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850
- 英文名:
BalbScript Reverse Transcriptase
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一周
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖北京现货M-MuLV反转录酶(没有RNase H活性)特价促销在内的分子生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:北京现货M-MuLV反转录酶(没有RNase H活性)特价促销
产地:国产|进口
英文名:BalbScript Reverse Transcriptase
规格:10kU
品牌:百奥莱博
编号:JN0011
本制品是通过基因重组技术克隆表达的缺失突变型RNase H-的M-MuLV反转录酶。一般的野生型M-MuLV(Moloney Murine Leukemia Virus)具有以下几种活性:依赖于RNA的DNA聚合酶活性;依赖于DNA的DNA聚合酶活性;RNase H活性。由于RNase H能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA,因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA。本酶的RNase H活性缺失,延伸能力强,可用于较长的cDNA合成,高比例的全长cDNA文库的构建以及Real Time RT-PCR反应等。
产品组成:
| 组份 | JN0011-10kU |
| MuLV反转录酶(200 U/μl) | 25μl |
| 5×M-MLV Buffer | 1ml |
产品用途:
1、1st-Strand cDNA的合成。
2、cDNA Probe的制备。
3、RT-PCR反应以及Realtime RT-PCR反应。
注意事项:
1、用DEPC处理实验用到的所有管子和枪头,或者购买已经证明无核酸酶的实验用具,整个实验过程戴手套并经常更换手套,避免RNA酶的污染。
2、确保所用试剂及超纯水中无RNA酶污染。
3、纯化过的RNA要保证不含有盐,金属离子,乙醇和*酚,因为以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。
实验步骤:
第一链cDNA合成反应体系:
1、按右侧表格顺序加入的反应物。
2、可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构,可先将模板和引物的 混合液轻轻混匀,短暂离心,65℃孵育5分钟,冰上冷却,离心,再置于冰上冷却。
3、轻轻混匀,离心。
4、如果使用Oligo(dT)18或者基因特异型引物,42℃孵育60分钟。如果使用随机六聚体引物,25℃先孵育5分钟,随后42℃孵育60分钟。
5、75℃加热5 min终止反应。
反应产物可直接用于PCR反应或者在-20℃保存少于一周的时间。如想延长保存时间,建议使用-70℃保存。
应用实例:
图例一)小鼠胚肝总RNA RT-PCR扩增。
泳道1-6总RNA量分别为10ng,1ng,0.1ng,0.01ng,0.001ng,0ng;20ul体系中反转录后取1ul用于PCR扩增。目的基因:GAPDH。
质量保证:经多次柱纯化,SDS-PAGE检测纯度大于95%,PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
活性定义:以Poly(rA)•Oligo(dT)为模板/引物,在37℃、10分钟条件下,掺入1 nmol的[3H] dTTP所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
常用反应体系:
| 模板RNA | 总RNA(0.1 ng~5 μg) poly(A) mRNA(10 pg~0.5 μg) 特异性RNA(0.01 pg~0.5 μg) |
| 引物 | Oligo (dT)18引物1μl 随机六聚体引物1 μl 基因特异性引物15-20 pmol |
| 5×Reaction Buffer | 4ul |
| RNA酶抑制剂(20U/ul) | 1ul |
| dNTP(各10mM) | 2.0μl |
| M-MuLV反转录酶(200U/ul) | 1μl |
| ddH2O(Nuclease Free) | 至20μl |
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·重组小鼠CNDP2(胞质非特异性二肽酶)
编号:JN1285
英文名称:Recombinant Mouse Cytosolic non-specific dipeptidase
规格:10μg|50μg|500μg|1mg
本品由我们的哺乳动物细胞表达系统制备而成,目的基因编码的Met1-Asn475在C端含有His标签。
CNDP2质量控制:>95%(还原性SDS-PAGE)
CNDP2制剂:液体
CNDP2保存:收到货后请置于-20℃,可保存6个月,避免反复冻融。
关于CNDP2:
Mouse cytosolic non-specific dipeptidase(CNDP2) is a cytoplasm protein which belongs to the peptidase M20A family. CNDP2 has 2 Isoform: Isoform 1 is ubiquitously expressed with higher levels in kidney and liver (at protein level). Isoform 2 is expressed in fetal tissues, it is only expressed in adult liver and placental tissues. CNDP2 hydrolyzes a variety of dipeptides including L-carnosine and has a strong preference for Cys-Gly. It is a cytosolic enzyme that can hydrolyze carnosine to yield l-histidine and beta-alanine. CNDP2 is highly expressed in the histaminergic neurons in the tuberomammillary nucleus, implying that it may supply histidine to histaminergic neurons for histamine synthesis. It may play a role as tumor suppressor in hepatocellular carcinoma (HCC) cells.
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