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文献和实验相关专题 本实验采取碱裂解法的方法来提取质粒 ，之后经琼脂糖凝胶电泳来检测DNA。 质粒DNA 的提取与鉴定 (一)碱裂解法提取质粒 [实验原理] 碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂,但两条互补
值，若OD260 /OD280 > 2. 0，表明DNA 中含有RNA杂质。若OD260 /OD280 1. 2. 3 质粒DNA单酶切后的电泳检测[ 2 ] 分别取四种方法得到的质粒DNA 1μl，进行酶切。反应体系为20μl，在0. 5ml Eppendorf管中依次加入ddH2O，10 ×酶切反应缓冲液， BSA， 1μg质粒DNA，限制性内切酶Sma Ⅰ0. 5μl， 于37℃酶切2h， 加适当loadingbuffer混匀上样， 在0. 8%琼脂糖凝胶上电泳，采用5V / cm的电压
1．酶切反应 （1）在0.5ml Eppendorf管中加重蒸水6μl，10×Buffer 1μl，DNA 2μl，酶1μl，混匀，37℃水浴1h以上。 （2）取反应物点样，观察酶切效果。 （3）酶切完全后，70℃5min终止反应。 2．琼脂糖电泳 （1）配制所需浓度琼脂糖凝胶。 （2）在待测的DNA样品中加1/5体积的溴酚蓝指示剂，混匀后点样。 （3）打开电源开关，5V/cm电泳。
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