5 个常见的流式误区，你中招了吗?

1.FSC = 细胞体积大小

FSC（Forward Scatter，前向散射光），细胞散射光涉及光的折射、反射和衍射，是一个光学测量值。对FSC 影响最大的是细胞内部和外部折射率之间的差异，所以 FSC 可以辅助判断细胞的大小。但是细胞核质比、细胞颗粒的数量和类型以及细胞表面形状等因素也会影响细胞散射光。因此，不要总是认为较大的 FSC 一定等于较大的细胞体积。

2.细胞固定用的是 1％ 多聚甲醛（PFA）

多聚甲醛（PFA）是不溶于水的白色粉末，而在使用前我们需要将其配置成溶液：通过加热或者碱化等方法将 1% 的多聚甲醛溶于 PBS 或者蒸馏水中，但是，多聚甲醛一旦溶解形成溶液，它实际上就是甲醛溶液。

3.细胞是用 FACS 检测的

错误 1：FACS 是 Fluorescence Activated Cell Sorter的首字母缩写词，是荧光激活细胞分选仪，而检测细胞用到的是分析仪，而非分选仪。流式细胞仪应该是 Flow Cytometry，简写为 FCM。

错误 2：FACS 是 Becton Dickinson 的商品名，因此所有 FACS 都是流式细胞仪，但并非所有的流式细胞仪都叫 FACS。

4.我使用了红色的荧光染料

在显微镜下，被荧光素标记的细胞看起来是红色的，但是在做流式分析时，「红光」代表 640 nm 至 800nm 的光谱。APC、Vio 667、APC-Vio770、RFP 都是「红色」的，但它们的激发和发射光谱却大不相同。所以，在表述时应正确描述荧光素的具体名称，再查询其激发和发射波长信息，从而可以正确设置激发光和滤光片。

5.我使用了 FL1 通道测量荧光

如果在以前，流式细胞仪只能检测 1-2 种颜色，可以确定 FL1 是绿色荧光染料（如 FITC）的检测通道，但是现在，在某些细胞仪中，FL1 通道是在光谱上测量的第一个通道，很可能是紫光或紫外波长的检测通道，而非绿色荧光染料的检测通道。因此，在描述时，应至少表明分析指标、荧光染料和光学滤片信息。