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3个月
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MiaoLingBio
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1000
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淼灵生物
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1管
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文献和实验Mutagenesis of Viral BACs With Linear PCR Fragments (ET Recombination)
Principle steps of mutagenesis. (A) Preparation of electrocompetent bacterial cells for mutagenesis. Prior to mutagenesis the plasmid pKD46, encoding the recombination functions, is introduced into DH10B containing the viral BAC. In the next step
系列):高拷贝会导致大片段质粒复制压力大,易丢失或断裂,优先用低拷贝载体(如 pACYC184,拷贝数 10-15)或大片段专用载体(如 BAC 载体 pBeloBAC11,可容纳 100kb 以上片段,在大肠杆菌中稳定存在); ④选择合适的连接方法,比如 Gibson 组装(无缝克隆)的方法更适合 10-20kb 大片段的连接,相比传统的 T4 连接的方法,成功率更高,操作更简便; ⑤选择重组缺陷型感受态,提高大质粒的转化效率,如 Stbl3、DH10B 等,此外转化方式也会影响转化
一步实现单拷贝到高拷贝的转换--Copy Control克隆技术(附图)
控制了!Epicentre的专利技术——CopyControl克隆 系统能够让您共享单拷贝和高拷贝的优点。CopyControl克隆,首先以单拷贝形式生长——单拷贝可以确保插入稳定及成功克隆,编码毒性基因序列——在需要的时候,再诱导成高拷贝克隆,以便下游应用所需。这一系统可以用来构建PCR克隆,对于BAC,fosmid文库等大型质粒格外有用。 一、CopyControl克隆系统有两个重要的成分: (一)CopyControl pCC1 Vector.
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