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MiaoLingBio
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1管
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文献和实验CRlSPR/Cas9是细菌和古生物菌用来抵抗外来质粒或噬菌体等遗传物质入侵的一种获得性免疫系统。利用CRlSPR/Cas9技术建立哺乳动物全基因组突变库或者与某类功能相关的基因突变体库，通过功能性筛选和富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析，发掘与筛选表型相关的基因，称为CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选。gRNA文库是药物筛选或靶向筛选特定通路的理想工具，gRNA文库的建立将在功能基因筛选、疾病机制研究及药物研发等方面发挥重要的功能。 CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选流程
CRISPR-Cas9 全程实操教程：从 gRNA 设计到挑单克隆全程指导
基本原理CRISPR-Cas9 是一种细菌获得性免疫，用于降解入侵的外源 DNA。CRISPR RNA (crRNA) 与转录激活 crRNA (Trans-activating crRNA， tracrRNA) 退火形成的复合物能特异性识别与其互补的基因组序列，引导 Cas9 核酸内切酶在目的片段生成 DNA 双链断裂，如下图所示。通过基因工程手段对 crRNA 和 tracrRNA 进行改造，将其连接在一起得到 sgRNA (single guide RNA)。通过将表达 sgRNA
DNA Oligo（引物）；3. 构建表达 sgRNA 的质粒 ；4. sgRNA 活性检测；5. 利用 Cas9 质粒建立 knock-out 细胞系 。本实验室老师也想跟跟潮流，弄个敲除细胞系出来，于是本小硕就被打发过来进行 CRISPR/Cas9 技术的学习，刚开始是一头雾水，后来在咨询有过分子生物学基础的博士师姐及科室其他老师后，终于是摸到一点门道了。我们都知道 gRNA 的设计对于 CRISPR/Cas9 基因敲除至关重要，而 gRNA 设计的关键是寻找正确的 CDS 序列。所以在这里
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