商品货号: |
商品品牌: |
规格 |
基本售价: |
选择规格 |
P8370-100ml |
Solarbio |
100ml |
760.00元 |
|
|
|
|
|
说明:适合分离细胞,亚细胞成分和大病毒(>70S),渗透压均匀,粘度低,可调至生理离子强度和pH,分离条件温和,对细胞无毒性,可以灭菌消毒。 |
密度:1.13g/ml |
储存条件:2-8℃ |
密度:1.13g/ml
适合分离细胞,亚细胞成分和大病毒(>70S),渗透压均匀,粘度低,可调至生理离子强度和pH,分离条件温和,对细胞无毒性,可以灭菌消毒。
Percoll分离液是一种经过聚乙烯pi咯烷酮处理过的硅胶颗粒,经过高速离心后可形成连续密度梯度,由于Percoll扩散常数低,所形成的梯度十分稳定。Percoll分离液采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200~1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。此外,Percoll分离液不穿透生物膜,对细胞无毒害,因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒,还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。Percoll常用于分离和传话植物原生质体、核、叶绿体、和线粒体。
Percoll分离液的配置与使用
1、不同浓度(密度)Percoll分离液的制备: 先用9份Percoll分离液与1份8.5% NaCl混合达到生理性渗透压,然后用生理溶液(0.85% NaCl)稀释到所需浓度。
2、不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润,除去多余血清,这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下,使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置,有时相邻两层Percoll比重相差不大时,可将Percoll液放入注射器中,小针头斜面紧贴管壁,任其自然慢慢流下。
3、装样:样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异,一般加样体积不宜过大,细胞浓度也不可过高,否则会影响细胞的分离和回收。
4、离心:一般采用离心力为400g,时间20~25min。由于多层Percoll之间密度差别不大,因此离心机加速、降速时要慢,要平稳。
5、取样:当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时,可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。
Percoll细胞分离液的优点
Percoll渗透性低、不穿透细胞、密度高、无毒害,是目前较理想的介质。Percoll密度梯度离心已被多次成功地用于动物细胞及其细胞器的分离,纯化了包括人血液细胞、骨髓细胞、红血球细胞、白血球细胞、淋巴细胞、肝细胞等在内的十余种动物细胞。
Percoll细胞分离液注意事项:
1、Percoll细胞分离液在储存及孵育过程中避免将实际保留在强光中。
2、试剂瓶盖需盖紧,防止蒸发和污染。
北京索莱宝科技有限公司生产销售Percoll细胞分离液货号为P8370。适合分离细胞、亚细胞成分和大病毒(>70s),渗透压均匀,粘度低,可调至生理离子强度和pH,分离条件温和,对细胞无毒性,可以灭菌消毒。密度为1.13g/ml。
Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞
(一) 原理
Percoll是一种包有乙烯pi咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低(<20mosm/kg H2O), 粘度也很小,可形成高达1.3g/ml密度,采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200~1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数低,所形成的梯度十分稳定。此外,Percoll不穿透生物膜,对细胞无毒害,因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒,还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。
(二)操作方法及注意事项
1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。
Percoll浓度(%) 70 60 50 40 30 20
比重g/ml 1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.031
2.不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润,除去多余血清,这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下,使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置,有时相邻两层Percoll比重相差不大时,可将Percoll液放入注射器中,小针头斜面紧贴管壁,任其自然慢慢流下。
3.装样:样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异,一般加样体积不宜过大,细胞浓度也不可过高,否则会影响细胞的分离和回收。
4.离心:一般采用离心力为400g,时间20~25min。由于多层Percoll之间密度差别不大,因此离心机加速、降速时要慢,要平稳。
5.取样:当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时,可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。
(三)分离纯化细胞举例
1.富含NK活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化:按顺序由下向上逐层加50%、47.5%、45%、42.5%和40%五种不同密度的Percoll,如用10ml试管(或塑料管)分离,每层Percoll约1.2~1.5ml,初步从外周血中分离的PBMC细胞1×108悬于1ml培基中,按要求装样、离心和取样。一般富含NK杀伤活性的LGL细胞位于42.5%与45%Percoll界面以及上下二层的Percoll液中。
2.纯化淋巴母细胞和除去死细胞:分别叠加50%和30%Percoll液。收取经PHA(或其它抗原、有丝分裂原)刺激PBMC,或含有较高比例异型的PBMC(如肾综合征出血热患者),按要求装样、离心和取样。位于管底的淋巴细胞为小淋巴细胞;两层Percoll之间为淋巴母细胞,纯度和回收率在80%以上,位于30%Percoll表面是死细胞。收获淋巴母细胞可进行表型、结构以及功能的研究。
(四) 人不同血细胞的漂浮密度
表 人不同血细胞的漂浮密度
──────────────┬──────────────────
细 胞 漂浮密度 │ 细 胞 漂浮密度
──────────────┼──────────────────
红细胞 1.09-1.11 │淋巴细胞 1.052-1.077
粒细胞 │ B淋巴细胞 1.062-1.075
嗜酸性 1.09-1.095 │ T淋巴细胞 1.065-1.077
嗜中性 1.080-1.085 │ 淋巴母细胞 1.065-1.077
单核细胞 1.050-1.066 │自然杀伤细胞 1.050-1.070
血小板 1.030-1.060 │
适合分离细胞,亚细胞成分和大病毒(>70S),渗透压均匀,粘度低,可调至生理离子强度和pH,分离条件温和,对细胞无毒性,可以灭菌消毒。
Percoll分离液是一种经过聚乙烯pi咯烷酮处理过的硅胶颗粒,经过高速离心后可形成连续密度梯度,由于Percoll扩散常数低,所形成的梯度十分稳定。Percoll分离液采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200~1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。此外,Percoll分离液不穿透生物膜,对细胞无毒害,因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒,还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。Percoll常用于分离和传话植物原生质体、核、叶绿体、和线粒体。
Percoll分离液的配置与使用
1、不同浓度(密度)Percoll分离液的制备: 先用9份Percoll分离液与1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。
2、不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润,除去多余血清,这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下,使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置,有时相邻两层Percoll比重相差不大时,可将Percoll液放入注射器中,小针头斜面紧贴管壁,任其自然慢慢流下。
3、装样:样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异,一般加样体积不宜过大,细胞浓度也不可过高,否则会影响细胞的分离和回收。
4、离心:一般采用离心力为400g,时间20~25min。由于多层Percoll之间密度差别不大,因此离心机加速、降速时要慢,要平稳。
5、取样:当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时,可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。
Percoll细胞分离液的优点
Percoll渗透性低、不穿透细胞、密度高、无毒害,是目前较理想的介质。Percoll密度梯度离心已被多次成功地用于动物细胞及其细胞器的分离,纯化了包括人血液细胞、骨髓细胞、红血球细胞、白血球细胞、淋巴细胞、肝细胞等在内的十余种动物细胞。
Percoll细胞分离液注意事项:
1、Percoll细胞分离液在储存及孵育过程中避免将实际保留在强光中。
2、试剂瓶盖需盖紧,防止蒸发和污染。
北京索莱宝科技有限公司生产销售Percoll细胞分离液货号为P8370。适合分离细胞、亚细胞成分和大病毒(>70s),渗透压均匀,粘度低,可调至生理离子强度和pH,分离条件温和,对细胞无毒性,可以灭菌消毒。密度为1.13g/ml。
参考文献:
《Assessing Autophagy in the Leydig Cells》 作者:Hui Gao,Chao Liu,Wei Li 期刊:Autophagy in Differentiation and Tissue Maintenance 影响因子: PMID:
《Traditional Herbal Medicine-Derived Sulforaphene LFS-01 Reverses Colitis in Mice by Selectively Altering the Gut Microbiota and Promoting Intestinal Gamma-Delta T Cells》 作者:Ming Li, Jiali Gao, Yan Tang, Meishuo Liu, Sijin Wu, Kunli Qu, Xiangyu Long, Huajun Li, Min Li, Yinhui Liu, Jieli Yuan, Lei Mao, Yu Liu, Xiliang Zheng, Erkang Wang, Jin Wang and Yongliang Yang 期刊:Frontiers in Spotlight 影响因子:4.259 PMID:29375374
《Adenovirus?mediated knockdown of activin A receptor type 2A attenuates immune?induced hepatic fibrosis in mice and inhibits interleukin?17?induced activation of primary hepatic stellate cells》 作者:Hongjun Zhang,Baoling Ju,Ying Nie,Baohui Song,Yuanhong Xu,Ping Gao 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影响因子:2.784 PMID:
《Overexpression of heme oxygenase‐1 in microenvironment mediates vincristine resistance of B‐cell acute lymphoblastic leukemia by promoting vascular endothelial growth factor secretion》 作者:Kunlin Yu Jishi Wang Tingting Lu Dan Ma Danna Wei Yongling Guo Bingqin Cheng Weili Wang Qin Fang 期刊:J. Cell. Biochem. 影响因子:3.448 PMID:31264739
《Oroxylin a Inhibits the Protection of Bone Marrow Microenvironment on CML Cells Through CXCL12/CXCR4/P-gp Signaling Pathway》 作者:Hanbo Cao1, Wenjun Li1, Yizhou Zhou1, Renxiang Tan2, Yue Yang1, You Zhou1, Qinglong Guo1* and Li Zhao 期刊:Front Oncol 影响因子:4.137 PMID:31024831
《Molecular characterization and biological functioning of interleukin-8 in Siberian sturgeon (Acipenser baeri)》 作者:Xiaowen Wang,Guoqing Ma,Rong Zhang,Lili Liu,Jianya Zhu,Hua Zhu 期刊:Fish Shellfish Immunol. 影响因子:3.298 PMID:30978450
《MiR-146a regulates osteogenic differentiation and proliferation of bone marrow stromal cells in traumatic femoral head necrosis》 作者:Y. Kong, Z.-T. Chen 期刊:Eur Rev Med Pharmacol Sci 影响因子:2.721 PMID:30720149