双链DNA(dsDNA)定量试剂大量库存促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖双链DNA(dsDNA)定量试剂大量库存促销在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：双链DNA(dsDNA)定量试剂大量库存促销
编号：SY0259
规格：100μl
品牌：百奥莱博
英文名：Picogreen dsDNA Quantitation Reagent
产地：国产|进口
Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料，常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建，DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义。疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。

常用的检测核酸的方法有:
1）紫外吸光法（A260），该法操作简便，但DNA样品中核苷酸、单链DNA、RNA和蛋白质对紫外吸收信号影响很大，还容易受到核酸样品中污染物的干扰，不能区分DNA和RNA，而且灵敏度低（ΔA260=0.1相当于5ug/ml的dsDNA）；
2）探针杂交法，该法是传统检测微量DNA的常用方法，基本能满足目前疫苗和治疗性生物制品的检测需求，但是该法耗时较长，操作繁琐，稳定性、敏感性和特异性较差；
3）Hoechst33258染料法，Hoechst33258是一种一定程度上特异于双链DNA的核酸染料，基本不受蛋白质的干扰，可以检测低至10ng/ml的DNA；在检测稳定性和灵敏度上仍达不到理想效果。

Picogreen dsDNA定量法：Picogreen仅在与DNA双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与DNA浓度呈正比，在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下，可以选择性地检测低至25pg/ml的dsDNA。该分析在三个数量级范围内呈线性，且几乎无序列依赖性，可以精确地测量多个来源的DNA，包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物。

相比传统的方法，Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势：
①灵敏度高：数量级较UV吸光读数更敏感，可节省宝贵的样品；
②特异性强：在等摩尔的RNA存在的条件下，对dsDNA具有特异性；
③耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、*仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。
④易于使用——只需在样品中加入染料，等待5分钟，然后读数即可，且适用于96和384孔板；与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。
⑤适用范围广：可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。

若每次分析体积为2 mL，1ml Picogreen定量试剂足够200次分析使用，若使用微孔板或96孔板检测，每次使用量200µl，则足够2000次分析。另外，我公司提供【双链DNA（dsDNA）定量检测试剂盒】方便客户选用。

储存条件：4℃避光干燥，有效期6个月。

注意事项
1）Picogreen定量试剂含有DMSO（已知有毒试剂），请小心操作；
2）尽管目前尚未有数据表明Picogreen具有诱变性和毒性，但是该试剂能结合双链DNA，请操作时务必小心。

应用实例
【注】：本方法参照2010《中国药典》进行操作的，如结果要求不是特别严格，可参照Yeasen 【双链DNA（dsDNA）定量检测试剂盒（Cat#10225）】的标曲制备方法。

1、染料工作液的配置

PicoGreen dsDNA定量试剂取出后回温至室温，该试剂是以1mL的浓缩液形式保存于无水DMSO中的。实验当天，根据实验用量用1×TE（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH7.5）按1:200 的比例稀释PicoGreen浓缩液。如，要准备足够的操作溶液测定20个样品，可在19.9mL1×TE 中加入100μL PicoGreen dsDNA 定量试剂。
【注】：
a、由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。
b、PicoGreen试剂见光易降解，所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。
c、溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。

2、标准品工作液的配制

小牛胸腺嘧啶DNA干粉 1mg（Tris，Nacl等浓度已成标准体系），加入1mL无菌去离子水（无Dnase），配制成1mg∕mL的标准品工作液。
【注】：标准品也可用λDNA或其他已知浓度的纯化DNA。

3、标准品工作液稀释

1）母液稀释：取10µl（1mg∕mL）标准品工作液加入到990ul TE溶液中，浓度稀释成10µg∕mL，取10µl（10µg∕mL）标准品工作液加入到990µl TE溶液中，浓度稀释成100ng∕mL；
2）倍比稀释：取800µl （100ng∕mL）的标准品工作液加入到200µl TE溶液中，浓度达到80ng∕mL，取500µl（80ng∕mL）的标准品工作液加入到500µl TE溶液中，浓度稀释到40ng∕mL；依次倍比稀释，配成20ng/ml、10ng/ml、5.0ng/ml、2.5ng/ml、1.25ng/ml、0.625ng/ml的标准品溶液；
3）标准曲线的制备：倍比稀释后的各梯度标准品溶液和染料工作液各取100µl混匀，避光室温放置5min。使用FB-15型便携式荧光仪检测样品的荧光值：将混合后的溶液加入微量比色皿，确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿的外部，可以驱散气泡。以1×TE缓冲液为blank，测定样品和空白对照的荧光值；用标准品溶液的浓度（ng/ml）对应的荧光强度作直线回归，制备标准曲线。
4）测量剩余样品的荧光值。荧光计将给出一个直接的浓度读数，数据可以用来产生DNA 浓度的标准曲线。

4、结果分析


表1 标曲测定荧光值


图1 标准曲线图

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·DTT 二硫苏糖醇
编号：SY0347
英文名称：DTT
规格：10g
DTT即DL-Dithiothreitol，中文名称为二硫苏糖醇，也称作Cleland’s Reagent，是一种强效的还原剂，将-SH基保持在还原态，常用以还原蛋白和多肽中的二硫键，或更普遍用以防止蛋白半胱*酸残基形成分子内和分子间的二硫键。DTT还具有抗氧化作用，对一些隐藏的二硫键（溶剂无法渗透发挥作用），DTT可借助变性条件下来还原二硫键，如高温或*离子变性剂，如6 M盐*(代"酸")胍，8 M尿素，或1% SDS。

与β-巯基乙醇相比，二者作用相似，但DTT 的刺激性和毒性都低于β-巯基乙醇，且粉末的稳定性也高于β-巯基乙醇。DTT的最佳工作pH范围为7.1-8.0，而在pH 6.5-9.0内都具有活性。蛋白巯基还原实验DTT的常用工作浓度是1-10 mM。

CAS NO. 3483-12-3
分子式 C4H10O2S2
分子量 154.2
纯度 ＞97%
溶解性：水中最大溶解度为50mg/ml，也溶于乙醇，*仿，乙酸乙酯。
储存条件：4℃干燥
结构式：


注意事项
1）DTT粉末的稳定性很高，但是储存液/工作液必须现配现用，多余液体需丢弃。
2）此产品可能有毒，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


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·2×RNA上样缓冲液(不含*化乙锭)
编号：SY0254
英文名称：2×RNA Loading Buffer(Without Ethidium Bromide)
规格：5×1ml
2×RNA上样缓冲液用于琼脂糖凝胶电泳或聚丙*(代"烯")酰胺琼脂糖凝胶电泳前RNA 样本的处理。缓冲液组分经过优化，其中包括指示剂*酚蓝和二甲*青FF，电泳时可肉眼监控RNA 的迁移，并含有甲酰胺用作一种变性剂和RNA稳定剂。

1×RNA loading buffer各组分：47.5% Formamide, 0.01%(w/v)SDS, 0.01%(w/v) Bromphenol Blue, 0.005%(w/v) Xylene Cyanol, 0.5mM EDTA.

使用方法
1）将RNA样品与等体积的2×RNA上样缓冲液充分混匀。
2）对于变性PAGE(尿素)/Agarose凝胶电泳，需在65-70℃加热5-10min变性RNA，并在加热的同时用枪头吸取电泳缓冲液小心冲洗点样孔中多余的尿素；对于非变性PAGE/Agarose凝胶电泳则无需此步加热，直接进行下一步。
3）上样即可。

保存：室温可稳定保存1周，4 ºC可保存1个月，-20 ºC可稳定保存2年。


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·细胞可渗透*离子荧光探针
编号：SY0598
英文名称：Indo-1, AM,Cell Permeable
规格：50μg
Indo-1是一种细胞生物学常用的*离子荧光探针，与Fura-2为目前使用最广泛的比率法测定的*荧光指示剂，Indo-1能特异性地结合Ca2+，同时可发出荧光，结合Ca2+后的最大发射波长从结合前的475nm向400nm（Ca2+饱和时）偏移，该信号变化可被流式细胞仪较好的捕捉：在氩离子激光器的351-364光谱范围内单一波长激发该探针，在400nm和475nm的波长处分别检测结合*离子和未结合*离子的荧光信号，通过二者荧光强度的比率测定*离子浓度。

由于Indo-1是极性大的酸性化合物，无法进入细胞内，为此在其负性基团上结合乙酰氧甲酯，使其成为Indo-1/AM，该变化既增加了酯溶性又消除了负电荷，极大的提高了细胞渗透性。在细胞内，Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可与胞浆游离Ca2+可逆性结合。

CAS：112926-02-0
分子式：C47H51N3O22
分子量：1009.91
Ex/Em：346nm/475nm
溶解性：溶于DMSO
储存条件：-20℃，有效期6个月
结构式


·ERSE-Luc报告基因慢病毒颗粒
编号：SY0150
英文名称：Lentivirus ERSE Luciferase Reporter
规格：50μl×4管; 2×10e7TU/ml
ERSE报告基因慢病毒是用于检测ERSE转录活性水平为目的的报告基因慢病毒颗粒。ERSE充当一个顺式作用元件调节内质网应激反应的转录应答。ERSE是包含NF-Y/CBF 和YY1转录因子结合位点的三重核苷酸序列。内质网应激反应元件结合因子（ERSF）复合体也是与ERSE核苷酸序列相互作用的。内质网应激在一些多发性疾病中具有关键的作用。

ERSE报告基因慢病毒主要用于检测ER Stress信号通路、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分子等。

pGMLV-ERSE-Lu是在pGMLV-Lu慢病毒载体的多克隆位点插入了多个ERSE结合位点，可以高灵敏度地检测ERSE的激活水平。采用慢病毒作为报告基因的优点在于它能够感染多种难感染的细胞，比如原代细胞，干细胞，神经元细胞等。而且慢病毒能够将外源基因插入细胞基因组内，实现稳定转染。
质粒图谱



使用说明
ERSE报告基因慢病毒颗粒采用慢病毒转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒检测。

注意事项
1）病毒操作时最好使用生物安全柜，如使用普通超净工作台操作病毒，请不要打开风机。
2）病毒操作时请穿实验服，带口罩和乳胶手套。
3）操作病毒时必须特别小心，不要产生气雾或飞溅。如操作时超净台有病毒污染，立即用10%次*酸*溶液搽拭干净。接触过病毒的枪头、离心管和培养板等需用10%次*酸*溶液浸泡1h以上后弃去。
4）用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤：拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜试验台前，用70%乙醇清理实验台。
5）病毒操作完成后，用肥皂清洗双手。
6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-80℃。

北京百莱博科技有限公司专业生产核酸电泳和回收产品，欢迎来电咨询选购双链DNA(dsDNA)定量试剂大量库存促销。