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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
742
- 英文名:
Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
2~8℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq) 核酸扩增(PCR),我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq) 核酸扩增(PCR)
英文名:Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
规格:50次
编号:BTN91202
本产品是经过精心优化的、基于MMLV 逆转录酶和Taq DNA聚合酶的双酶一管式RT-PCR试剂盒,它含有除模版RNA和其专一性引物以外的所有RT-PCR试剂,包括MMLV 逆转录酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR缓冲液等,可以在同一反应管内完成RNA→cDNA→PCR反应(RT-PCR反应)。
产品特点:
1.一管式完成RT-PCR反应,避免样品交叉污染。
2. 即开即用,用户不需要单独准备RT-PCR所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix,将加样步骤减少到最低,极大降低了加样误差,增加了可重复性。
4. 使用范围广,适用于从病毒RNA 到人RNA的各种RNA 模板。
5.高灵敏度,每个RT-PCR 体系最低可以检测200拷贝的RNA分子,可扩增的模版RNA的最长达2000nt。
6. 所得RT-PCR产物可以直接用于AT克隆。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 双酶一管式RT-PCR Buffer(2×) | 750μl |
| MMLV-Taq Mix | 100μl |
| RNase-free水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
注意:所有离心管用前最好全部短暂离心几秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一个30μL 体系的RT-PCR 为例,如果体积不同,各成分用量需要适当调节。
1.在一干净的无RNase的PCR管中,先加入下列成分:
| 成分 | 阴性对照 | 样品 |
| RNA模板(自备,分下面三种情况) | 无 | 见下 |
| 总RNA | 无 | 100-500ng |
| 或poly(A)mRNA | 无 | 10-500ng |
| 或体外转录得到的专一RNA | 无 | 0.01 pg-500ng |
| RNA特异性引物一(自备) | 终浓度300nM | 终浓度300nM |
| RNA特异性引物二(自备) | 终浓度300nM | 终浓度300nM |
| 探针(仅对Realtime RT-PCR) | 终浓度200nM | 终浓度200nM |
| RNase-free水 | 补到13μL | 补到13μL |
| 双酶一管式RT-PCR Buffer(2×) | 15μl | 15μl |
| MMLV-Taq Mix | 2μl | 2μl |
注:通常初次使用本试剂时,可用引物浓度300nM,探针浓度200nM进行实验,根据实验结果具体情况,在200~800nM 范围内调整引物浓度,在50~400nM 范围内调整探针浓度以达到最佳检测效果。引物、探针、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整,同时增减DEPC 水用量,保证总反应体积不变即可。
2. 轻柔混合均匀后放入PCR 仪中进行RT-PCR。
3. 设定RT-PCR反应条件时,一般将RT的条件设定成42℃,30 钟,后接94℃变性5分钟,然后进入PCR循环(PCR参数将根据自备引物的Tm 值由用户自行决定注)、最后72℃,5分钟。对Realtime PCR,在复性步骤设置荧光检测,检测通道:FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR结束后取5-10μL电泳检查。
注意事项:
1. 使用已校准的移液器,选用一次性PCR反应管、离心管、tip 头等进行样本处理及配液等操作,所有用具应不含DNA酶和RNA酶。
2.引物、探针设计过程中应尽可能避免发夹结构、二聚体等现象的发生,探针的位置尽可能靠近上游引物,PCR 目标片段最好小于200bp,尽可能在150bp以内。
3. 实验样品尽可能新鲜,提取过程应严防RNA酶污染及操作不当导致的RNA 降解。
4. 使用本产品时建议对RT-PCR扩增条件、引物浓度和样品用量进行调整,选择最适当的引物浓度、样品浓度和PCR扩增条件。
5. 本产品使用前应在室温充分融解,并用漩涡震荡器充分混匀。
6. 统一配液后分装以减少加样误差,每次实验应设置阴性对照。
7. 禁止标记PCR反应管,避免外源性荧光信号干扰。
8. PCR反应管中不能有气泡,否则会产生非特异的荧光信号。若有气泡,可先用手指将气泡弹破,然后再低速离心消除。
9. 实时荧光PCR 仪器连续进行实验时,最好间隔一小时以上再使用。
10. 实时荧光PCR 仪需经常校正和清洁载样板板孔。
11. 若使用Roch LightCyclerTM荧光PCR 仪,应将毛细管放在专门套管中,以便分装反应体系和加入待检样品。前述操作完毕应低速离心数秒再将毛细管垂直缓慢放入样品架,以免折断;若发生折断,应小心取出,用专用小毛刷擦拭干净后方可进行扩增。
12. 实验室应严格分区,避免PCR产物污染。
欲咨询购买双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq) 核酸扩增(PCR),请致电北京百奥莱博科技有限公司,为您提供最全面周到的产品服务,除此之外,我公司正在促销以下产品:
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双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq) 核酸扩增(PCR)关键词:BTN91202,MMLV-Taq,双酶一管式RT-PCR试剂盒,Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit,双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)
·Southern封堵液(Nylon专用)
编号:BTN120677
英文名称:Southern Blocking Buffer (Nylon)
规格:100mL
本产品为专门针对Nylon膜的核酸杂交封堵液,用于降低检测时的非特异性信号,降低背景,增强信噪比。即开即用,方便快捷。
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
·硅胶膜离心吸附柱系列(小量提取)
编号:BTN60911
英文名称:Silica Spin Column for Miniprep
规格:50套
硅胶膜离心吸附柱目前广泛用于基因组DNA提取、总RNA提取、DNA反应纯化、DNA胶回收和质粒DNA制备等分子生物学实验,但是由于硅胶膜吸附核酸的能力千差万别(详细分析见百奥莱博综述Silica-DNA结合原理及影响因素),使得市场上相关产品的质量也良莠不齐。百奥莱博经过精心研究,找到特殊的化学修饰方法,使普通硅胶膜吸附核酸的能力大为增加,好于市场上绝大多数产品。本产品就是基于化学修饰硅胶膜的微型离心吸附柱。
产品特点:
1.高载量,在同等上样条件下吸附能力比同类产品高1-2倍左右。
2.上样体积为0.7mL。
3.与各种常用的,基于Silica-DNA结合原理的上柱液和洗柱液兼容。
4.可以再生使用(需要百奥莱博的离心吸附柱再生液)。
5. 结合DNA的性能不会随放置的时间变化。
储存条件:常温运输及保存,有效期两年。
使用效果:
图注: 本产品(T)和国内杭州V公司离心吸附柱(V)用于从1.5mL E.coli菌液中提取pGEM3质粒DNA(使用百奥莱博柱式质粒DNA提取试剂盒试剂),最后用100μl TE洗脱质粒DNA,5μl用于电泳。
图注: 本产品(左)和上海S公司离心吸附柱(右)用于从玉米叶片中提取总RNA。洗脱量为100μl,10μl用于甲醛胶变性电泳。
双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq) 核酸扩增(PCR)关键词:BTN91202,MMLV-Taq,双酶一管式RT-PCR试剂盒,Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit,双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)
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文献和实验for both DNA sample and reaction mixture preparation, is strongly recommended.The reagents for PCR should be prepared separately and used solely for this purpose. Autoclaving of all solutions, except dNTPs, primers and Taq DNA Polymerase is recommended
。此外,由于几乎所有的Taq酶产品都带有相应的反应缓冲液,缓冲液的品质也对保证Taq酶特异性扩增起着不可忽视的作用,一般的缓冲液中调节H键作用的盐只有KCl,QIAGEN公司的缓冲体系通过KCl、(NH4)SO4盐离子体系的平衡调节也提高了酶作用的特异性。此外,热启动的Taq酶也是实现一步法RT-PCR的基础。如QIAGEN公司的OneStep RT-PCR试剂盒,在RT反应较低温度下,Taq酶没有活性,逆转录酶发挥活性;RT反应结束,高温灭活逆转录酶的同时,激活Taq酶,进行PCR反应。另一家公司
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