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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
503
- 英文名:
One-tube DNA agarose gel recovery reagent
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温运输,4℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货一管式琼脂糖凝胶DNA回收试剂怎么卖,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货一管式琼脂糖凝胶DNA回收试剂怎么卖
英文名:One-tube DNA agarose gel recovery reagent
编号:BTN60706
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
规格:30次
本产品可以直接从溶化的琼脂糖凝胶中沉淀回收单双链DNA的产品,也堪称最快速的胶回收试剂,操作时间只有玻璃奶式和柱式胶回收方法的1/3左右。本产品也可以用于单双链RNA胶回收。
产品特点:
1.超快,整个过程不到15分钟(对一个样品而言),由溶胶(3分钟),放置(2分钟),沉淀(5分钟)和两次洗涤(各1-2分钟)几步组成。
2. 纯度高,回收产物可以直接用于连接、酶切、PCR、测序等各种反应,不影响后续酶反应。
3. 回收率高,一般大于50%。
4.适用范围广,可用于回收普通琼脂糖凝胶能够分离的DNA片段(一般在100bp-50 Kb 之间),而柱式同类产品几乎都不能回收50 Kb的超大片段。
5.一管式操作,不需要任何样品转移步骤,使大片段DNA 保持完整,同时减少了污染的可能。
6. 既可用于回收单双链DNA,又可用于回收单双链RNA。
7.扩容性好,可以在一个离心管中(包括15mL或50mL离心管)进行大规模回收,没有最大吸附量的限制;而柱式胶回收试剂都受最大吸附量的限制。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 9ml |
| 溶液B | 3ml |
| 溶液C | 30ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
溶液A呈淡黄色,溶液B呈红色,如果颜色发生变化,则表示pH已经改变,请弃之不用。溶液C为无色液体,会在瓶底产生少量晶体状产生沉淀,用前无需溶化,避开沉淀直接取上清液使用)。
使用方法:
1.从琼脂凝胶上切下目的DNA片段,放入1.5mL离心管中。尽可能多地去掉不含DNA的胶。如果方便最好称重以便估计需要的溶胶液(空的1.5mL离心管EP 约0.9 克,一片普通胶片的重量在0.05-0.1 克左右)。
2. 按0.1 克胶加300μL溶液A的比例加入溶液A,65℃保温3分钟使胶融化。其间可用摇晃几次以促进凝胶融化。如果放量使用,溶化胶的时间可能需要延长。
3. 待胶完全溶化后,按0.1 克胶加100μL溶液B的比例加入溶液B,充分混匀。如果回收20 Kb以上的DNA片段,混匀时需要温和震荡;对20 Kb以下的DNA片段,可以剧烈震荡。
4.室温静置至少2分钟,此时管内将出现大量红色颗粒状沉淀。此步十分关键,不能省略而直接离心。
5. 13000 g室温离心5分钟后,小心吸弃上清,管底将有黄豆大小的红色沉淀。
6. 加入0.8mL溶液C,充分震荡混匀。注意:溶液C瓶底有晶体状沉淀,用前无需溶解,但取用溶液C时需要避开沉淀。
7. 13000 g室温离心2分钟,小心吸弃上清,管底将有芝麻大小的白色沉淀。
8. 再用0.2mL溶液C重复第6-7 步一次,管底还有芝麻大小的白色沉淀。
9.小心吸弃上清后即得纯化的DNA沉淀,加入少量TE或水,充分吹打溶解。最后还会有少量白色不溶沉淀,属于正常现象。
疑难解答:
Q:电泳为何不能检测到回收的DNA?
A:最可能原因是各步加入溶液后没有充分震荡混匀,其次是沉淀在各步吸弃上清时候不小心吸走而丢失,三是溶液A和溶液B的pH发生改变。
Q:电泳时为何有残留荧光物在加样孔中?
A:可能是琼脂糖凝胶中的杂质吸附的DNA,吸取DNA样品时最好短暂离心,只取上清液。这些不溶杂质一般不影响后续反应。使用高纯度的琼脂糖可以减少杂杂质的污染。我们一般使用OXOID的琼脂糖,得到的DNA可以用于常见的分子生物学后续反应。
北京现货一管式琼脂糖凝胶DNA回收试剂怎么卖极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·动物细胞裂解液B(变性)
编号:BTN80807B
英文名称:Animal Cell Lysis Solution(B)
规格:100mL
本产品含有多种细胞裂解成分和蛋白酶抑制成分,可以在非变性或变性条件下迅速裂解组织或培养细胞,使之释放出细胞内蛋白,用于后续实验。
产品特点:
1.快速裂解,多种裂解成分经过精心优化,能快速使细胞裂解。
2. 非变性(BTN80807A)产品能最大程度地保留蛋白天然结构和功能,主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀,还可以用于蛋白活性检测(信号传递研究和酶动力学检测)和Western Blot等各种后续实验。
3.变性(BTN80807B)裂解细胞的效率更高,主要用于对抗原空间构型不敏感的免疫共沉淀实验,还可以用于Western Blotting。
4.适用于培养细胞(包括悬浮细胞)和新鲜组织。
储存条件:常温运输、4℃保存,有效期一年。
注意事项:
1. 如果在本产品中额外再加入终浓度为1×的、新鲜配制的蛋白酶抑制剂复合物,可以更有效地抑制蛋白酶活性,防止蛋白降解。
2. 如果用于信号传递研究,最好在本产品中加入终浓度为1×的、新鲜配制的磷酸酶抑制剂复合物。
3. 整个裂解步骤都要在冰浴或4℃操作。本产品和PBS 均需预先冷却。
4. 本产品所含有较高浓度的去垢剂会对Bradford蛋白浓度测定有较大影响,因此只能使用BCA法测定蛋白浓度。
使用方法:
一:处理贴壁的培养细胞
1. 去除贴壁细胞培养液,用冰浴预冷的PBS 洗两遍,去尽残留的PBS。
2. 将培养板放置在冰上待用。
3. 按每106个细胞加入0.1mL 本产品(或100mm 贴壁细胞加1mL 本产品)的比例向培养板中加入适量的本产品(按此比例裂解得到的裂解物的蛋白浓度约在5-10mg/mL 之间)。
注意:裂解效率跟细胞数量和本产品用量的比例密切相关。一般情况下6孔板的单孔(1~2×106细胞)需要0.1~0.2mL本产品;25 cm2培养瓶(3~6×106细胞)需要0.3~0.6mL;75 cm2培养瓶(1~2×107细胞)需要1~2mL。对于特别大或特别小的细胞,需要用户摸索最佳用量。
4. 冰上放置10-30分钟(最佳时间跟细胞系相关),其间偶尔轻轻摇晃或用枪头轻轻吹打。
5. 将细胞培养板倾斜使上清液汇集在一端,并将其全部转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。
6. 15000×g,4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中,放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,最好新鲜使用。
7. 用前最好先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
二:处理悬浮细胞
1. 400×g,4℃离心10分钟收集悬浮细胞,弃上清。
2. 用等体积的预冷PBS 洗涤细胞沉淀两遍,步骤同第一步。
3. 按每106个细胞加入0.1mL 本产品的比例加入本产品,充分悬浮细胞。
4. 冰上放置15分钟裂解细胞,期间偶尔轻柔震荡。
5. 15000×g,4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。为避免吸取到细胞沉淀,最好留20-40μL液体不取。
6. 将上清液放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,最好新鲜使用。
7. 使用前最好先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
三:处理组织块
1. 称量组织块,用毛玻片或玻璃匀浆器研磨或匀浆,用5-10倍体积的、预冷的PBS洗两次(包括冲洗器材)。
2. 将匀浆物转移到离心管中,1500g、4℃离心5分钟后弃上清。
3. 按每50mg 组织加入0.2mL 本产品的比例加入预冷的本产品,吹打混匀,放置冰上。
4. 每隔5分钟振荡器轻柔振荡一次,共4次。
5. 15000×g、4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中,放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,最好新鲜使用。
6. 使用前最好先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
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·Southern封堵液(NC专用)
编号:BTN120676
英文名称:Southern Blocking Buffer (NC)
规格:100mL
本产品为专门针对NC膜的核酸杂交封堵液,用于降低检测时的非特异性信号,降低背景,增强信噪比。经过反复优化配方,即开即用,方便快捷。
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
·dNTP溶液(100mM)
编号:BTN51208C
英文名称:dNTP Solution,100mM
规格:0.5mL
本产品是dATP、dTTP、dGTP、dCTP四种核苷酸的混合液,每种核苷酸的浓度为100mM,纯度在98%以上(HPLC检测),不含DNA内切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染,可以直接用于PCR、RT-PCR、cDNA合成、DNA测序、DNA探针标记等反应。使用浓度根据具体的反应决定,请参考相关手册。
储存条件:低温运输和-20℃保存、有效期一年。
DNA为何使用2"-脱氧核糖和胸腺嘧啶?
DNA为何不选择现成的光合作用产物核糖和合成RNA的原料尿嘧啶(uracil)分别作为其糖分子和碱基,而去选择需要额外的合成步骤才能得到的2"-脱氧核糖和胸腺嘧啶(thymine),其原因何在呢?目前的主流观点是:DNA不能选择核糖的原因之一是由于核糖2"位置上的OH基团会使得到的双螺旋骨架结构不均匀、不平行,难以有效地折叠进染色体结构中,而使用2"-脱氧核糖则能得到均匀平行的双螺旋结构;原因之二是核糖2"位置上的OH基团会对邻近的磷酸二酯键进行分子内亲核攻击,降低分子的稳定性,而对遗传物质来说稳定性十分重要,所以DNA选择了失去分子内亲核攻击能力的2"-脱氧核糖。对信使分子而言,稳定性并不重要,所以RNA仍然使用核糖。
DNA使用胸腺嘧啶的原因是DNA中的胞嘧啶(cytosine)会缓慢水解变成尿嘧啶,如果尿嘧啶也是DNA的正常组成成份,则DNA修复系统就不能区分哪些尿嘧啶是正常的,哪些是需要修复的。使用胸腺嘧啶(比尿嘧啶分子多一个甲基)不但能保持跟尿嘧啶一样的形成碱基对的能力,同时又能跟尿嘧啶区别开来,使DNA分子中出现的任何尿嘧啶都能被尿嘧啶DNA糖苷酶(uracil-DNA glycosylase)发现和修复。
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