SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒厂家价格

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SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒厂家价格由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒厂家价格
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：BTN160684-25A
英文名：SuperTOPO Blunt Cloning Kit
本试剂盒是基于Topoisomerase能够在几秒钟之内高速连接DNA片段的原理开发的无背景克隆试剂盒，它使用了本公司通过定点突变改良的TOPO酶，连接效率比野生型更高。

产品特点：
1.高效快速，连接反应几乎在几秒钟内完成，连接率几乎达到100%。
2.适用于pfu、KOD等高保真聚合酶扩增的平末端片段的克隆。
3. 无杂带或引物二聚体的PCR扩增产物可以不经过纯化直接用于连接反应。
4. 零背景，无需IPTG-X-Gal蓝白斑筛选，故不需要IPTG-X-Gal培养基。
5. 本试剂盒按10μL标准反应体系，有25次和50次两种规格包装供选择。
6. 提供含Amp和Kan两种抗性的载体供选择(BTN160684-25A是含Amp抗性TOPO载体，BTN160684-25K是含Kan抗性TOPO载体)。

试剂盒组成：

 

成分	规格
SuperTOPO-Amp Blunt载体	25μl(BTN160684-25A)
SuperTOPO-Kan Blunt载体	25μl(BTN160684-25K)
连接缓冲液	25μl
M13F引物	50μl
M13R引物	50μl
超纯水	1ml
说明书	1份

注意：BTN160684-25A提供SuperTOPO-Amp Blunt载体，BTN160684-25K提供SuperTOPO-Kan Blunt载体。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

1. 如果是PCR 制备插入片段，所用引物不能磷酸化，使用pfu、KOD等产生平末端片段的高保真DNA聚合酶。为保证扩增产物的完整性，PCR循环结束后，再延伸5-10分钟，确保片段延伸完全。
2.电泳检测并相对定量PCR片段(跟DNA marker 比较)。根据插入片段长度和下表确定每次连接反应需要的最佳用量：

插入片段长度	最佳用量
100-1000bp	20-50 ng
1000-2000bp	50-100 ng
2000-5000bp	100-200 ng

3.在一个干净的塑料离心管中，室温下(不要放在冰上)设置如下连接反应体系：

成分	用量
纯化后的PCR产物	不超过8μl(详见注意事项)
SuperTOPO-Amp Blunt载体或 SuperTOPO-Kan Blunt载体	1μl
连接缓冲液	1μl
超纯水	补到10μL

注意：如果使用未经纯化的PCR产物，则需要加入量不能超过1μL，否则PCR 体系会干扰连接体系。
4. 轻柔吹打混匀后，短暂离心，常温(20-30℃)放置0-5分钟。如果在冬天室温低于20℃，建议使用25℃水浴或金属浴。注意：连接时间超过5分钟的话连接效率会降低。
5. 如果当天不转化，可以将离心管放-20℃保存。如果转化，则取5μL连接液加到50-100μL 刚刚融化的感受态细胞中，轻柔混匀。注意：本产品要求感受态细胞的转化效率不得低于5×10E7cfu/ug。
6. 如果片段长度小于2Kb，则不需要冰浴和热激，直接在离心管中加入500μL 不含抗菌素的SOC或LB培养基，然后取200μL涂盘。也可以先3000g离心2分钟后，弃掉大部分上清，只留约100μl左右，然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-Amp)或Kan(对SuperTOPO-Kan)的培养皿上，37℃过夜培养。
7. 如果片段长度长于2Kb，则按常规转化方式，先冰浴2-30分钟，然后42℃热激30秒，冰上防放置2分钟，再在离心管中加入500μl 不含抗菌素的SOC或LB培养基，37℃ 250rpm培养60分钟，然后取200μL 涂盘。也可以先3000g离心2分钟后，弃掉大部分上清，只留约100μL左右，然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-AmpBlunt载体)或Kan(对SuperTOPO-Kan Blunt载体)的培养皿上，37℃过夜培养。
8. 用M13F/M13R通用引物进行菌落PCR或直接测序来鉴定重组子。

除SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒厂家价格外，我公司正在打折促销以下产品：

·改良Lowry法蛋白定量试剂盒
编号：BTN101102
英文名称：Enhanced Lowry Assay Kit
规格：1000次
 Folin酚试剂(磷钼酸和磷钨酸混合物)跟蛋白质中含酚*基酸(色*酸和酪*酸)发生颜色反应，可用于测定蛋白质浓度，但灵敏度较低。Lowry在此基础上加入Biuret(双缩脲)反应步骤，即先在碱性条件下使蛋白质和Cu+形成复合物，再使其与Folin酚试剂发生显色反应，产物在750nm检测。
 Lowry法使不含酚的蛋白质也能被检测出来，灵敏度是单独使用Folin酚的10倍左右，是双缩脲反应的200倍，因此成为早期检测蛋白浓度的主要方法。传统Lowry法受到很多常用的试剂(如DTT、糖、甘油、Triton等)干扰，步骤繁琐。本公司对Lowry法进行改良。
 Lowry检测原理图如下：


产品特点：
1．即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
2．能抵抗部分干扰物(如一定浓度SDS或其他去污剂)的干扰。
3．检测线性范围广，在2-100μg，检测上限比经典Lowry法高30%-40%。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A成分一	208ml
溶液A成分二	16ml
溶液A成分三	16ml
溶液B	80ml
溶液C	80ml
福林酚	10mL(用100mL 棕色瓶)
BSA标准品(2mg/mL in水)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存(但BSA 标准品需要-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：

一、准备工作
1．制备溶液A：将16mL溶液A成分二和16mL溶液A成分三加入到装溶液A成分一的塑料瓶中，混合均匀得到240mL溶液A。注意：溶液A各成分分开提供更加稳定。
2．制备 Lowry工作液：将溶液A、溶液B和溶液C按3：1：1的体积比混合得到Lowry工作液。此工作液可以室温放置2-3周，所以最好用多少配多少。如果发现溶液B或溶液C有沉淀，需37℃溶解并摇匀后再使用。
3．制备福林酚工作液：在装有10mL 福林酚的棕色塑料瓶中加入90mL 去离子水，摇晃混匀待用。此工作液在避光条件下可以放置6个月。

二、试管法
4．先用去离子水将BSA 标准(2mg/mL)稀释到50μg/mL，然后在标记的试管中加入下列成分(单位：μL)。注意：每个样品最好做三个稀释度，每个稀释度最好设置三次重复，阴性对照和标准品也最好做三次重复。

标准品(每个做三次重复，此处只列出一个)
编号	BSA 标准(50μg/mL)	水	总体积
阴性对照	0	0	200
1	0	200	200
2	25	175	200
3	50	150	200
4	100	100	200
5	150	50	200
6	200	0	200

 

样品(以1个样品、3个稀释度为例，每个稀释度三个重复，此处只列出一个)
编号	样品	总体积
1	200(稀释度1)	200
阴性对照1	200(用稀释度1稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)	200
2	200(稀释度2)	200
阴性对照2	200(用稀释度2稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)	200
3	200(稀释度3)	200
阴性对照3	200(用稀释度3稀释的溶解蛋白样品的缓冲液)	200

5．每管中加入200μl Lowry工作液，振荡混匀后室温反应10分钟。
6．每管中加入100μl 福林酚工作液，振荡混匀后室温反应30分钟。
7．用容量为0.5mL、光径为1 cm的玻璃比色杯或聚*乙*(代"烯")比色杯测定750nm的光吸收。测定时，先空白(即阴性对照)后样品，测定样品和BSA标准品时，先低浓度后高浓度。测定未知样品前需要将杯子清洗干净，必要时可以用甲醇清洗吸附到比色杯壁上的染料。
8．根据标准品三个重复的平均值绘制标准曲线，然后根据未知样品的光吸收从标准曲线中查得其对应的浓度。

三、96微孔板法
9．同上，只是反应用96 微孔板设置，用酶标测试仪750nm 测定光吸收。

四、样品中干扰物质的去除(本产品不含相关产品，如果样品中有干扰Lowry法蛋白定量的物质(见附表)，可另购本公司的微量蛋白质沉淀试剂盒(BTN81217)去除，也可以用自备试剂按下法去除：用水将样品调到体积为200μl，加入20μl 0.15%去氧胆酸*，混匀，室温放置10分钟。加入20μL 72%的TCA，室温放置5分钟。3000 g离心15分钟，小心去除上清。用200μl水溶解蛋白沉淀后以用于Lowry法测定。
附：常见Lowry法蛋白定量干扰物(低于所列浓度不干扰，高于所列浓度则会干扰，需要按上法去除。不能含任何浓度的DTE，DTT和硫*(代"酸")胺)。

干扰物	浓度	干扰物	浓度
Acetone	10%	2-Mercaptoethanol	1mM
Aprotinin	10mg/mL	NaCl	1 M
CHAPS	0.05%	NaOH	100mM
DMF	10%	NaPi	100mM
DMSO	10%	NP40	0.02%
EDTA	1mM	PMSF	1mM
EGTA	1mM	SDS	1%
Ethanol	10%	Sodium Citrate	100mM
Glucose	100mM	Sucrose	7%
Glycin	100mM	Tris	10mM
HEPES	1mM	Trition X-100	0.03%
Imidazole	25mM	Tween 20	0.05%
Methanol	10%	Urea	3M

疑难解答：
1. 该方法检测的蛋白质浓度范围1μg～50μg/ml。
2. 由于Lowry法测定的是蛋白质中酪*酸残基，对于那些酪*酸残基数高于或低于BSA,其测定的蛋白质含量将偏低或偏高。如果遇到该情况，需要采用BCA或Bradford法测定。
3. 阅读测定方法后化学试剂对测定方法的影响。


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·DNA促旋酶
编号：BTN130651
英文名称：DNA Gyrase(E.coli)
规格：100U
DNA促旋酶(E.coli)是一种II型拓扑异构酶，在ATP存在下向DNA中引入负超螺旋。促旋酶全酶是由两个gyrA亚基(97 kDa)和两个gyrB(90kDa)亚基组成的异源四聚体。本产品主要用于向DNA引入负超螺旋。其反应原理图如下：


储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位是指在30μl反应体系中，37℃条件下，30分钟内催化超过95%的0.5μg底物转变为超螺旋质粒所需的酶量。DNA超螺旋化通过不含*化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。

热灭火：65℃加热20分钟。

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