SMD1168菌株

毕赤酵母表达系统在外源基因表达中的研究进展及应用

和Pichia 2个种属，共有30余种［8］，其中尤以P.pastoris发展最快，研究最清楚。目前，用于外源基因表达的P.pastoris菌株为Invitrogen公司构建，主要有：Y11430，MG1003，GS115，KM71和SMD1168，其中Y11430为野生型，其余皆为组氨酸突变型，GS115有完整的aox1基因，在甲醇培养基上表型为Mut+，当用重组表达载体转化后，由于表达载体线化所用酶不同，其转化子表型可能是Mut+或Muts，可通过MD和MM培养基进行表型的鉴定；KM71的aox

影响外源基因在巴氏毕赤酵母中表达的因素

降解现象的原因就在于此。改变培养基的PH值、加入适量的酵母提取物和蛋白胨或酪蛋白水解物，都能够提高外源蛋白的稳定性，而某些酶抑制剂如EDTA，虽然也能增加其稳定性，但却常会使一些原先并不明显的蛋白变得非常明显，影响其使用效果。 　　另外，使用蛋白酶缺陷株如SMD1163、SMD1165或SMD1168亦可避免产物降解的发生。虽然并不是每一种外源蛋白都会受内源性蛋白酶的影响，但在未知其有无降解可能的情况下可以考虑使用此种宿主菌。 在另外一种情况下，如果基因工程产物会影响宿主菌生长代谢

酵母表达系统

醇的培养基上生长。最近，人们新推出了一类蛋白酶缺失型菌株，如SMD1163(his4 pep4 prb1)、SMD1165(his4 prb1)和SMD1168(his4 pep4)，解决了降解所造成的表达产物不均一性问题。但是，蛋白酶缺失型菌株生长缓慢，导致外源蛋白质产量上不去。 巴斯德毕赤酵母包括自我复制型游离载体和整合型载体，前者极不稳定，因此一般采用整合型载体。整合型载体含有一个启动子、相应的转录终止密码、筛选标记、抗生素抗性基因、在细菌中进行拷贝增殖所必需的序列以及3 ‘AOX1非编码区序列P