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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温运输
- 保质期:
长期
- 英文名:
dT Tailing Kit
- 库存:
591
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京平末端DNA加T试剂盒价格厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京平末端DNA加T试剂盒价格厂家
英文名:dT Tailing Kit
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
规格:50次
本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性,在只有dTTP存在的情况下,在平末端的DNA片段加上一个dT尾巴,主要用于制备T载体。其流程图如下:

产品特点:
1. 简单,2X Tailing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA片段,包括Pfu DNA成本polymerase等酶合成的DNA片段。
3. 加T后的载体可以作为T载体使用。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| Taq DNA olymerase(5U/μL) | 50μl |
| 2×dT Tailing Buffer | 1.25ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一:反应前纯化处理:
平末端DNA片段或平末端质粒DNA可以采取胶回收和酚/*仿抽提法等常规方法纯化,最后溶解在水或TE中,终浓度以0.1μg/μL为宜。必须注意的是,用Vent,Deep Vent,Pfu,Pwo等具有3到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段,必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/*仿抽提或Proteinase K处理),否则它们将在加T反应时,切除掉加上的T尾巴,干扰反应。
二:加T反应
在干净的0.5mL或1.5mL离心管中,分别加入下列成分:
| 回收的DNA片段 | 0.2-2μg |
| 2×dT Tailing Buffer | 25μL |
| Taq DNA polymerase(5U/μL) | 1μL |
| 补水到 | 50μL |
| 72℃保温2小时 | |
三:反应后处理
加T反应后,Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合,所以必须酚/*仿抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/*仿抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即可用于后续连接反应。
北京平末端DNA加T试剂盒价格厂家极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
F030242 HRP标记小鼠抗鸭IgY(IgG)抗体 HRP*Monoclonal Mouse Anti-Duck IgY
ARB14157 小鼠半胱天冬蛋白酶3(CAspAse3/CPP32)elisa检测
ARB11993 大鼠N-乙酰-β-D-*基葡萄糖苷酶(NAG)Elisa方法检测 Rat n-acetyl-β-d-glucosaminidase,nag ELISA KIT
幽门螺旋杆菌染色液(亚甲蓝法) 100ml
NF-224 抗人a1AT血清
ARB11009 人补体片断3b(C3b)elisa检测 Human complement fragment 3b,c3b ELISA KIT
ARB11226 人细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)Elisa方法检测 Human intercellular adhesion molecule 3,icam-3 ELISA KIT
CYB165022 生物素化兔抗羊IgG
固蓝RR盐 Benzyltrimethylammonium bromide 14726-29-5
革兰阴性菌裂解缓冲液 100ml
D-*丙*酸甲酯盐*(代"酸")盐 Alloxan monohydrate 13033-84-6
CYB163009 羊抗人IgM-RBITC(μ链特异)
硫代水杨酸 Beryllon II 147-93-3
ARB14046 猴γ干扰素(IFN-γ)Elisa定量检测 Monkey interferon γ ,ifn-γ ELISA KIT
硫*(代"酸")卡那霉素溶液(10mg/ml) Kanamycin 10mg/ml 10ml
BL0873 羊抗鸡IgG免疫血清
BTN120644 聚乙二醇 PEG
BL1396 SABC小鼠/兔IgG-AP kit
BTN131144 山羊抗小鼠IgG(H+L),碱性磷酸酶标记 Goat Anti-Mouse IgG(H+L),AP Conjugate
CBZ-D-天冬*酸 Poly I 78663-07-7
聚季铵盐-10 Neomycin sulfate 68610-92-4或54351-50-7
北京平末端DNA加T试剂盒价格厂家关键词:平末端DNA加T试剂盒,dT Tailing Kit,BTN60106
·剥离硅烷
编号:BTN80935
英文名称:Repeling Silane
规格:200mL
本产品为一定浓度的二*二甲基硅烷(Dichlorodimethylsilane),其分子式为C2H6Cl2Si,分子量为129.06 ,CAS号为75-78-*(代"5")。主要用于制备PAGE胶时,处理其中一块玻璃板,使附着的凝胶易于剥离。本产品最好跟亲和硅烷结合使用。但本产品不能用于硅化玻璃器皿。
储存条件:常温运输及保存,有效期两年。
·弱RIPA裂解液
编号:BTN131008
英文名称:RIPA Lysis Buffer(Weak)
规格:250mL
RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等实验。本产品裂解强度较强,对膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子均有很好的效果,本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂,能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种RIPA裂解液产品特点见下表:
| 产品名称 | RIPA裂解液(强) | RIPA裂解液(中) | RIPA裂解液(弱) |
| 有效裂解成分 | 1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS | 1% NP-40,0.5% deoxycholate,0.1% SDS | 1% NP-40,0.25% deoxycholate |
| 裂解强度 | 强 | 中 | 温和 |
| 对膜蛋白的提取 | 很好 | 较好 | 一般 |
| 对胞浆蛋白的提取 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 对核蛋白的提取 | 很好 | 较好 | 较好 |
| 胞浆磷酸化蛋白提取 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 细胞核转录因子提取 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 含蛋白酶抑制剂 | 是 | 是 | 是 |
| 含磷酸酯酶抑制剂 | 是 | 是 | 是 |
| 主要用途 | WB,IP | WB,IP | WB,IP,co-IP |
储存条件:低温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
对于培养细胞样品:
1. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 裂解细胞
2.1 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
2.2 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g离心3~5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意:通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
对于组织样品:
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000~14000g离心3~5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注意:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
备注:
1.为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒,不建议使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
北京平末端DNA加T试剂盒价格厂家关键词:平末端DNA加T试剂盒,dT Tailing Kit,BTN60106
BTN101003 RAPD PCR试剂盒(含银染) RAPD PCR Kit
BTN130632 T7核酸外切酶 T7 Exonulease
抑肽酶溶液(Aprotinin,2mg/ml) 1ml
ARB13131 小鼠胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)Elisa定量检测
核糖核酸酶抑制剂 Tropaeolin O sodiu*(代"m") salt
J0102 猪抗口蹄疫病毒(FMDV)血清 10000ml/25000ml
PY02-168 豆粉琼脂 250克
" 500T
F030236 HRP标记山羊抗猪IgG抗体 HRP*Polyclonal Goat Anti-Pig IgG
NF-223 抗人a1AG血清
台氏液粉剂 Tyrode"s Solution 1L
E0603 脱纤维裂解山羊血(无菌) 100ml/500ml
ARB12142 大鼠白三烯B4(LTB4)elisa检测 Rat leukotriene b4,LT-b4 ELISA KIT
HC0102 25mm针头式滤器
298-96-4 TTC 2,3,5*化三*基四氮唑
ARB11715 人集落刺激因子(CSF)含量测试 Human colony-stimulating factor,csf ELISA KIT
我公司生产供应销*(代"售")的克隆与表达产品正全系列现货促销,满分期待您的垂询选购北京平末端DNA加T试剂盒价格厂家。
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文献和实验一、Lighteningssembly Cloning Kit 传统克隆方法:引物设计合成、PCR、连入克隆载体、酶切获得插入片段,酶切获得线性载体,连接获得重组质粒。需酶切,引物设计受酶切位点限制;需连入克隆载体;步骤多,耗时长;效率低。 北京康碧泉公司代理的Gene-Foci试剂盒的克隆方法:引物设计合成、PCR获得插入片段,PCR或酶切获得线性载体,连接获得重组质粒。无需酶切,引物设计不受酶切位点限制;无需连入克隆载体;步骤少,速度快;高连接效率,高
/GATCY) 这几个酶切产物粘端突出部分都一样是 5’GATC,能互补,可以相互连接。此外,所有平末端酶切产物都可以相互拼接,只是连接效率低些。要是运气再背点、酶切粘端怎么都不配对?用 Klenow 大片段或者T4聚合酶或“削平”或“补齐”得到平末端,再“强行连接”。。。这种目标片段前后都是平端的、或者单酶切的,载体“自恋”(自我连接)还可以用大小区分,目标片段可能正向接入或者倒装,如何在筛选时进行区分,又多了一个麻烦事儿。要是用到甲基化敏感的内切酶,比如 HPhI(对 Dam、Dcm 甲基化敏感
,能够以模版为准切掉错配的碱基,因而得到的PCR产物多数是平末端,不能用T载体克隆。通常需用目的载体多克隆位点上的平末端单酶切位点,单酶切得到平末端的线性片断,直接连接PCR产物。这类酶得到的产物通常不能用TA克隆试剂盒。目前也有商业化的平末端PCR产物克隆试剂盒,不过较少用。平末端的连接效率低,通常需要高浓度的连接酶,较长的连接时间,合适的片断:载体比例,有的时候还需要调整反应体系的ATP浓度或者增加聚乙二醇(PEG2000),以得到较高的连接效率。许多厂家都有推出快速连接试剂盒
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