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MiaoLingBio
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文献和实验【求助】克隆100个已知序列的基因于带有绿色荧光蛋白的载体中需要多少时间和经费？
个和12,000个，其中11,000个克隆的表达已经通过Western Blot的验证。这些克隆以2种形式提供：一种是在表达的蛋白C末端带Myc-DDK(即FLAG)标签，一种是带GFP标签。这些cDNA克隆均构建于pCMV6入门载体上，可方便转换至其他目的载体。 按照其网页上的促销价：900RMB/clone × 100 ＝ 9万RMB， 直接买，不用等时间，就可搞定，批量买估计还可以讲价，关键的是品质有保证。 注：非公司托儿，因前段时间帮朋友筹划项目专门研究
的真核表达载体 amp/neo pcDNA 3.1(-) myc-hisC 含His标签的真核表达载体 amp/neo pcDNA4/HisB 含His标签的真核表达载体 amp/neo pcDNA3 flag 含flag标签的真核表达载体 amp/neo pIRES 一个真核双表达载体，外源序列只要是带有起始密码子和终止密码子就可以进行表达了，载体提供了转录装置PCMV和polyA。载体本身没有阅读框，只有转录起始位点，翻译的起始就由插入序列自己完成了。MCSB的共翻译
克隆 or 单克隆） --- 一、第一步：载体设计 载体元件由实验目的决定，逐项确认： 元件 选择要点 启动子 普遍高表达选 CMV、EF1α 等；需要模拟内源水平或避免沉默可考虑其他启动子 目的基因 CDS 序列；是否需要做 WB 决定是否加 Flag/HA 等融合标签 荧光标签 是否需要观察感染效率或做活细胞示踪（GFP/mCherry 等） 抗性基因 常用 puromycin（Puro），也可选新霉素（Neomycin）、杀稻瘟菌素（Blasticidin） 其他元件
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