- ¥150 - 2300
- 百奥莱博
- 北京
- WE0169-ETA
- 2025年07月06日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温(15～30℃)
- 保质期：
长期
- 英文名：
Gel DNA Extraction Micro Kit
- 库存：
306
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")微量凝胶DNA回收试剂盒品牌，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。
名称：微量凝胶DNA回收试剂盒品牌
规格：50次
英文名：Gel DNA Extraction Micro Kit
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：WE0169
本试剂盒专用于从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化微量DNA片段，溶胶速度快，并利用硅基质膜技术，以非常小的终洗脱体积(可少至10μl)，从琼脂糖凝胶中，快速纯化50 bp-50 kb的DNA片段，纯化过程有效去除引物、寡核苷酸、酶等杂质，从而可获得高纯度、高浓度，完整性好的DNA，回收率高达90%。本试剂盒回收纯化的DNA可直接用于测序、连接和转化、酶切、标记、体外转录等分子生物学实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 50次 |
| Buffer PG | 25ml |
| Buffer PS | 15ml |
| Buffer PW(浓缩) | 10ml |
| Buffer EB | 10ml |
| 离心吸附柱DE及收集管 | 50套 |
自备试剂：无水乙醇，异丙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
3、使用前请检查Buffer PG如果出现结晶或者沉淀，可在37℃水浴中放置3-5分钟，即可恢复澄清。
4、电泳时最好使用新的电泳缓冲液，避免影响电泳和回收效果。
5、切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
6、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少，洗脱体积越少，回收率越低。
7、将水浴锅预热至50℃。
8、Buffer PG中含有pH指示剂，当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色，此时DNA才能够有效的与膜结合，当pH值偏高时溶液的颜色变为桔红色和紫色，需要进行调整。
操作步骤：
1、将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)，放入干净的离心管(自备)中，称量计算凝胶重量(提前记录离心管重量)。
注意：若胶块的体积过大，可将胶块切成碎块。
2、向胶块中加入1倍体积Buffer PG(如凝胶重为100 mg，其体积可视为100μl，依此类推)。
3、50℃水浴温育，其间每隔2-3分钟温和地上下颠倒离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟直至胶块完全溶解。
注意：
1)凝胶完全融解后胶溶液为黄色，可进行后续操作；若胶溶液为桔红色或紫色，可向胶溶液中加10-30μl 的3 M醋酸*(pH5.0)，将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作。
2)胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。
4、(可选步骤)当回收片段<300 bp时，应加入1/2胶体积的异丙醇，上下颠倒混匀(如凝胶重100 mg，则加入50μl的异丙醇)。
5、柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱DE中加入200μl Buffer PS，13000rpm(~～～16200×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、将步骤3或4所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
7、向吸附柱中加入450μl Buffer PW(使用前先检查是否已加入无水乙醇)，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如果纯化的DNA用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序)，建议加入Buffer PW静置2-5分钟再离心。
8、重复步骤7。
9、13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇的残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱放到一个新的1.5ml离心管(自备)中，向吸附膜中间位置悬空滴加10-50μlBuffer EB，室温放置2分钟。13000rpm离心1分钟收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意：
1)为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟。
2)回收大于10 kb的DNA片段时，Buffer EB应在50℃水浴中预热，可增加回收效率。
储存条件：室温(15～30℃)。
我公司的微量凝胶DNA回收试剂盒品牌，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
·高效多重PCR Mix
编号：WE0124
英文名称：Super Multiplex PCR Mix
规格：1ml|5ml
本品是由SuperStar DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂等组成的预混体系，专用于多重PCR扩增。本品所含的 SuperStar DNA Polymerase是全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，可有效减少PCR反应初期因引物错配而产生的非特异性扩增。独特的缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，扩增范围更广泛。本产品适用于各种类型的多重PCR反应，比如微卫星分析、基因分型和SNP检测等。
产品组成：
| 组份 | 1ml | 5ml |
| 2×Super Multiplex PCR Mix | 1ml | 5×1ml |
| ddH2O | 1ml | 5×1ml |
注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 |
| 2×Super Multiplex PCR Mix | 25μl |
| Primer Pool | 0.1-0.3μM |
| DNA or cfDNA | 5ng-100ng |
| ddH2O | up to 50μl |
注意：引物浓度请以终浓度0.1-0.3μM作为设定范围的参考。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 2 min | |
| 变性 | 98℃ | 20 s | 30-40个循环 |
| 退火延伸 | 65℃ | 90 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件：-20℃，避免反复冻融。
微量凝胶DNA回收试剂盒品牌关键词：Gel DNA Extraction Micro Kit,微量凝胶DNA回收试剂盒,WE0169
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微量凝胶DNA回收试剂盒品牌关键词：Gel DNA Extraction Micro Kit,微量凝胶DNA回收试剂盒,WE0169
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文献和实验【交流】阳性克隆筛选方法汇总——基于ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9基因敲除方法
或者Genloci的微量样品的抽提试剂盒。QIAGEN是老品牌，Genloci这家公司是主要做基因重组的，所以，他们开发的一些产品针对性比较强，而且价格便宜，建议优先使用。 3、 设计合理的引物和选用高保真的Taq酶 引物设计推荐选择靠近靶位点上游100bp和下游200bp处，或者上游200bp和下游100bp处，这样的好处是后面进行酶切分析的时候，对于阳性的克隆，可以很容易观察到2条分开的条带。 Taq酶，建议是用NEB的Fusion或者Q5，毕竟敲除本身很大可能也就是2-3个碱基的缺失，所以，高
组DNA的试剂盒。 这样的试剂盒，市面上也比较多，但是需要注意选择针对样品量比较少的试剂盒，建议选择QIAGEN或者Genloci的微量样品的抽提试剂盒。QIAGEN是老品牌，Genloci这家公司是主要做基因重组的，所以，他们开发的一些产品针对性比较强，而且价格便宜，建议优先使用。 3、设计合理的引物和选用高保真的Taq酶； 引物设计推荐选择靠近靶位点上游100bp和下游200bp处，或者上游200bp和下游100bp处，这样的好处是后面进行酶切分析的时候，对于阳性
系列，但是无论借助何种方式，最基本的评定标准均包括:回收产物质量：主要指纯度。常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。对于大片断DNA回收，质量还包括产物的完整性；而对于较小片断回收，质量还包括回收产物的浓度；此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。回收率：由于上电泳样品量通常都很少，电泳过程本身也会导致样品的分散和损失，因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的
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