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- xuanya
- 美国/中国
- XY-TE-0752
- 2025年11月22日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
两年
- 英文名：
Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit
- 库存：
900
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是经过精心优化的、基于 MMLV 逆转录酶和 Taq DNA 聚合酶的双酶一管式 RT-PCR 试剂盒，它含有除模版 RNA 和其专一性引物以外的所有 RT-PCR 试剂，包括 MMLV 逆转录酶、Taq DNA 聚合酶、RT-PCR 缓冲液等，可以在同一反应管内完成 RNA →cDNA→PCR 反应 (RT-PCR 反应)，本产品特点如下：
1. 一管式完成 RT-PCR 反应，避免样品交叉污染。而常规的 RT-PCR 需要先进行 RT 再进行 PCR。
2. 主要成分只有两个（RT-PCR buffer 和 MMLV-Taq Mix），将加样步骤减少到最低， 极大降低了加样误差，增加了可重复性。
3. 使用范围广，适用于从病毒 RNA、总 RNA 和 mRNA 样品。
4. 高灵敏度，每个 RT-PCR体系最低可以检测200 拷贝的 RNA分子（靶分子在200bp 以下时）。
5. 所得 RT-PCR 产物可以直接用于 AT 克隆、克隆等后续分析。
6. 本试剂盒足够 50 次 30uL 体系的 RT-PCR，只能用于科研目的。
双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)运输及保存：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
1. RNA 模板：总 RNA，mRNA。
2. 专一性引物和探针（引物、探针应用 HPLC 或 PAGE 纯化）。
3. RNase-free & DNase-free 的 tip 头，离心管,薄壁 PCR 管等。
4. 各种规格的移液器。
5. 常规或 Real-time PCR 仪。本产品适用于下列 Realtime PCR 仪：ABI PRISM 7700、ABI PRISM 7500、ABI PRISM 7300、ABI PRISM 7000、MJ Opticon 、 BIORAD iCycler 、Roch LightCycler 等，具体使用方法请参照相应仪器的说明 书。
双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)使用方法
一、样品 RNA 的制备
1. 用自选方法纯化样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数 RNA 提取试剂盒兼容。也 可以选购本公司的 RNAout 相关产品。
二、引物的制备
2. 收到合成引物后，按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水（加 入量见引物试管上的标签），使得两条引物的浓度均为 10μM（10 pmol/μL），然 后各取 110μL 混合在一起得 220μL，标注为引物混合物，放冰上待用。220μL 足 够 100 次双酶一管式 RT-PCR 反应。
双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)三、设置一管式 RT-PCR 反应（30uL 体系）
3. 在 N+1 个干净的无 RNase 的 PCR 管中（N=样品数，另外一个是阴性对照。用户 可以设置其他对照，样品数需相应增加），按下表加入各成分：
成分 阴性对照管 样品管
RNA 模板（自备，分下面三种情况） 无 见下
总 RNA 无 100-500 ng
或 poly(A) mRNA 无 10-500 ng
或体外转录得到的专一 RNA 无 0.01 pg-500ng
引物混合物（第 2 步） 2 uL 2 uL
RNase-free 水 补到 14 uL 补到 14 uL
双酶一管式 RT-PCR Buffer（2×） 15 uL 15uL
MMLV-Taq Mix 1 uL 1 uL
4. 轻柔混合均匀后放入 PCR 仪中进行 RT-PCR。
5. 设定 RT-PCR 反应条件时，一般将 RT 的条件设定成 42℃ 30 分钟，后接 94℃变 性 5 分钟，然后进入 PCR 循环。PCR 参数需要用户根据自备引物的 Tm 值和靶分 子长度决定。PCR 产物的长度最好不要超过 200bp）、最后 72℃延伸 5 分钟。
6. RT-PCR 结束后取 5-10 uL 电泳检查。
双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)注意事项
1. 使用已校准的移液器，选用一次性 PCR 反应管、离心管、tip 头等进行样本处理及 配液等操作，所有用具应不含 DNA 酶和 RNA 酶。
2. 引物应尽可能避免发夹结构、二聚体等现象的发生， PCR 目标片段最好小于 200bp，尽可能在 150bp 以内。
3. 实验样品尽可能新鲜，提取过程应严防 RNA 酶污染及操作不当导致的 RNA 降解。
4. 使用本产品时建议对 RT-PCR 扩增条件、引物浓度和样品用量进行调整，选择最适 当的引物浓度、样品浓度和 PCR 扩增条件。
5. 本产品使用前应在室温充分融解，并用漩涡震荡器充分混匀。
6. 统一配液后分装以减少加样误差，每次实验应设置阴性对照。
7. PCR 反应管中不能有气泡。若有气泡，可先用手指将气泡弹破，然后再低速离心消 除。
8. 实验室应严格分区，避免 PCR 产物污染。
双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)相关产品：
| 8- 羟基啉 |
| 8- 羟基啉硫酸盐 |
| 羟基脲 |
| 潮霉素 B |
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| 吲哚 -3- 乙酸 |
| 吲哚 -3- |
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| 牛胰岛素 |
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| 双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq) |
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| 硫酸卡那霉素 |
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| L- 赖氨酸 |
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| 氯化镁六水 |
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文献和实验for both DNA sample and reaction mixture preparation, is strongly recommended.The reagents for PCR should be prepared separately and used solely for this purpose. Autoclaving of all solutions, except dNTPs, primers and Taq DNA Polymerase is recommended
DNA聚合酶Taq Plus和 Taq Plus I 有什么区别吗？对PCR结果有影响吗？ Taq Plus 集扩增效率高和保真度好于一体。能有效地扩增10 kb以下的片段，扩增效率比Pfu高，保真度 Taq Plus 比Taq好。对于有些结构复杂的模板，如GC含量高、有二级结构等可选用Taq Plus扩增。 Taq
This is a protocol from Engelke et.al.(1990)which was modified by Dr.Baron.The enzyme has been used for RT-PCR,genotyping and cloning.Solutions1000X IPTG0.5M IPTG 1.19g IPTGup to 10 ml wih sterile Qfilter and store at -20℃Buffer A50 mM Tris 7.9 25
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