血清/血浆外泌体抽提试剂盒(外泌体提取分离)

产品描述：

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从血清/血浆中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

组分信息

产品特色：

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应用案例：

使用说明

1.样品制备：

1）收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用。

2）取1 mL血清/血液样品转移至离心管中，4℃，3000×g离心10 min，弃沉淀，并将上清转移至新的离心管中。

3）将转移的上清，4℃，12,000×g离心10 min，弃沉淀，将上清液转移至新的离心管中。

2.外泌体分离：

1）向预处理后的样品中，加入3倍体积的1×PBS充分混匀。

2）在PBS稀释后的样品中，继续加入相应量的41202-A试剂；盖紧离心管盖，涡旋振荡1 min，放置于2℃至8℃静置30 min以上（注：增加静止时间可以提高外泌体得率，但不可超过24 h）。

3）取出装有混合液的离心管，4℃，12,000×g离心15 min，弃上清（尽可能吸净上清液），收集富含外泌体的沉淀。

4）将含有沉淀的离心管再次于4℃，12,000×g离心2 min，弃上清（尽可能吸净上清液）。

5）吸取一定量体积的1×PBS溶液均匀吹打离心沉淀物，待其充分悬浮于PBS后，将悬液转移至新的1.5 mL离心管中。

【注】加入PBS的量，建议根据初始样本的体积决定，初始样本体积：1×PBS体积=1.25:1。

6）将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃，12,000×g离心2 min，弃沉淀，保留上清液，该上清液即富含外泌体颗粒的溶液。

【注】此时如果依然可以看到明显的沉淀，建议重复步骤6，重新进行洗涤和沉淀。

7）纯化后的外泌体可于4℃保存3天，-80℃长期保存，建议对外泌体进行分装后保存，避免反复冻融。

外泌体浓缩（可选）：

       如果获得的外泌体浓度比较低，可以使用密理博3kD孔径的超滤管于4℃，14000×g离心10-30 min，内管中即为纯化后的外泌体颗粒。

外泌体除菌（可选）：

       获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，建议外泌体蛋白浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。

注意事项

1．使用前请将外泌体抽提试剂（41202-A）充分混匀。

2．产品只针对血清/血浆样本，不适用其它体液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提；如果需要进行细胞上清外泌体分离，请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒。

3．如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

4．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5．本产品仅作科研用途！

储存条件：

室温运输，本试剂盒可于室温稳定保存24个月。

常见问题：

Q:41202 可以提取哪些样本的外泌体？

A:细胞上清液、尿液（可直接提取）、脑脊液（需处理后再提取）。其他的组织液包括体液、唾液、卵泡液、精液等提取效率较低，建议客户用专门的组织液提取试剂盒。

Q:外泌体血液样本提取需注意事项？

A:1.全血经过长时间放置，冷冻、离心、会发生溶血现象，无法提取外泌体，必须做好血清血浆的分离。2.去除血清外源的外泌体。

Q:如何去除血清外源的外泌体？

A:1.将细胞培养用的血清通过 1×105g 超速离心 10h，去除血清外泌体；

2. 选择无血清培养基进行细胞培养。

Q:无外泌体血清培养基/无血清培养基在什么时候使用？

A:细胞融合度达到 60%-70%时，换成新鲜的无外泌体血清培养基（或者无血清培养基），待细胞融合度达到 80%-95%左右时收取上清即可。