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- 详细信息
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Hieff Quick exosome isolation kit(for Serum/Plasma)
- 保质期:
2年
- 供应商:
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件:
常温
- 规格:
30ml
产品描述
本试剂盒采用独特的分离技术,可以快速从血清/血浆中获得大量完整的外泌体颗粒,适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量(qPCR)和高通量测序等应用。
产品组分
| 编号 | 组分 | 产品编号/规格 |
| 41202-A | Exosome isolation solution( Serum/Plasma) | 41202ES30/30 mL |
运输和保存方法
室温运输,本试剂盒可于室温稳定保存24个月。
注意事项
2、产品只针对血清/血浆样本,不适用其它体液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提;如果需要进行细胞上清外泌体分离,
请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒。
3、如果想要进一步纯化外泌体,可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作方法
样品预处理:
- 收集新鲜的样品,置于冰上待用;若为冻存的样品,可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻,待完全融化后置于冰上待用。
- 取1 mL血清/血液样品转移至离心管中,4℃,3000×g离心10 min,弃沉淀,并将上清转移至新的离心管中。
3、将转移的上清,4℃,10,000×g离心20 min,弃沉淀,将上清液转移至新的离心管中。
外泌体分离:
1、向预处理后的样品中,加入4倍体积的1×PBS充分混匀。
| Serum/Plasma+PBS | 41202-A试剂用量 |
| 200 μL+800 μL | 200 μL |
| 1.0 mL+4.0 mL | 1.0 mL |
2、在PBS稀释后的样品中,继续加入相应量的41202-A试剂;盖紧离心管盖,涡旋振荡1 min,放置于4℃冰箱静置2 h。
3、取出装有混合液的离心管,4℃,10,000×g离心60 min,弃上清(尽可能吸净上清液),收集富含外泌体的沉淀。
4、吸取一定量体积的1×PBS溶液均匀吹打离心沉淀物,待其充分悬浮于PBS后,将悬液转移至新的1.5 mL离心管中。
【注】加入PBS的量,建议根据初始样本的体积决定,初始样本体积:1×PBS体积=2.5:1。
5、将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃,12,000×g离心2 min,弃沉淀,保留上清液,该上清液即富含外泌体颗粒的溶液。
【注】此时如果依然可以看到明显的沉淀,建议重复步骤4,重新进行洗涤和沉淀。
6、纯化后的外泌体可于4℃保存3天,-80℃ 长期保存,建议对外泌体进行分装后保存,避免反复冻融。
外泌体纯化(可选):
鉴于血清/血浆中杂蛋白较多,如果后续需要进行细胞共培养或者高通量测序,建议进行进一步纯化。可以使用密理博100kD的孔径的超滤管于4℃以14,000×g离心10-30 min,内管中即为纯化后的外泌体颗粒;除此之外,还可以使用抗体包被的磁珠进行亲和纯化。
外泌体除菌(可选):
获得的外泌体后期需要与细胞共培养,可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时,外泌体浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索,选择一个较为合适的条件。
效果展示
| NTA粒径检测:结果显示通过Yeasen外泌体抽提获得的外泌体分散性好,大小均一,峰形单一。 | |
![]() | 样品来源:血液 检测仪器:ZetaView 上清用量:200μL |
| 表面标志物分析:通过Western Blot分析外泌体表面蛋白,可以很好的检测到TSG101,CD63和MHCC的存在。 | |
![]() | 样品来源:血液 裂解方式:RIPA裂解液 样品用量:200 μL |
| 核酸分析:通过Agilent 4200分析,可以检测到较为明显的外泌体小RNA条带,足以满足下游高通量测序的需求。 | |
![]() | 样品来源:血液 检测仪器:Agilent 4200 抽提方法:Trizol 样品用量:0.6 mL |
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| 货号 | 名称 | 规格 | |
| 外泌体分离 | 41201ES25/50 | HieffTM Quick exosome isolation kit(for Cell Culture Media) 细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒 | 25 mL/50 mL |
| 41202ES30 | HieffTM Quick exosome isolation kit( for Serum/Plasma) 血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒 | 30 mL | |
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| 36232ES10 | Precast Protein Improve Gels,, 8%, 10 wells 8% 高分辨率梯度预制胶,10孔 | 1盒(10块) | |
| 36233ES10 | Precast Protein Improve Gels,, 10%, 10 wells 10%高分辨率梯度预制胶,10孔 | 1盒(10块) | |
| 36234ES10 | Precast Protein Improve Gels,, 12%, 10 wells 12%高分辨率梯度预制胶,10孔 | 1盒(10块) | |
| 36235ES10 | Precast Protein Improve Gels,, 15%, 10 wells 15%高分辨率梯度预制胶,10孔 | 1盒(10块) | |
| 20351ES76 | GoldBand 3-color Regular Range Protein Marker(10-180 kDa)三色预染蛋白质分子量标准 | 2×250 μL | |
| 20352ES76 | GoldBand 3-color High Range Protein Marker(10-245kDa) 三色预染蛋白质分子量标准 | 2×250 μL | |
| 外泌体标记 | 40726ES10 | DiI (DiIC18(3)) 细胞膜橙红色荧光探针 | 10 mg |
| 40757ES25 | DiR Iodide (DiIC18(7)) 细胞膜深红色荧光探针 | 25 mg |
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文献和实验外泌体(Exosomes)是细胞分泌到胞外的一种囊泡,大小为 30-150 nm,携带了各种核酸、蛋白质和脂类等物质,可以在不同细胞间进行传递和交流,从而影响受体细胞的生物学功能。 肿瘤细胞来源的外泌体不仅能帮助肿瘤细胞自身发生侵袭和转移,也能促进肿瘤微环境其他细胞的状态发生改变。外泌体在肿瘤中起的作用若要深入研究,这就需要我们拿到更多的肿瘤来源的外泌体。 目前肿瘤方向的研究多使用肿瘤细胞的培养上清来提取外泌体,但是现在我们可以直接利用肿瘤组织来提取外泌体,一方面减少了大量体外
我们选取几种常见的样本分别介绍样本处理的要求: 细胞培养上清:选用这种样本的优势是不会受到样本量的限制,但是需要注意以下几点:一是一定不能添加含有外泌体的 FBS;二是细胞一般培养 24-48h 后即可分离外泌体;三是注意细胞不允许有污染、细胞死亡率要控制在 5% 之内。 血清/血浆:选用血液作为样本时,要注意血清和血浆的区别。血清是血液凝固之后收集的液体,如果研究与血小板相关的疾病,选用血清作为样本比较合适;血浆是血液去除了血细胞之后得到的液体,一般情况下选择血浆更合适。尽量在采血 30min
生长的无血清替代培养基。 2、血液 外泌体血液样本提取时,血清和血浆都可以正常提取。如果提供全血,是无法完成的, 必须提前做好血清或者血浆的分离。以下是全血、血浆、血清的区别: 全血:通过采血管采集后,经过抗凝处理的全部血液。 血浆:经过抗凝处理的全血,进行低速离心后的上清液,为淡黄色液体。 血清:不经过抗凝处理的血液,让它自行凝固,再进行低速离心后的上清液,为淡黄色液体。 全血经过长时间放置,或通过冷冻、或高速离心后,会发生溶血,此时无法提取外泌体。所以,一定要提前做好血清或者血浆














