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- 2025年11月22日
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深圳市拓普生物科技有限公司
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流式凋亡检测
细胞凋亡（Cell apoptosis）是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下的损伤，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。
细胞凋亡检测的方法很多，我们采用的Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡的原理：磷脂酰丝氨酸（Phosphatidyl serine, PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行EGFP融合、荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针。
实验流程
细胞培养到一定密度后，加药处理。收集细胞，孵育抗体，准备上机样本；上机检测；结果分析；
结果提供
结果分析和实验报告，原始数据。
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文献和实验#01 什么是同型对照？ 同型对照（Isotype Control），是指与使用的流式抗体具有相同种属来源、亚型、荧光标记物、使用剂量和浓度，但对目标靶点无特异性结合的抗体。同型对照通常用来消除抗体与抗原的非特异性结合造成的背景染色。 #02 为什么要做同型对照？ 流式抗体与靶标的结合，是通过抗体的 Fab 端与靶标 Marker 进行特异性结合而完成的。白细胞（除T细胞外）表面大多表达 CD16、CD32、CD64 等 Fc 受体，这些受体可与各种抗体的 Fc 端非特异性结合，出现非特异
大部分老师做流式实验时，会用到空白对照、单阳对照、同型对照、生物学对照等，用到 FMO 对照的比较少。尽管如此，FMO 对照在设置圈门时仍具有重要的参考价值。 一方面，FMO 对照有助于精确地设置阴阳性群体界限。我们在做多色实验时，可能会出现某些通道信号难以区分的情况，主要是因为其他某个荧光对该通道的干扰很大。FMO 对照（Fluorescence Minus One，荧光扣除一）减少了其中一个通道的荧光抗体，能够帮助衡量其它通道的荧光漏溢情况。 如下图所示，PerCP/Cyanine
或者碱化等方法将 1% 的多聚甲醛溶于 PBS 或者蒸馏水中，但是，多聚甲醛一旦溶解形成溶液，它实际上就是甲醛溶液。 3.细胞是用 FACS 检测的 错误 1：FACS 是 Fluorescence Activated Cell Sorter的首字母缩写词，是荧光激活细胞分选仪，而检测细胞用到的是分析仪，而非分选仪。流式细胞仪应该是 Flow Cytometry，简写为 FCM。 错误 2：FACS 是 Becton Dickinson 的商品名，因此所有 FACS 都是流式细胞仪，但并非所有的流式
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