双酶一管式 RT-PCR 试剂盒

双酶一管式 RT-PCR 试剂盒产品及特点:

本产品是经过精心优化的、基于 MMLV 逆转录酶和Taq DNA 聚合酶的双酶一管式RT-PCR 试剂盒，它含有除模版 RNA 和其专一性引物以外的所有 RT-PCR 试剂，包括MMLV 逆转录酶、Taq DNA 聚合酶、RT-PCR 缓冲液等，可以在同一反应管内完成 RNA
→cDNA→PCR 反应 (RT-PCR 反应)，本产品特点如下：

1. 一管式完成 RT-PCR 反应，避免样品交叉污染。而常规的 RT-PCR 需要先进行 RT 再进行 PCR。
2. 主要成分只有两个（RT-PCR buffer 和 MMLV-Taq Mix），将加样步骤减少到最低，极大降低了加样误差，增加了可重复性。
3. 使用范围广，适用于从病毒RNA、总 RNA 和mRNA 样品。
4. 高灵敏度，每个RT-PCR 体系最低可以检测200 拷贝的RNA 分子（靶分子在200bp 以下时）。
5. 所得 RT-PCR 产物可以直接用于 AT 克隆、克隆等后续分析。

本试剂盒足够 50 次 30uL 体系的 RT-PCR，只能用于科研目的。

规格及成分:

成 份	十孔盒包装
双酶一管式 RT-PCR Buffer（2×）	750 uL(黄色盖)
MMLV-Taq Mix	50 uL(本色盖)
RNase-free 水	1 mL(蓝色盖)
使用手册	1 份

运输及保存:低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂:

1. RNA 模板：总 RNA，mRNA。
2. 专一性引物和探针（引物、探针应用 HPLC 或PAGE 纯化）。
3. RNase-free & DNase-free 的 tip 头，离心管,薄壁PCR 管等。
4. 各种规格的移液器。
5. 常规或 Real-time PCR 仪。本产品适用于下列 Realtime PCR 仪：ABI PRISM 7700、ABI PRISM 7500、ABI PRISM 7300、ABI PRISM 7000、MJ Opticon 、 BIORAD iCycler 、Roch LightCycler 等，具体使用方法请参照相应仪器的说明书。

使用方法:

样品 RNA 的制备

1. 用自选方法纯化样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数 RNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的 RNAout 相关产品。

二、引物的制备

2. 收到合成引物后，按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水（加入量见引物试管上的标签），使得两条引物的浓度均为 10μM（10 pmol/μL），然后各取 110μL 混合在一起得 220μL，标注为引物混合物，放冰上待用。220μL 足够 100 次双酶一管式 RT-PCR 反应。

三、设置一管式 RT-PCR 反应（30uL 体系）在 N+1 个干净的无 RNase 的 PCR 管中（N=样品数，另外一个是阴性对照。用户可以设置其他对照，样品数需相应增加），按下表加入各成分：

成分	阴性对照管	样品管
RNA 模板（自备，分下面三种情况）	无	见下
总 RNA	无	100-500 ng
或 poly(A) mRNA	无	10-500 ng
或体外转录得到的专一 RNA	无	0.01 pg-500ng
引物混合物（第 2 步）	2 uL	2 uL
RNase-free 水	补到 14 uL	补到 14 uL
双酶一管式 RT-PCR Buffer（2×）	15 uL	15 uL
MMLV-Taq Mix	1 uL	1 uL

1. 轻柔混合均匀后放入 PCR 仪中进行 RT-PCR。
2. 设定 RT-PCR 反应条件时，一般将 RT 的条件设定成 42℃ 30 分钟，后接 94℃变性 5 分钟，然后进入PCR 循环。PCR 参数需要用户根据自备引物的 Tm 值和靶分子长度决定。PCR 产物的长度最好不要超过 200bp）、最后 72℃延伸 5 分钟。
3. RT-PCR 结束后取 5-10 uL 电泳检查。