 Kb以上的DNA片段，混匀时需要温和震荡；对20 Kb以下的DNA片段，可以剧烈震荡。
4.室温静置至少2分钟，此时管内将出现大量红色颗粒状沉淀。此步十分关键，不能省略而直接离心。
5. 13000 g室温离心5分钟后，小心吸弃上清，管底将有黄豆大小的红色沉淀。
6. 加入0.8mL溶液C，充分震荡混匀。注意：溶液C瓶底有晶体状沉淀，用前无需溶解，但取用溶液C时需要避开沉淀。
7. 13000 g室温离心2分钟，小心吸弃上清，管底将有芝麻大小的白色沉淀。
8. 再用0.2mL溶液C重复第6-7 步一次，管底还有芝麻大小的白色沉淀。
9.小心吸弃上清后即得纯化的DNA沉淀，加入少量TE或水，充分吹打溶解。最后还会有少量白色不溶沉淀，属于正常现象。

疑难解答：
Q：电泳为何不能检测到回收的DNA？
A：最可能原因是各步加入溶液后没有充分震荡混匀，其次是沉淀在各步吸弃上清时候不小心吸走而丢失，三是溶液A和溶液B的pH发生改变。
Q：电泳时为何有残留荧光物在加样孔中？
A：可能是琼脂糖凝胶中的杂质吸附的DNA，吸取DNA样品时最好短暂离心，只取上清液。这些不溶杂质一般不影响后续反应。使用高纯度的琼脂糖可以减少杂杂质的污染。我们一般使用OXOID的琼脂糖，得到的DNA可以用于常见的分子生物学后续反应。

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·质谱兼容型蛋白银染试剂盒
编号：BTN100811
英文名称：MS-Comp*(代"a")tible Silver Stain for Protein
规格：10次
银染是目前检测PAGE电泳分离后的蛋白质的最灵敏的方法，MS(质谱)是确定未知蛋白最常用和最快捷的方法，但将银染得到的蛋白直接用于MS分析有很多问题，其中最主要问题是常规银染所使用的试剂(包括强氧化剂和醛类)容易使蛋白质发生化学修饰，这样MS分析得到的*基酸信息跟蛋白质实际的*基酸信息并不相同。为了使银染得到的蛋白质可以用于MS分析，为此本公司开发MS 兼容型银染试剂盒。

产品特点：
1．跟MS 兼容，原理是避免使用能化学修饰蛋白质的试剂，所得蛋白质没有发生化学修饰，故可直接用于后续的MS(包括MALDI-TOF-MS和ESI-MS)分析。
2．银染的灵敏度比考马斯亮蓝染色高100倍左右，可达0.2-0.6ng蛋白质/条带。
3．可用于各种PAGE胶，包括变性PAGE胶(如SDS-PAGE，尿素-PAGE)，非变性PAGE胶，IEF胶(等电电泳胶)，2D胶等。
4．四种溶液都是现用现配，实验结果的可重复性好。

产品组成：

成分	规格
溶液A组分一干粉	1份
溶液A组分一溶剂	100ml
溶液A组分二干粉	10份
溶液B干粉	5g
溶液C组分一干粉	10份
溶液C组分二	2ml
溶液D干粉	10份
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

准备工作：
所有溶液均需现配现用。以下按一块PAGE胶需要200mL溶液配制，用户可以根据自己PAGE胶的大小增减溶液的用量。
一、用自备试剂配制400mL固定液(按一次银染需要固定2次计算，每次固定需200mL固定液)
将160mL甲醇、40mL乙酸和200mL去离子水充分混合后即得400mL固定液。
二、配制200mL溶液A
先配制溶液A组分一储备液：将溶液A组分一干粉加入到100mL溶液A组分一溶剂中，充分摇晃溶解即得溶液A组分一储备液。此溶液可以4℃保存。将60mL甲醇、8mL溶液A组分一储备液、1 份溶液A组分二(干粉)和132mL 去离子水充分混合后即得200mL溶液A。
三、配制200mL溶液B
称0.5g溶液B干粉，溶于200mL 去离子水中，充分混合后即得200mL溶液B。
四、配制200mL溶液C
将1 份溶液C(干粉)溶解在200mL 去离子水中(干粉不容易溶解，需搅拌)即得溶液C。注意：使用前还需要再加入160μL溶液C组分二并充分混匀。
五、配制200mL溶液D
将1 份溶液D(干粉)溶解在200mL 去离子水中即得溶液D。

银染：
1．PAGE电泳(包括非变性PAGE，SDS-PAGE，尿素-PAGE，2D-PAGE，IEF-PAGE等)结束后，将PAGE胶转移到装有200mL 固定液的瓷盘或玻璃盘中，摇晃30分钟以去除干扰银染的组分(如甘*酸、SDS、尿素、DTT、甘油等)，倒掉固定液。注：此步很重要，否则银染背景很高。
2．重复上步一次。
3．将PAGE胶转移到200mL溶液A中，室温摇晃30分钟。
4．用200mL 去离子水漂洗3次，每次5分钟(不要延长或缩短)。
5．将PAGE胶转移到200mL的溶液B中，室温摇晃20分钟。
6．用200mL 去离子水漂洗2次，每次1分钟(不要延长或缩短)。
7．将PAGE胶转移到200mL的溶液C中，室温摇晃直到蛋白电泳条带显现(一般需要10分钟左右)。
8．将PAGE胶转移到200mL的溶液D中，室温摇晃终止反应。
9．用200mL 去离子水漂洗3次，每次5分钟(不要延长或缩短)。
10．切下条带或胶块进行后续的脱银，原位trypsin酶解，多肽沉淀和MS分析(略)。

技术资料：
MS前处理步骤(仅供参考)
1．脱银：将切下的银染斑点或条带用脱银液(30mM K3Fe(CN)3和100mM Na2S2O3的1：1的混合液)处理直到黑色消失。
2．还原：将胶块或胶条置于10mM DTT(溶剂为50mM NH4HCO3)，56℃处理一小时。
3．烷化：将胶块或胶条置于55mM 碘乙酰胺(溶剂为50mM NH4HCO3)，室温避光处理45分钟。
4．原位trypsin酶解：将胶块或胶条置于10 ng/uL 测序级别的trypsin溶液中(溶剂为25mM NH4HCO3)，37℃处理过夜。
5．多肽提取：用5%三*乙酸抽提酶解液，再用2.5%三*乙酸-50%ACN 混合液抽提酶解液，上清真空干燥，沉淀(多肽)最后溶于0.5%三*乙酸中。
6．MS分析：参考相关MS仪器使用手册。


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·消解酶干粉(溶细胞酶)(≥200U/mg)
编号：BTN100919
英文名称：Digestion enzyme,powder
规格：100mg
本品是从藤黄节杆菌(Arthrobacter luteus后改名为Oerskovia xanthineolytica)深层培养获得的酶干粉，它能有效的裂解活酵母细胞细胞壁。其主要成分是Alkaline Proteinase和β-1，3-葡聚糖昆布五糖水解酶(β-1，3-glucanlaminaripentaohydrolase)，前者负责破坏细胞壁的甘露糖蛋白层使后者能够进入细胞壁外层葡聚糖层并发挥作用。本产品主要用于真菌细胞核酸和蛋白质制备、原生质球形成及葡聚糖水解。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·水样病毒沉淀剂
编号：BTN101118
英文名称：Water Sample Virus Precipitation Reagent
规格：10次
本品是从藤黄节杆菌(Arthrobacter luteus后改名为Oerskovia xanthineolytica)深层培养获得的酶干粉，它能有效的裂解活酵母细胞细胞壁。其主要成分是Alkaline Proteinase和β-1，3-葡聚糖昆布五糖水解酶(β-1，3-glucanlaminaripentaohydrolase)，前者负责破坏细胞壁的甘露糖蛋白层使后者能够进入细胞壁外层葡聚糖层并发挥作用。本产品主要用于真菌细胞核酸和蛋白质制备、原生质球形成及葡聚糖水解。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·非变性法蛋白沉淀试剂盒
编号：BTN81029
英文名称：Non-Denaturing Protein Precipitation Kit
规格：10次
本产品是基于蛋白质盐析和透析原理开发的非变性蛋白质浓缩产品。其原理是将大量具有很强水化能力的硫*(代"酸")铵加到蛋白质溶液中，夺取蛋白质分子的水化层(尤其是蛋白质表面非极性区的水化层)，使之“失水”，于是蛋白质分子间的非极性基团将互相结合，使蛋白质形成沉淀，离心分离沉淀后，再用透析方法将蛋白质中的盐除去，即得浓缩的蛋白质。

产品特点：
1.适合于浓缩各种蛋白质粗提液，一次可以处理50mL蛋白质溶液。
2. 非变性法，不会破坏蛋白质的天然结构和活性，尤其是适用于对变性敏感的酶溶液。
3. 得到的蛋白质结构稳定，适合于长期保存。
4.可以在透析是进行缓冲液的调换。
5.一站式，带有盐析和透析所需的物品。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml×10
无菌水	50ml
EDTA溶液(0.5M)	0.5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
注意：除对温度敏感的蛋白质样品需在4℃环境下(如冷室)操作外，一般可在室温中操作，操作者整个操作须戴好手套。

盐析沉淀
1．测量待浓缩蛋白质样品的体积，并将其转移到容积至少是样品体积两到三倍的无菌烧杯或玻璃三角瓶中。注意：需要处理的蛋白质样品最好溶解在pH为中性的缓冲液中(如50mM的Tris-HCl)，浓度最好在1mg/mL以上。
2．将一个无菌的磁力搅拌子放入三角瓶中，再将三角瓶放置在磁力搅拌器上，打开开关后缓慢搅拌。注意：搅拌过程中不能产生泡沫。
3．如果待浓缩蛋白容易被金属离子失活或抑制，则最好加入EDTA溶液，使其终浓度为10mM，否则此步可省略。
4．根据所需硫*(代"酸")铵的饱和度计算需要加入的溶液A的体积，溶液A的硫*(代"酸")铵饱和度是100%。一般50%的硫*(代"酸")铵饱和度就可以沉淀绝大部分蛋白，超过此饱和度溶液比重很大，难以通过离心收集蛋白质沉淀。
5．小心缓慢加入所需的溶液A(用前需要摇匀)。注意：最好每次少量加入，切莫一下倒入，否则蛋白质容易变性。混合过程中，蛋白质沉淀可能会使溶液呈牛奶状，属于正常现象。
6．将所需溶液A全部加入后，冰上放置60分钟或过夜让蛋白质充分沉淀。
 注意：血红蛋白、肌红蛋白和清蛋白等在较高的温度25℃比在0℃度时溶解度低，更容易盐析，所以浓缩这些样品时冰浴放置可以改为室温放置。有的蛋白质15-20分钟就可以完全沉淀，有的则需要数小时。
7．将溶液轻移到旋盖塑料离心管或离心瓶中，在平衡条件下15000×g 4℃离心15分钟。
 注意：溶液比重很大，一定要重量上平衡而非体积平衡。
8．小心弃上清，得到蛋白质沉淀。此沉淀可以在4℃放置数月。
9．将尽可能少的无菌水或其他缓冲液加入蛋白质沉淀中使之溶解，所加体积一般是沉淀物体积的1-2倍。如果沉淀溶解后非常粘稠，可以适当补加无菌水使其变得不粘稠。此沉淀可以在4℃放置几天。
10．如果溶液中有不溶物(主要是变性的蛋白质)，可以15000×g 4℃离心15分钟，留上清。
11．上清液可以用于SDS-PAGE电泳检测或UV法蛋白质浓度测定。
12．如果后续纯化方法是疏水层析或排阻层析，则不需要将溶液中残留的盐去掉，可以直接使用。如果后续纯化是离子交换层析，则需要将溶液中残留的盐去掉，一般采用透析法，具体操作见附一。

附一：透析脱盐
1．将蛋白溶液转移到一端已经封口的透析袋内，预留一些液体膨胀的空间，然后将另一端封口。注意：用户需要预处理透析袋，预处理的方法是将透析袋在含2%(W/V)碳酸**和1mM EDTA的溶液中煮沸10分钟，用蒸馏水彻底清洗透析袋，然后放在1mM EDTA的溶液中煮沸10分钟并浸没在此溶液中冷却，最后放4℃保存待用。取用时必须要戴手套。
2．将透析袋放置在装有透析液的容器中，透析液的体积必须是蛋白质溶液的20-100倍，溶液最好处于搅拌状态。用户可以用适合后续实验的任何缓冲液作为透析液。每次透析3-4小时，共透析2-3次。可以用自备的*氏试剂检测透析袋外面溶液是否还有残留的铵离子来检测透析是否完成。
3．将透析后的溶液全部转移到离心管中，15000×g 4℃离心15分钟，上清液即为浓缩后的蛋白溶液。可以放-80℃冰箱保存或立即用于后续的实验。
4．如果需要快速测定蛋白质的浓度，可取少许样品作适当倍数稀释后，用紫外分光光计测280nm和260nm的光吸收，再计算其浓度，计算公式为：蛋白浓度(mg/mL)＝(1.45×OD280-0.74×OD260)×样品稀释度。

附二：多克隆抗体的浓缩
1．将待处理的血清样品在4℃或室温20000×g离心30分钟，收集上清。
2．取上清20mL与等体积的自备生理盐水混合后，于搅拌下缓慢滴加40mL溶液A。
 注：加等量生理盐水的目的是将蛋白质含量降低到2.5-3.0%，否则其他蛋白质会跟抗体一起共沉淀。
3．冰上放置30分钟以上或过夜，使蛋白质充分沉淀。
4．将溶液转移到旋盖塑料离心管中，15000×g 4℃离心10分钟，弃上清。
5．用12mL自备生理盐水溶解蛋白质沉淀。
6．于搅拌下缓慢滴加8mL溶液A，冰上放置1小时使蛋白充分沉淀。
7．将溶液转移到旋盖塑料离心管中，15000×g 4℃离心10分钟，弃上清。
8．用13.3mL 生理盐水溶解蛋白质沉淀。
9．于搅拌下缓慢滴加6.6mL溶液A，冰上放置1小时使蛋白充分沉淀。
10．将溶液轻移到旋盖塑料离心管中，15000×g 4℃离心10分钟，弃上清。
11．用少许生理盐水溶解蛋白质沉淀，并转移到透析袋中。
12．用大于20-100倍体积的PBS 于4℃对蛋白质溶液进行透析，更换透析液数次，然后让蛋白质溶液置-80℃保存或用其他方法进一步纯化。


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·大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞
编号：BTN140576
英文名称：E.coli DH10Bac Chemical Competent Cell
规格：0.1mL*10
 本产品是采用特殊工艺处理得到的大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞，适用于昆虫杆状病毒Bac-to-Bac 系统中同源重组的菌株，用于产生重组Bacmid。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达107CFU/μg。
 DH10Bac细胞包含亲本Bacmid bMON14272和辅助质粒 pMON7124。亲本Bacmid 包含一个mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和lac Zα-互补因子。
 辅助质粒包含tns ABCD 区域，该区域提供了mini-Tn7从供体质粒插入亲本Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如pFastBac 系列质粒(pFastBac1，pFastBacDual等)含有Tn7R和Tn7L 同源重组臂，Tn7R和Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、多克隆位点和SV40 病毒的PolyA 加尾信号。当含有靶基因pFastBac的重组质粒转化到DH10Bac细胞后，发生重组后就可产生重组Bacmid，提取纯化重组Bacmid转染昆虫细胞Sf9或Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外，DH10Bac细胞中的The φ80dlacZDM15基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象，用于重组bacmid的蓝白斑筛选。
 菌株基因型为：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG/pMON14272/pMON7124。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，避免反复冻融，有效期半年。

自备试剂：重组质粒、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 制备含有如下抗生素的LB 固体平板：50 μ g/mL Kanamycin，7 μ g/mL gentamicin，10μg/mL tetracycline，100μg/mL X-gal，40μg/mL IPTG。
2. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
3. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入1-10 ng 重组质粒，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
4. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
5. 每个离心管中加入900μl 无菌的SOC(不含抗生素)，混匀后置于37℃ 摇床，200rpm 振荡培养4小时。
6. 用 SOC培养基进行10倍梯度稀释，如分成3个稀释梯度10-1,10-2,10-3。
7. 取 100μl的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，37℃培养24-48小时。
8. 保留剩余的菌液保存于4℃，视平板上菌落生长情况决定去留。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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